一种采用微载体高密度细胞培养技术生产猪瘟活疫苗的方法技术

一种采用微载体高密度细胞培养技术生产猪瘟活疫苗的方法，其特点是将传代贴壁细胞MPK细胞接种到装有微载体的生物反应器中，细胞生长所需的培养基灌注到生物反应器，MPK细胞在反应器内快速增殖，当细胞密度稳定后接种猪瘟病毒，并开始连续收获猪瘟病毒培养液，得到的病毒培养液经澄清、浓缩，在加入稳定剂和缓冲液配苗后，真空冷冻干燥制成猪瘟活疫苗。本发明专利技术采用微载体高密度细胞培养技术，细胞密度在生物反应器内可达到8～16×106个/ml，病毒培养液的收获量比转瓶培养的提高了20～40倍，显著提高猪瘟活疫苗生产效率和产量，降低生产成本，减轻疫苗的副反应，增强疫苗生产的批次稳定性，得到更为安全有效的猪瘟活疫苗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种 兽用生物制品，特别是涉及，属于兽用生物制品

技术介绍
目前国内生产猪痕活疫苗的方式主要有脾淋疫苗(动物组织法)、细胞疫苗。细胞疫苗又分为原代(牛睾丸细胞)和传代(猪睾丸细胞)两种细胞生产方式。脾淋疫苗的免疫保护力要好于细胞疫苗，但一只兔子仅能生产500头份效力不低于100 PD50的猪瘟疫苗。仅在中国，每年的猪瘟疫苗的市场容量不低于14亿头份，这相当于需要280万只兔子来制备这些疫苗，如此庞大的数量，是不可能实现的。所以，细胞疫苗是未来生产猪瘟活疫苗的发展方向。目前，前面提到的两种细胞均可用于猪瘟活疫苗的生产。当采用牛睾丸原代细胞生产时，存在一种外源病毒BVDV的感染风险，一旦牛睾丸原代细胞感染BVDV，将极大影响猪瘟活疫苗的质量；另外，牛睾丸原代细胞的制备来源很受限制，它需要从活体组织上获取。由此，传代细胞更适合猪瘟活疫苗的生产。近年来，利用猪睾丸传代细胞生产猪瘟活疫苗已在国内得到了广泛的应用，其生产用细胞主要采用转瓶培养，当大规模生产时，需要大量的人力和物力，生产效率低；细胞在转瓶内生长和产毒时，营养供应、环境pH、培养基内含氧情况都不能及时调整，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种采用微载体高密度细胞培养技术生产猪瘟活疫苗的方法，其特征在于将传代贴壁细胞MPK细胞接种到装有微载体的生物反应器中，细胞生长所需的营养培养基经连续灌注的方式加入生物反应器，MPK细胞在反应器内快速增殖，当细胞密度稳定后接种猪瘟病毒，并开始连续收获猪瘟病毒培养液，由此得到的病毒培养液经澄清、浓缩，在加入稳定剂和缓冲液配苗后，真空冷冻干燥制成猪瘟活疫苗，具体步骤为：（1）将MPK细胞在转瓶内扩增；（2）经转瓶培养得到足量的细胞后，接种到装有微载体的生物反应器中开始高密度细胞增殖培养；（3）当反应器内细胞密度增长稳定后，接种猪瘟病毒；（4）在接种病毒后第三天，开始连续收获反应器内的病毒培养液，收...

【技术特征摘要】
1.一种采用微载体高密度细胞培养技术生产猪瘟活疫苗的方法，其特征在于将传代贴壁细胞MPK细胞接种到装有微载体的生物反应器中，细胞生长所需的营养培养基经连续灌注的方式加入生物反应器，MPK细胞在反应器内快速增殖，当细胞密度稳定后接种猪瘟病毒，并开始连续收获猪瘟病毒培养液，由此得到的病毒培养液经澄清、浓缩，在加入稳定剂和缓冲液配苗后，真空冷冻干燥制成猪瘟活疫苗，具体步骤为: (1)将MPK细胞在转瓶内扩增； (2)经转瓶培养得到足量的细胞后，接种到装有微载体的生物反应器中开始高密度细胞增殖培养； (3)当反应器内细胞密度增长稳定后，接种猪瘟病毒； (4)在接种病毒后第三天，开始连续收获反应器内的病毒培养液，收获期维持25 35天; (5)收集到的病毒培养液，经澄清、浓缩，加入稳定保护剂和pH缓冲液配制成疫苗原液，再将原液分装，经冷冻干燥得到猪瘟活疫苗成品。2.根据权利要求1所述的采用微载体高密度细胞培养技术生产猪瘟活疫苗的方法，其特征在于使用的微载体为NBS公司 的Fibra Disk、GE公司的Cytodex I和Cytodex 3中的一种。3.根据权利要求1所述的采用微载体高密度细胞培养技术生产猪瘟活疫苗的方法，其特征在于使用的生物反应器为NBS公司带有CELL LIFT IMPELLER和DECANTER的细胞培养罐，或者是NBS公司带有BASKET的细胞培养罐中的一种。4.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓锋，高军，侯剑英，
申请(专利权)人：辽宁成大动物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：