本发明专利技术公开了一种猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂及其制备方法和应用。该耐热冻干保护剂由海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、明胶、谷氨酸钠、D-山梨醇、多聚蛋白胨、L-精氨酸、维生素C和注射用水组成，经溶解、除菌制得。将该耐热冻干保护剂与猪瘟病毒抗原液以1:（0.8～1.2）的体积比混合，分装后冷冻干燥即得猪瘟活疫苗。本发明专利技术制备的耐热冻干保护剂配方简单，制备容易，适于大规模生产，对疫苗具有良好的保护功效。制备得到的疫苗安全无菌、质量稳定，具有耐热、保存时间长的特点，解决了疫苗在运输过程中需要低温冷冻、贮存不方便等问题。本发明专利技术的耐热冻干保护剂可以使猪瘟活疫苗在2℃～8℃条件下保存30个月以上。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种病毒活疫苗的保护剂，具体涉及一种猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂及其制备方法和应用，属动物用病毒活疫苗制造领域。
技术介绍
猪瘟是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus, CSFV)引起的一种高度接触性传染病，具有流行广泛、发病率高等特点，对养猪业危害极大。猪瘟病毒是黄病毒科(Flaviviridae)痕病毒属(Pestivirus)的成员，为有囊膜的正链RNA病毒。预防猪瘟最有效的方法就是接种猪瘟疫苗。目前市场上预防猪瘟的疫苗主要有三种乳兔苗、细胞苗和淋脾苗。然而，疫苗在运输过程中需要冷藏保存，冷藏条件为_15°C，在我国一些经济不发达地区，运输条件很难要求，由此造成的疫苗失活、免疫失败以致疫病 爆发，为我国带来了巨大的经济损失。冻干保护剂及其制备方法是活疫苗生产工艺中的一项关键技术，对疫苗的保存、运输和使用均产生影响。目前国内常用的保护剂主要由牛奶、蔗糖、明胶等组成，组方简单，保护功能差，而国外对疫苗保护剂的研究技术较为保密，因此，使得我国成品疫苗的长期保存和运输受到了较大的限制。影响冻干保护剂保护性能的因素主要来自两方面一是微生物因素，微生物的种类和结构差异(如病毒有无囊膜)、培养方法的选择以及疫苗的种类等；二是保护剂的配方，选用保护剂的原料及其性质、原料配比及与该疫苗适应的冻干曲线等。在选择冻干保护剂的组方时，要考虑上述几种主要因素，选择合适的组方与搭配，并通过反复验证制定冻干曲线。猪瘟病毒对热、酸敏感，在存放和运输过程中容易受到环境中温度和酸碱度的影响，因此，需要选择一种合适的病毒保护剂，能够在不同保存条件下有效的防止病毒遭受破坏，保持病毒滴度，以延长病毒的存放期。耐热冻干保护与常规冻干保护剂又有不同，它较多得考虑了生物活性制品在高温、长时间保存条件下冻干物质理化性质的改变对活疫苗存活的影响。因此，研制一种配方简单、适于大规模生产、保护功能强的猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂显得尤为重要。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂。本专利技术的另一个目的是提供一种猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂的制备方法。同时，本专利技术还提供一种猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂的应用。为了实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案是一种猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂，由以下重量百分含量的组分组成海藻糖5 10%，聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 2 3%，明胶I 2%，谷氨酸钠I 3%，D-山梨醇2 5%，多聚蛋白胨4 5%，L-精氨酸0. 5 1%，维生素C 0. 5 1%，余量为灭菌后的注射用水。一种猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂的制备方法，具体步骤如下(I)按所述重量配比称取聚乙烯吡咯烷酮、明胶、D-山梨醇、多聚蛋白胨溶于少量注射用水中，灭菌后备用；(2)按所述重量配比称取海藻糖、谷氨酸钠、L-精氨酸、维生素C溶于少量注射用水中，过滤除囷后备用；(3)将步骤(I)、(2)制得的溶液混合，加注射用水至全量即得。一种猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂在制备猪瘟活疫苗方面的应用，包括将本专利技术耐热冻干保护剂与猪瘟病毒抗原液以I: (0. 8 I. 2)的体积比混合，加入抗生素，分装，冷冻干燥。 所述的抗生素为氨苄青霉素、硫酸链霉素中的一种。所述的氨节青霉素的加入量为每晕升10000 20000U。所述的硫酸链霉素的加入量为每晕升10 20mg。所述冷冻干燥的具体步骤为将混合液置入0°C 4°C的冻干箱中，以I°C 2°C /min的降温速率降至_30°C _40°C，在此温度下维持3 4h，开启真空泵，至箱内真空度达0. Olmber时开始升温，在16 24h范围内升至_8°C _4°C，再以5°C 8°C /h的升温速率升至20°C 25°C，在此温度下维持3 6h。本专利技术的有益效果是本专利技术的耐热冻干保护剂配方简单，制备容易，适于大规模生产，对疫苗具有良好的保护功效。制备得到的疫苗无菌安全、且性状稳定，具有耐热、保存时间长的特点，解决了疫苗在运输过程中需要低温冷冻、贮存不方便等问题。本专利技术的耐热冻干保护剂可以使猪瘟活疫苗在2°C 8°C条件下保存30个月以上。具体实施例方式下述实施例仅对本专利技术作进一步详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制。实施例I猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂，由以下重量百分含量的组分组成海藻糖5%，聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 2%，明胶1%，谷氨酸钠1%，D-山梨醇2%，多聚蛋白胨4%，L-精氨酸0. 5%，维生素C 0. 5%，余量为灭菌后的注射用水。耐热冻干保护剂的具体制备步骤为(I)按所述重量配比称取聚乙烯吡咯烷酮、明胶、D-山梨醇、多聚蛋白胨溶于少量注射用水中，110°C灭菌30min备用；(2)按所述重量配比称取海藻糖、谷氨酸钠、L-精氨酸、维生素C溶于少量注射用水中，用孔径为0. 22 的滤膜过滤除菌后备用；(3)将步骤(I)、(2)制得的溶液混合，加注射用水至全量即得。耐热冻干保护剂在制备猪瘟活疫苗方面的应用将本专利技术耐热冻干保护剂与猪瘟病毒抗原液以1:0. 8的体积比混合，按照ImL混合液10000U的量加入氨苄青霉素，分装，冷冻干燥。具体冷冻干燥步骤为将混合液置入0°C的冻干箱中，以1°C /min的降温速率降至_30°C,在此温度下维持4h,开启真空泵,至箱内真空度达0. Olmber时开始升温，24h升至-8°C，再以5°C /h的升温速率升至20°C，在此温度下维持6h。实施例2猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂，由以下重量百分含量的组分组成海藻糖8%，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)2. 5%，明胶I. 5%，谷氨酸钠2%, D-山梨醇3. 5%，多聚蛋白胨4. 5%, L-精氨酸0. 75%，维生素C 0. 75%，余量为灭菌后的注射用水。 耐热冻干保护剂的具体制备步骤为(I)按所述重量配比称取聚乙烯吡咯烷酮、明胶、D-山梨醇、多聚蛋白胨溶于少量注射用水中，116°C灭菌20min备用；(2)按所述重量配比称取海藻糖、谷氨酸钠、L-精氨酸、维生素C溶于少量注射用水中，用孔径为0. 22 的滤膜过滤除菌后备用；(3)将步骤(I)、(2)制得的溶液混合，加注射用水至全量即得。耐热冻干保护剂在制备猪瘟活疫苗方面的应用将本专利技术耐热冻干保护剂与猪瘟病毒抗原液以I: I的体积比混合，按照ImL混合液20000U的量加入氨苄青霉素，分装，冷冻干燥。具体冷冻干燥步骤为将混合液置入4°C的冻干箱中，以2°C /min的降温速率降至-40°C,在此温度下维持3h,开启真空泵,至箱内真空度达0. Olmber时开始升温，16h升至_4°C，再以8°C /h的升温速率升至22°C，在此温度下维持4h。实施例3猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂，由以下重量百分含量的组分组成海藻糖10%，聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 3%，明胶2%，谷氨酸钠3%，D-山梨醇5%，多聚蛋白胨5%，L-精氨酸1%，维生素Cl%,余量为灭菌后的注射用水。耐热冻干保护剂的具体制备步骤为(I)按所述重量配比称取聚乙烯吡咯烷酮、明胶、D-山梨醇、多聚蛋白胨溶于少量注射用水中，120°C灭菌15min备用；(2)按所述重量配比称取海藻糖、谷氨酸钠、L-精氨酸、维生素C溶于少量注射用水中，用孔径为0. 22 的滤膜过滤除菌后备用；(3)将步骤(I)、(2)制得的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂，其特征在于，由以下重量百分含量的组分组成：海藻糖5～10%，聚乙烯吡咯烷酮（PVP）2～3%，明胶1～2%，谷氨酸钠1～3%，D？山梨醇2～5%，多聚蛋白胨4～5%，L？精氨酸0.5～1%，维生素C？0.5～1%，余量为注射用水。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吴红云，徐进，范金红，
申请(专利权)人：郑州后羿制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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