【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术检测领域，具体的涉及一种检测禽呼肠孤病毒的间接elisa抗体检测试剂盒。
技术介绍
1、禽呼肠孤病毒(avianreovirus,arv)是呼肠孤病毒科，正呼肠孤病毒属的成员。该病毒感染引起能够引起禽类多种疾病，主要有病毒性关节炎、矮小综合征、呼吸道疾病、肠道疾病、心包炎、肠炎、肝炎、法氏囊及胸腺萎缩等，其中以病毒性关节炎/腱鞘炎为主要特征，自然感染发病多见于4～7周龄。感染的鸡群精神沉郁，喜卧倦动，跗关节肿胀，严重者表现为跛行。此外，该病毒的感染不仅发生在肉鸡，在蛋鸡上也偶见发生。1日龄雏鸡对该病毒的易感性最高，感染后的死亡率能达到2％～9％，发病率在5％～60％，甚至100％。禽呼肠孤病毒流行于鸡、火鸡、鸭、鹦鹉和其它禽类，可水平传递亦可经卵垂直传递。呼肠孤病毒也能加剧由其它病原引起的疾病，如鸡贫血因子、大肠埃希氏杆菌和新城疫病毒。由于感染了呼肠孤病毒，使机体的免疫功能降低，导致对其它传染性病因的易感性增加。
2、arv具有典型的呼肠孤病毒形态，病毒粒子为20面体对称，无囊膜，具有双层核衣壳结构，外部直径约为75nm。病毒基因组为双股rna，共分为10个基因片段，大小约23kb。基因组编码的蛋白质包括10个结构蛋白和4个非结构蛋白，其中s2基因编码的sigma-a蛋白含416个氨基酸，是病毒内壳结构的主要成分，sigma-a蛋白参与arv的抗干扰素过程，可协助arv应对宿主的免疫防御机制。有报道称，sigma-a蛋白具备核苷酸焦磷酸水解酶活性，可为arv的转录复制过程提供能量，sigma-a
3、arv感染一般根据流行病学调查、临床症状及病理变化来进行诊断。由于arv易与多种病原微生物继发混合感染，因而需通过实验室手段进一步鉴定，包括病原分离鉴定、琼脂扩散试验、病毒中和试验、荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验等分子生物学以及血清学检测方法。然arv传播迅速，琼脂扩散试验无法检测滴度过低的抗体，在分子生物学诊断技术方面，由于arv不同分离株具有较高的序列多样性，这在一定程度上限制了pcr方法的检测效果，因而建立一种广谱性的血清学诊断方法，是临床诊断、疫苗检验和流行病研究的迫切需求。
技术实现思路
1、本专利技术通过分析sigma-b蛋白序列信息进行二级结构、亲疏水性、抗原性等分析，选取抗原重组表位，构建至原核表达载体，纯化制备蛋白质标准品并包被到elisa酶标板上，用于检测禽血清，建立能检测arv抗体的elisa方法，以达到对arv感染和疫苗免疫进行特异性鉴定的目的。
2、第一方面，本专利技术提供一种禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽，所述sigma-b蛋白抗原肽的氨基酸序列如seq id no.1所示；
3、aspglyasntyrpheprohishislyscyshisglnglnglnpheargthraspthrproleuleuargtyrvalargileglyargthrthrgluhisleuleuaspglntyralavalalaleugluserilealaasphistyraspgluileserglnargmetvalaspgluprogluseraspgluvalalaproleuaspilevalthrargthrgluserileargserasplysalavalaspproaspphetrpthrtyrproleugluargargseraspaspserargargaspilealaseralacystrpargmetileaspalaserserargserleuthrleuproasncysleuvalserproserleuhisserargservalpheglyglnmetglnthrthrthrthriletyraspvalalaalaserglylysalavallyspheserprometvalalathrleuserglnargaspalaglyprovalmetleualaasnalaaspproalagluglyvaltyrserphetrpthrserhisphealapheserproleuileglyglyvalglyilethrglyglntyralaargglusertyrhisglnvalglyhisprovalileglyserglylyslysalaserhistyrargasnleuphemetglusertrpargglytrpserlysseralaphealatyralathrglymetgluproalaglucysgluserargleuargglyhisalaargthrmetleuglyargserleuprohisvalcysaspaspgluvalalaglnglnserglyalavalleuthrserleuglnlysthrasnlysphe。
4、进一步的，所述禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽还包括含有80％-100％的同源序列的多肽。
5、第二方面，本专利技术提供一种构建体，其包含第一方面所述禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽的核酸分子。
6、进一步的，所述核酸分子编码如本专利技术第一方面所述的禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽的核酸分子。
7、第三方面，本专利技术提供一种检测禽呼肠孤病毒抗体的试剂盒，所述试剂盒包括检测本专利技术第一方面所述的sigma-b蛋白抗原肽。
8、进一步的，所述检测禽呼肠孤病毒抗体的试剂盒还含有酶标二抗、洗涤液、样品稀释液、终止液等。
9、进一步的，所述样品稀释液和洗涤液是磷酸缓冲液(pbs)。
10、进一步的，所述抗体检测试剂盒还包括pvc底板、金标垫、样品垫和吸水垫。
11、第四方面，本专利技术提供一种sigma-b蛋白抗原肽在制备检测禽呼肠孤病毒抗体的试剂盒中的应用，所述应用是通过测定受试禽血清的s/p值来实现。
12、进一步的，所述s/p值＝(临床样品od450nm值－阴性对照血清od450nm均值)/(阳性对照血清od450nm均值－阴性对照血清od450nm均值)。
13、进一步的，当受试禽血清的s/p值≥0.35时，判定为阳性；当受试禽血清的s本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种禽呼肠孤病毒Sigma-B蛋白抗原肽，所述Sigma-B蛋白抗原肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
2.如权利要求1所述的禽呼肠孤病毒Sigma-B蛋白抗原肽，其特征在于，所述禽呼肠孤病毒Sigma-B蛋白抗原肽还包括含有80％-100％的同源序列的多肽。
3.一种构建体，其包含第一方面所述禽呼肠孤病毒Sigma-B蛋白抗原肽的核酸分子。
4.如权利要求3所述的构建体，其特征在于，所述核酸分子编码如权利要求1所述的禽呼肠孤病毒Sigma-B蛋白抗原肽的核酸分子。
5.一种检测禽呼肠孤病毒抗体的试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求1所述的Sigma-B蛋白抗原肽。
6.如权利要求5所述的检测禽呼肠孤病毒抗体的试剂盒，其特征在于，所述检测禽呼肠孤病毒抗体的试剂盒还含有酶标二抗、洗涤液、样品稀释液、终止液。
7.如权利要求5所述的检测禽呼肠孤病毒抗体的试剂盒，其特征在于，所述抗体检测试剂盒还包括PVC底板、金标垫、样品垫和吸水垫。
8.一种Sigma-B蛋白抗原肽在制备检测禽呼肠孤病毒抗体
9.如权利要求8所述的Sigma-B蛋白抗原肽在制备检测禽呼肠孤病毒抗体的试剂盒中的应用，其特征在于，所述S/P值＝(临床样品OD450nm值－阴性对照血清OD450nm均值)/(阳性对照血清OD450nm均值－阴性对照血清OD450nm均值)。
10.如权利要求8所述的Sigma-B蛋白抗原肽在制备检测禽呼肠孤病毒抗体的试剂盒中的应用，其特征在于，当受试禽血清的S/P值≥0.35时，判定为阳性；当受试禽血清的S/P＜0.35时，判定为阴性。
...【技术特征摘要】
1.一种禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽，所述sigma-b蛋白抗原肽的氨基酸序列如seq id no.1所示；
2.如权利要求1所述的禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽，其特征在于，所述禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽还包括含有80％-100％的同源序列的多肽。
3.一种构建体，其包含第一方面所述禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽的核酸分子。
4.如权利要求3所述的构建体，其特征在于，所述核酸分子编码如权利要求1所述的禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽的核酸分子。
5.一种检测禽呼肠孤病毒抗体的试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求1所述的sigma-b蛋白抗原肽。
6.如权利要求5所述的检测禽呼肠孤病毒抗体的试剂盒，其特征在于，所述检测禽呼肠孤病毒抗体的试剂盒还含有酶标二抗、洗涤液、样...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯力丹，毛娅卿，翟天舒，陈晓春，苏佳，吴华伟，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：
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