【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及兽用生物制品及免疫检测，尤其涉及一种杂交瘤细胞株mab-gi-37及其分泌的抗鸭瘟病毒单克隆抗体及应用。
技术介绍
1、鸭瘟(duck plague)，也称为鸭病毒性肠炎(duck virus enteritis)，是一种在鸭、鹅等雁形目禽类中存在的急性、热性、败血性传染病。其病原为鸭肠炎病毒(duckenteritis virus)/或称鸭瘟病毒(duck plague virus)/或称鸭疱疹病毒1型(anatidherpesvirus 1,ahv-1)。其特征是血管损伤、组织出血、消化道粘膜糜烂、淋巴器官出现病变、实质器官退行性病变。1923年荷兰首次报道了该病，1957年，黄引贤在我国最早报道该病并分离到病毒。该病发病率和死亡率很高，对水禽养殖业危害很大。
2、目前预防鸭瘟的主要措施为疫苗免疫接种，常用的疫苗有灭活疫苗和活疫苗。devp80是现有技术中已知的一种鸭瘟病毒细胞传代毒株，其通过将鸭瘟病毒强毒dev csc株经cef连续传代80代，经蚀斑纯化获得。dev p80株具有良好的免疫原性和安全性，可作为鸭瘟病毒活疫苗(细胞源)的候选毒株。此外，该毒株还可作为活载体，与禽流感病毒、新城疫病毒、鸭肝炎病毒等水禽常发多发性疾病病原构建活载体二联疫苗，具有良好的应用前景。
3、基于兽用生物制品生产对生产种毒的特异性要求，需要建立一种准确区分鸭瘟病毒细胞传代毒与其他毒株的简便易行的方法，确保生产种毒的特异性符合相关规定。现有研究中对如何区分鸭瘟病毒细胞传代毒与其他毒株的研究较少，限值了de
4、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提供一种杂交瘤细胞株(mus musculus hybridoma)mab-gi-37及其分泌的抗鸭瘟病毒单克隆抗体及应用。所述杂交瘤细胞株mab-gi-37可稳定、高效的分泌抗鸭瘟病毒的单克隆抗体，并可实现大批量规模生产。利用其分泌的抗鸭瘟病毒的单克隆抗体，可准确区分鸭瘟病毒细胞传代毒与其他鸭瘟病毒。
2、具体的，本专利技术的技术方案如下：
3、第一方面，本专利技术利用鸭瘟病毒gi蛋白99-275aa为实验材料，通过蛋白表达、纯化，免疫小鼠获得杂交瘤细胞株mab-gi-37并将其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称cgmcc)，保藏编号cgmcc no.45634；分类命名：杂交瘤细胞(musmusculus hybridoma)；保藏时间：2023年7月26日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
4、dev p80基因组145818-147618位核苷酸缺失，共1801bp，导致us7基因3’端的1068bp、us8基因5’端的510bp以及us7、us8基因间的223bp非编码区缺失(图7)。
5、本专利技术通过系统分析dev不同毒株参考序列，选取p80株缺失、其他毒株相对保守的gi序列为基础，选取99-275aa作为免疫原，对密码子进行优化、合成后，克隆至pet30a-gst原核表达载体，并转化至bl21菌株进行诱导表达，用于dev单克隆抗体制备的免疫原。然后将免疫原蛋白免疫balb/c小鼠，60μg/只，初免后加强免疫3次，通过免疫原蛋白包被板子，elisa筛选出只针对目的蛋白的阳性单克隆细胞株mab-gi-37。该阳性单克隆细胞株可稳定、高效的分泌抗鸭瘟病毒的单克隆抗体，并可实现大批量规模生产。
6、第二方面，本专利技术提供了一种抗鸭瘟病毒单克隆抗体，所述抗鸭瘟病毒单克隆抗体由所述的杂交瘤细胞株mab-gi-37分泌获得。
7、本专利技术提供的抗鸭瘟病毒单克隆抗体能与鸭瘟病毒gi蛋白产生特异性免疫反应。
8、在本专利技术中，所述鸭瘟病毒gi蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示，其对应的优化基因序列seq id no.1所示。
9、优选的，所述抗鸭瘟病毒单克隆抗体由所述的杂交瘤细胞株mab-gi-37分泌后，经镍柱亲和纯化得到。
10、更优选的，本专利技术将所述抗鸭瘟病毒单克隆抗体置于0.01m pbs缓冲体系中保存，抗体浓度为1.01mg/ml，亲和常数为1.93e+09，纯度>90％，保存温度为-20℃。
11、本专利技术优选方案获得的单克隆抗体具有特异性好、敏感性强、效价高的优势，可用于间接免疫荧光及酶联免疫吸附试验，试验过程高效，结果稳定。
12、第三方面，本专利技术提供了一种用于检测鸭瘟病毒gi蛋白的试剂、试纸条或试剂盒，所述试剂、试纸条或试剂盒含有所述的抗鸭瘟病毒单克隆抗体。
13、优选的，所述试剂、试纸条或试剂盒还含有荧光标记二抗。
14、第四方面，基于所述抗鸭瘟病毒单克隆抗体对鸭瘟病毒gi蛋白的特异性免疫反应，本专利技术提供了所述的抗鸭瘟病毒单克隆抗体或所述的试剂、试纸条或试剂盒在非诊断用途的检测鸭瘟病毒gi蛋白方面的应用。
15、进一步的，本专利技术还提供了一种非诊断用途的检测鸭瘟病毒gi蛋白的方法，使用所述的抗鸭瘟病毒单克隆抗体，或者使用所述的试剂、试纸条或试剂盒。具有良好的特异性。
16、第五方面，基于鸭瘟病毒细胞传代毒与其他鸭瘟病毒在基因组比较上的差异，以及所述抗鸭瘟病毒单克隆抗体对鸭瘟病毒gi蛋白的特异性免疫反应，本专利技术提供了所述的抗鸭瘟病毒单克隆抗体或所述的试剂、试纸条或试剂盒在非诊断用途的从不同来源的鸭瘟病毒中区分鸭瘟病毒细胞传代毒的应用。
17、优选的，所述鸭瘟病毒细胞传代毒包括dev p80株。
18、进一步的，本专利技术还提供了一种非诊断用途的从不同来源的鸭瘟病毒中区分鸭瘟病毒细胞传代毒的方法，使用所述的抗鸭瘟病毒单克隆抗体，或者使用所述的试剂、试纸条或试剂盒。
19、有益效果：
20、本专利技术通过分析鸭瘟病毒细胞传代毒dev p80株与其他常规毒株的基因组结果差异，筛选并提供了一种杂交瘤细胞株mab-gi-37及其分泌的抗鸭瘟病毒单克隆抗体及应用。所述杂交瘤细胞株mab-gi-37可稳定、高效的分泌抗鸭瘟病毒的单克隆抗体，并可实现大批量规模生产。利用其分泌的抗鸭瘟病毒的单克隆抗体，可准确区分鸭瘟病毒细胞传代毒与其他鸭瘟病毒，对dev p80毒株的推广和应用具有重要意义。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.杂交瘤细胞株Mab-gI-37，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.45634。
2.抗鸭瘟病毒单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的杂交瘤细胞株Mab-gI-37分泌获得。
3.根据权利要求2所述抗鸭瘟病毒单克隆抗体，其特征在于，其与鸭瘟病毒gI蛋白产生特异性免疫反应。
4.根据权利要求3所述抗鸭瘟病毒单克隆抗体，其特征在于，所述鸭瘟病毒gI蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
5.用于检测鸭瘟病毒gI蛋白的试剂、试纸条或试剂盒，其特征在于，所述试剂、试纸条或试剂盒含有权利要求2-4中任意一项所述的抗鸭瘟病毒单克隆抗体。
6.根据权利要求5所述用于检测鸭瘟病毒gI蛋白的试剂、试纸条或试剂盒，其特征在于，所述试剂、试纸条或试剂盒还含有荧光标记二抗。
7.权利要求2-4中任意一项所述的抗鸭瘟病毒单克隆抗体或权利要求5或6所述的试剂、试纸条或试剂盒在非诊断用途的检测鸭瘟病毒gI蛋白方面的应用。
8.非诊断用途的检测鸭瘟病毒gI蛋白的方法，其特
9.权利要求2-4中任意一项所述的抗鸭瘟病毒单克隆抗体或权利要求5或6所述的试剂、试纸条或试剂盒在非诊断用途的从不同来源的鸭瘟病毒中区分鸭瘟病毒细胞传代毒的应用；
10.非诊断用途的从不同来源的鸭瘟病毒中区分鸭瘟病毒细胞传代毒的方法，其特征在于，使用权利要求2-4中任意一项所述的抗鸭瘟病毒单克隆抗体，或者使用权利要求5或6所述的试剂、试纸条或试剂盒。
...【技术特征摘要】
1.杂交瘤细胞株mab-gi-37，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.45634。
2.抗鸭瘟病毒单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的杂交瘤细胞株mab-gi-37分泌获得。
3.根据权利要求2所述抗鸭瘟病毒单克隆抗体，其特征在于，其与鸭瘟病毒gi蛋白产生特异性免疫反应。
4.根据权利要求3所述抗鸭瘟病毒单克隆抗体，其特征在于，所述鸭瘟病毒gi蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示。
5.用于检测鸭瘟病毒gi蛋白的试剂、试纸条或试剂盒，其特征在于，所述试剂、试纸条或试剂盒含有权利要求2-4中任意一项所述的抗鸭瘟病毒单克隆抗体。
6.根据权利要求5所述用于检测鸭瘟病毒gi蛋白的试剂、试纸条或试剂盒，其特征在于，所述试剂、试...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨承槐，张兵，王磊，刘莹，杨宵玥，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：
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