【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术检测领域，具体的涉及能够广谱性的鉴定禽呼肠孤病毒的间接免疫荧光检测试剂盒。
技术介绍
1、禽呼肠孤病毒(avianreovirus,arv)是呼肠孤病毒科，正呼肠孤病毒属的成员。该病毒感染引起能够引起禽类多种疾病，主要有病毒性关节炎、矮小综合征、呼吸道疾病、肠道疾病、心包炎、肠炎、肝炎、法氏囊及胸腺萎缩等，其中以病毒性关节炎/腱鞘炎为主要特征，自然感染发病多见于4～7周龄。感染的鸡群精神沉郁，喜卧倦动，跗关节肿胀，严重者表现为跛行。此外，该病毒的感染不仅发生在肉鸡，在蛋鸡上也偶见发生。1日龄雏鸡对该病毒的易感性最高，感染后的死亡率能达到2％～9％，发病率在5％～60％，甚至100％。禽呼肠孤病毒流行于鸡、火鸡、鸭、鹦鹉和其它禽类，可水平传递亦可经卵垂直传递。呼肠孤病毒也能加剧由其它病原引起的疾病，如鸡贫血因子、大肠埃希氏杆菌和新城疫病毒。由于感染了呼肠孤病毒，使机体的免疫功能降低，导致对其它传染性病因的易感性增加。呼肠孤病毒感染世界各地均有发生，2012年，在2个省份地区检测到阳性病例；2016年，arv感染已扩增到8个省份；arv样品检测阳性率也从2012年的5％提高到2015年的52％。数据分析显示，arv在我国各地区鸡群中普遍存在，并且呈现出流行范围逐渐扩大、感染率升高的趋势。
2、arv具有典型的呼肠孤病毒形态，病毒粒子为20面体对称，无囊膜，具有双层核衣壳结构，外部直径约为75nm。病毒基因组为双股rna，共分为10个基因片段，大小约23kb。基因组编码的蛋白质包括10个结构蛋白和4个
3、arv感染一般根据流行病学调查、临床症状及病理变化来进行诊断。由于arv易与多种病原微生物继发混合感染，因而需通过实验室手段进一步鉴定，包括病原分离鉴定、琼脂扩散试验、病毒中和试验、荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验等分子生物学以及血清学检测方法。然arv传播迅速，琼脂扩散试验无法检测滴度过低的抗体；另外arv在商品鸡、鸭群中广泛存在，并且arv在不同地区、不同品种、不同年龄的鸡群及野鸟中的感染趋势日渐增加，arv的变异及进化的报道不断增加，新的变异毒株也不断出现，所以用血清学分析诊断是比较困难的，这对arv的防控提出了新的要求。在分子生物学诊断技术方面，原位杂交及pcr方法为常用方法，而arv不同分离株具有较高的序列多样性，这在一定程度上可能限制了pcr方法的检测效果，因而建立一种广谱性的诊断方法，是临床诊断、疫苗检验和流行病研究的迫切需求。
技术实现思路
1、本专利技术通过分析sigma-b蛋白序列信息进行二级结构、亲疏水性、抗原性等分析，选取抗原重组表位，构建至原核表达载体，并进行表达纯化，制备免疫原进行单克隆抗体的制备，并且制备了禽呼肠孤病毒的间接免疫荧光检测试剂盒，能够广谱性的鉴定禽呼肠孤病毒，可应用于禽病毒类活疫苗中禽呼肠孤病毒的外源病毒检测，以及临床检测和流行病学调查。
2、第一方面，本专利技术提供一种禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽，所述sigma-b蛋白抗原肽的氨基酸序列如seq id no.1所示；
3、aspglyasntyrpheprohishislyscyshisglnglnglnpheargthraspthrproleuleuargtyrvalargileglyargthrthrgluhisleuleuaspglntyralavalalaleugluserilealaasphistyraspgluileserglnargmetvalaspgluprogluseraspgluvalalaproleuaspilevalthrargthrgluserileargserasplysalavalaspproaspphetrpthrtyrproleugluargargseraspaspserargargaspilealaseralacystrpargmetileaspalaserserargserleuthrleuproasncysleuvalserproserleuhisserargservalpheglyglnmetglnthrthrthrthriletyraspvalalaalaserglylysalavallyspheserprometvalalathrleuserglnargaspalaglyprovalmetleualaasnalaaspproalagluglyvaltyrserphetrpthrserhisphealapheserproleuileglyglyvalglyilethrglyglntyralaargglusertyrhisglnvalglyhisprovalileglyserglylyslysalaserhistyrargasnleuphemetglusertrparggly trpserlysseralaphealatyralathrglymetgluproalaglucysgluserargleuargglyhisalaargthrmetleuglyargserleuprohisvalcysaspaspgluvalalaglnglnserglyalavalleuthrserleuglnlysthrasnlysphe。
4、进一步的，所述禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽还包括含有80％-100％的同源序列的多肽。
5、第二方面，本专利技术提供一种构建体，其包含第一方面所述禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽的核酸分子。
6、进一步的，所述核酸分子编码如本专利技术第一方面所述的禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽的核酸分子。
7、第三方面，本专利技术提供一种抗体及其组合物，所述抗体为含有禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽的抗体。
8、进一步的，所述抗体为单克隆抗体，所述单克隆抗体由保藏信息为【命名：禽呼肠孤病毒单克隆抗体细胞株mab-s本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种禽呼肠孤病毒Sigma-B蛋白抗原肽，所述Sigma-B蛋白抗原肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
2.权利要求1所述的禽呼肠孤病毒Sigma-B蛋白抗原肽，其特征在于，所述禽呼肠孤病毒Sigma-B蛋白抗原肽还包括含有80％-100％的同源序列的多肽。
3.一种构建体，其包含如权利要求1所述的禽呼肠孤病毒Sigma-B蛋白抗原肽的核酸分子。
4.一种抗体及其组合物，所述抗体为含有禽呼肠孤病毒Sigma-B蛋白抗原肽的抗体。
5.如权利要求4所述的抗体及其组合物，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体，所述单克隆抗体由保藏信息为【命名：禽呼肠孤病毒单克隆抗体细胞株Mab-Sigma-B-10#；保藏单位：中国科学院微生物研究所；保藏日期：2023年10月27日；保藏编号为：CGMCC NO.45736】的杂交瘤细胞产生，所述的单克隆抗体与常见的禽呼肠孤病毒流行株均具有良好反应性。
6.如权利要求4所述的抗体及其组合物，其特征在于，所述抗体还包括其抗原结合片段的核酸分子，或包含所述核酸分子的载体或宿主细胞。p>
7.一种检测禽呼肠孤病毒的试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求4-6任一项所述的禽呼肠孤病毒的单克隆抗体。
8.一种杂交瘤细胞，其保藏信息为：命名：禽呼肠孤病毒单克隆抗体细胞株Mab-Sigma-B-10#；保藏单位：中国科学院微生物研究所；保藏日期：2023年10月27日；保藏编号为：CGMCC NO.45736。
9.一种禽呼肠孤病毒的免疫组合物，所述免疫组合物含有如权利要求1所述的抗原肽和/或含有如权利要求3所述的构建体和/或含有如权利要求4-6任一项所述的抗体及其组合物和/或含有如权利要求8所述的杂交瘤细胞和佐剂。
10.如权利要求9所述的禽呼肠孤病毒的免疫组合物，其特征在于，所述组合物可以制备为疫苗、检测试剂或其他生物诊断试剂。
...【技术特征摘要】
1.一种禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽，所述sigma-b蛋白抗原肽的氨基酸序列如seq id no.1所示；
2.权利要求1所述的禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽，其特征在于，所述禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽还包括含有80％-100％的同源序列的多肽。
3.一种构建体，其包含如权利要求1所述的禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽的核酸分子。
4.一种抗体及其组合物，所述抗体为含有禽呼肠孤病毒sigma-b蛋白抗原肽的抗体。
5.如权利要求4所述的抗体及其组合物，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体，所述单克隆抗体由保藏信息为【命名：禽呼肠孤病毒单克隆抗体细胞株mab-sigma-b-10#；保藏单位：中国科学院微生物研究所；保藏日期：2023年10月27日；保藏编号为：cgmcc no.45736】的杂交瘤细胞产生，所述的单克隆抗体与常见的禽呼肠孤病毒流行株均具有良好...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯力丹，吴华伟，刘丹，薛麒，杨承槐，黄小洁，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：
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