本发明专利技术公开了一种肾靶向药物载体及应用，具体涉及人血清白蛋白通过降解、分离纯化得到的多肽片段，通过体内实验研究证明多肽片段具有良好的肾脏靶向性。本发明专利技术制法简单，工艺成熟，性能稳定。其应用可作为一种肾靶向药物载体用于治疗、诊断急慢性肾脏疾病领域。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于制药领域，具体涉及人血清白蛋白多肽片段这一具有良好肾靶向效率的药物载体及其应用。
技术介绍
肾脏是泌尿系统的组成器官之一，是人体的主要排泄器官。它通过生成和排出尿液，排出体内代谢废物及有害物质，重吸收有用物质，可调节水、渗透压及酸碱平衡维持体内环境的稳定。近年来，随着亚健康生活方式增多和生活节奏加快，急慢性肾病发病率飞速增高。研究报告表明，在发达国家，约有6. 59TlO%的人群患有不同程度的肾脏疾病。而在中国，四十岁以上人群慢性肾脏病的患病率高达8°/Γ9%，比高血压、糖尿病的发病率还高； 门诊中，约有三分之一的病人出现明显的肾功能下降甚至衰竭。目前，临床上治疗慢性肾脏疾病主要以透析和肾移植为主，但治疗费用高昂，治疗周期较长，因此药物治疗更具优势。然而，普通药物治疗均存在不同程度的肾外效应，靶向性不强，这样会导致严重的毒副作用。此外，一些药物在达到肾脏之前就被降解，即使部分药物到达了肾脏，也不一定能被靶细胞摄取而起到治疗作用；特别是当肾脏功能异常时，药物的传递也同样会受到一定程度的影响。因此，为了增加药物的安全性和有效性，研究具有良好肾脏靶向性的药物很有必要。为此，各国科学家已经对肾靶向给药系统进行了较为系统的研究。Suzuki等人报道了烷基糖苷具有肾靶向载体的潜力。他们采用不同糖分子作为载体，通过不同长度的烷基间隔基将载体和模型药物(精氨酸抗利尿激素，AVP)结合，研究了大鼠静注AVP-糖基复合物后的组织摄取情况，发现组织分布特性很大程度上取决于结合物中的糖分子葡萄糖(Glc)、甘露糖(Man)和2d-Glc-C8_AVP都显示出良好的肾脏特异性分布。Glc-S_C8-衍生物具有明显的肾靶向性，说明Glc-S-C8-是良好的肾靶向载体。相关专利是EP0953357。Yamamoto Y等人采用自由基聚合反应制备乙烯基吡咯烷酮/ 二甲基马来酸共聚物(PVD)，并考察分子量和电荷对PVD在小鼠体内分布的影响。分子量为600(Γ8000道尔顿的PVD有很好的肾靶向性，给药剂量80%左右的PVD被肾摄取。在国内，张志荣等人将天然的壳聚糖进行降解和衍生化得到低分子量壳聚糖或其衍生物，证明了其具有良好的肾靶向性，该药物载体通过化学键与抗肿瘤药物或糖皮质激素或免疫抑制剂相连得到前体药物，体内和体外实验研究显示该前体药物能够在体内到达肾脏并释放出活性药物。相关专利是CN200610020991. 5。然而，无论是PVD载体系统还是烷基糖苷载体系统的研究仅仅停留在体内靶向性上，未有任何关于载体在肾脏特异性摄取机理研究、载体本身的安全性研究以及载体为基础的前体药物药效学研究报道；低分子量壳聚糖是一系列聚合度不同的氨基酸组成的混合物，具有一定的血细胞毒性，不可注射使用。所以，寻求新的更加安全的肾靶向药物载体是很必要的，同时只有阐明载体被肾脏特异性摄取的机理，才能为今后发展同类新型载体奠定科学基础。在现已研究的各种肾靶向载体中，低分子量蛋白质(LMWP)较为理想。分子量低于3000道尔顿的LMWP能被肾小球自由滤过并通过近端小管迅速吸收。LMWP被近端小管细胞内吞后，经内吞体迁移至溶酶体。在溶酶体内，LMWP被分解成小肽和单个氨基酸。研究表明约占注射剂量80%的LMWP (如溶菌酶、细胞色素C、抑肽酶等)最终被肾摄取。围绕这方面的专利较多，如US6562371, US200321142, JP2001055343, CN200610020167. X。但低分子量蛋白质如溶菌酶等存在免疫排斥反应，影响血压以及肾脏毒性的问题。人血清白蛋白是人血浆中的蛋白质，因其具有安全无毒、无免疫原性、可生物降解、生物相容性好等优点，在临床上应用广泛，常用于治疗休克与烧伤，补充因手术、意外事故或大出血所致的血液丢失，也可以作为血浆增溶剂。 可见，HAS较溶菌酶具备更多的优势以及临床应用基础，是理想的可注射用药物载体。目前，关于人血清白蛋白的专利较多专利CN01805629.6公开了一种去除人血清白蛋白多聚体的方法；专利CN200610038790.8公开了人β干扰素与人血清白蛋白的融合蛋白的制备方法及产品；专利CN02813703. 5公开了从生产人血清白蛋白的宿主细胞的内源血清白蛋白中纯化人血清白蛋白的方法；专利CN201010561294. 7公开了一种重组人血清白蛋白的分离纯化方法，等等。然而，关于人血清白蛋白或其多肽片段作为一种肾靶向药物载体及应用的专利尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于公开一种肾靶向药物载体，它是将人血清白蛋白降解为具有一定氨基酸序列的多肽片段，具有如下通式ΛrlIll-Il 其中 A表示多肽片段， m和η为正整数，I彡m，η彡585，表示多肽片段两端氨基酸在人血清白蛋白序列中的位置。通过不同的降解方法，可将人血清白蛋白降解得到分子量大小在1000-60000之间的多肽片段；通过体内动物实验结果，优选心123、Α124_298、Α299_585的多肽片段；更优选序列为A 299-585 的多肽片段。本专利技术的一个目的在于提供一种肾靶向药物载体的制备方法，是将人血清白蛋白经溴化氰降解、葡聚糖凝胶分离纯化得到粗品、羧甲基纤维素进一步分离纯化制备而成。具体地说，包括以下步骤 (O溴化氰降解溴化氰和人血清白蛋白按质量比I: I反应，以70%甲酸水溶液为反应介质，4°C下反应20_24h。(2)葡聚糖凝胶分离纯化以葡聚糖凝胶S^hadex G-100为固定相，甲酸和甲酸铵缓冲系统为流动相，室温下分离步骤(I)的降解产物，得到两个粗品I和II。(3)羧甲基纤维素进一步分离纯化以羧甲基纤维素S^harose FF为固定相，磷酸盐缓冲系统为流动相，以NaCl溶液进行梯度洗脱，室温下将粗品I分离纯化为多肽片段A299_585 ;将粗品II分离纯化为多肽片段Ah23和A 124-298°上述三种多肽片段的分子量分别为A299_585 35000道尔顿；Ai_123 =15000-2000道尔顿；A124_298 =15000-2000 道尔顿。进一步优选的方法包括 (O溴化氰降解溴化氰和人血清白蛋白按质量比I: I反应，以70%甲酸水溶液为反应介质，4°C下反应20-24h。(2)葡聚糖凝胶分离纯化以葡聚糖凝胶S^hadex G-100为固定相，O. 174 M甲酸和O. 026 M甲酸铵缓冲系统为流动相，pH=2. 86，室温下分离得到两个粗品I和II，分离曲线检测波长为280 nm。分离纯化结果见附图I。(3)羧甲基纤维素进一步分离纯化以羧甲基纤维素为固定相，O. 005 M磷酸盐缓冲系统为流动相，pH=6. 5，以I M NaCl溶液进行梯度洗脱，室温下将粗品I分离纯化为多肽片段A299-585，分离曲线检测波长为280 nm;以羧甲基纤维素为固定相，O. 01 M磷酸盐缓冲系统为流动相，pH=3. 25，以I M NaCl溶液进行梯度洗脱，室温下将粗品II分离纯化为多肽片段八1-123和仏24_298，分离曲线检测波长为230 nm。分离纯化结果见附图2、附图3。分离纯化所得三个多肽片段经透析、冷冻干燥即得。本专利技术的另一个目的在于证明人血清白蛋白多肽片段能够特异性地蓄积在肾脏本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肾靶向药物载体，其特征是将人血清白蛋白降解为具有一定氨基酸序列的多肽片段，具有如下通式：Am？n其中：A表示多肽片段，m和n为正整数，1≤m,n≤585，表示多肽片段两端氨基酸在人血清白蛋白序列中的位置。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：袁志翔，徐超群，何夏凯，谭镭，
申请(专利权)人：四川省中医药科学院，
类型：发明
国别省市：
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