一种疫苗组合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种疫苗组合物，该疫苗组合物包括免疫量的副猪嗜血杆菌TbpA、CdtB、OmpP2、VtaA抗原蛋白以及药学上的载体。本发明专利技术的疫苗组合物对副猪嗜血杆菌血清4型、5型、12型有交叉保护效果，能够有效预防和治疗多种血清型副猪嗜血杆菌的感染。该疫苗组合物每次免疫1ml即可得到有效的免疫。本发明专利技术还提供了该疫苗组合物的制备方法，采用该制备方法能够该疫苗组合物的产业化生产，经济可靠。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于兽用生物制品领域，具体地涉及一种预防和治疗副猪嗜血杆菌相关疾病的疫苗组合物、制备方法及应用。
技术介绍
副猪嗜血杆菌病是副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,Hps)引起的猪的多发性浆膜炎和关节炎,该病又称为猪革拉泽氏病(Glsser’sDisease)。在大量分离副猪嗜血杆菌的基础上,发现该菌的血清型复杂多样,按Kieletein-Rapp-Gabriedson(KRG)琼脂扩散血清分型方法,至少可将副猪嗜血杆菌分为15个血清型；根据我国血清流行病学调查和分离菌株的鉴定，以4、5型最为流行。采用疫苗进行免疫预防是国内外控制副猪嗜血杆菌病的根本手段，而市场销售的商品疫苗只有副猪嗜血杆菌病灭活疫苗(血清4型MD0322+血清5型SH0165)、副猪嗜血杆菌病灭活疫苗(Z-1517株)、副猪嗜血杆菌病灭活疫苗(血清1型SV1+血清6型SV6)，这些疫苗的应用起到了一定的预防作用，但这些灭活疫苗一般由2个或者3个血清型的地方流行菌株制备而成，随着病原流行株和不同血清型之间缺乏交叉保护已经使现有疫苗很难达到预期的免疫效果，而且市售商品疫苗需多次免疫，成本较高，对猪只的应激较大，因此，需要专利技术一种新型的能有效抵抗多种血清型的副猪嗜血杆菌毒株的疫苗以解决上述问题。
技术实现思路
为了解决现有技术的不足，本专利技术的主要目的在于克服现有技术缺陷，提供一种用于预防和/或治疗副猪嗜血杆菌病的疫苗组合物，包含四种副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原和佐剂。本专利技术的第一方面在于一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的副猪嗜血杆菌TbpA、CdtB、OmpP2、VtaA抗原蛋白以及药学上的载体。本专利技术提供的预防和/或治疗副猪嗜血杆菌病的疫苗组合物包含的副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原为TbpA、CdtB、OmpP2、VtaA蛋白。本专利技术从副猪嗜血杆菌地方分离株ZJ菌株(菌株来源参见实施例1)中分别克隆到TbpA、CdtB、OmpP2、VtaA基因。经过测序发现TbpA、CdtB、OmpP2、VtaA蛋白基因编码区分别由2703bp、834bp、1077bp和2862bp个碱基组成，具有序列表SEQIDNO:1～4所示的核苷酸序列。经过序列分析发现其编码的蛋白rTbpA、rCdtB、rOmpP2、rVtaA分别有901、278、359、954个氨基酸残基组成，具有序列表SEQIDNO:5～8所示的氨基酸序列，去掉信号肽部分之后表达蛋白预计分子量大小为11、33、43、11KDa。通过原核表达和实验室试验证实本专利技术的rTbpA、rCdtB、rOmpP2、rVtaA蛋白，能够对副猪嗜血杆菌感染具有保护作用，且意外的发现四种蛋白可以对血清4型、5型、12型具有交叉保护，预示着可以研制副猪嗜血杆菌亚单位疫苗。本专利技术提供的上述基因序列是副猪嗜血杆菌的具有免疫原性的四种蛋白基因(TbpA、CdtB、OmpP2、VtaA)，该蛋白还可以应用对于副猪嗜血杆菌亚单位疫苗和诊断试剂研制中。作为本专利技术的一种实施方式，在本专利技术的疫苗组合物中，所述副猪嗜血杆菌TbpA蛋白序列为SEQIDNO:5编码的氨基酸序列；所述副猪嗜血杆菌CdtB蛋白序列为SEQIDNO:6编码的氨基酸序列；所述副猪嗜血杆菌OmpP2蛋白序列为SEQIDNO:7编码的氨基酸序列；所述副猪嗜血杆菌VtaA蛋白序列为SEQIDNO:8编码的氨基酸序列。本专利技术提供的预防和/或治疗副猪嗜血杆菌病的疫苗组合物包含的副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原TbpA蛋白、CdtB蛋白、OmpP2蛋白、VtaA蛋白还可以是与其功能衍生物基本相同的氨基酸序列的多肽。本专利技术涉及的副猪嗜血杆菌多肽，其有利地激发动物中的保护性反应。具体地，本专利技术实施方式的多肽包含与其功能衍生物基本相同的氨基酸序列。如本文一般理解和使用，“功能性片段”指编码与完整核酸序列的生物活性基本相似的功能生物活性的核酸序列。换言之，在本专利技术的上下文中，其优选地指基本上保留了编码这样的多肽/蛋白质能力的核酸或其片段，所述多肽/蛋白质当施用于动物时，激发针对副猪嗜血杆菌菌株攻击的免疫应答，和更优选地保护性反应。当指氨基酸序列时，“基本上相同”可以理解为本专利技术的多肽优选地具有这样的氨基酸序列，其与SEQIDNO：5-8中所示的序列的部分或全部具有至少70％同源性，或甚至优选地80％同源性，或甚至更优选地90％同源性，或最优选地95％同源性。在本文中术语“同源性”还包括与参比序列相同或类似，同时提供任何氨基酸的简单替换/修饰。可以用BLAST-P(基本局部排比检索工具)，本领域技术人员公知的程序进行该方面的同源性检索。对于相应的核酸序列，同源性涉及在本领域中已知的BLASTX和BLASTN程序。术语“功能衍生物”指具有与完整蛋白/肽序列的生物活性基本类似的功能生物活性的蛋白/肽序列。换言之，其优选地指当将所述功能衍生物施用于动物时，基本上保留了激发免疫应答，如针对副猪嗜血杆菌菌株攻击的保护性反应的能力的多肽或其片段。术语“片段”指这样的多核苷酸序列，其是人工构建(例如通过化学合成)或通过将天然产物裂解成多个小片段(使用限制性内切酶，或机械剪切)构建的本专利技术核酸的分离的部分，或通过PCR、DNA聚合酶或本领域公知的任何其他聚合技术合成的核酸的部分，或通过本领域技术人员公知的重组核酸技术在宿主细胞中表达的核酸部分。作为本专利技术的一种优选实施方式，在本专利技术的疫苗组合物中，所述副猪嗜血杆菌TbpA蛋白序列为SEQIDNO:1编码的核苷酸序列；所述副猪嗜血杆菌CdtB蛋白序列为SEQIDNO:2编码的核苷酸序列；所述副猪嗜血杆菌OmpP2蛋白序列为SEQIDNO:3编码的核苷酸序列；所述副猪嗜血杆菌VtaA蛋白序列为SEQIDNO:4编码的核苷酸序列。作为本专利技术的一种实施方式，在本专利技术的疫苗组合物中，所述副猪嗜血杆菌TbpA、CdtB、OmpP2、VtaA抗原蛋白含量分别为100-200μg/ml。本专利技术的组合物的成分或组分的量优选地是治疗有效量。所述治疗有效量是指在组合物施用的宿主中发挥它们的免疫学作用而不导致过度副作用所必需量。所用的成分和待施用的组合物的精确的量将根据因素如治疗的疾病的类型，待治疗的动物的类型和年龄，施用的方式，以及组合物中的其它成分而变化。优选地，对于动物猪而言，本专利技术疫苗组合物TbpA蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的副猪嗜血杆菌TbpA、CdtB、OmpP2、VtaA抗原蛋白以及药学上的载体。

【技术特征摘要】
1.一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的副猪嗜血杆菌TbpA、CdtB、OmpP2、VtaA抗原蛋白以及药学上的载体。
2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述副猪嗜血杆菌TbpA蛋白序列为SEQIDNO:5编码的氨基酸序列；所述副猪嗜血杆菌CdtB蛋白序列为SEQIDNO:6编码的氨基酸序列；所述副猪嗜血杆菌OmpP2蛋白序列为SEQIDNO:7编码的氨基酸序列；所述副猪嗜血杆菌VtaA蛋白序列为SEQIDNO:8编码的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述副猪嗜血杆菌TbpA、CdtB、OmpP2、VtaA抗原蛋白含量分别为100-200μg/ml；优选地，所述副猪嗜血杆菌TbpA、CdtB、OmpP2、VtaA抗原蛋白含量分别为150μg/ml。
4.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述副猪嗜血杆菌TbpA、CdtB、OmpP2、VtaA抗原蛋白含量比例为1:1:1:1。
5.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物还包括佐剂，所述佐剂包括氢氧化铝胶佐剂、MontanideGEL01、MontanidePETGELA、Montanide...

【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，王生富，田克恭，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41