【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及反向遗传学技术和RNA病毒拯救技术，具体地说，涉及日本脑炎病毒SA14-14-2株基于DNA的感染性克隆、其构建方法及应用。
技术介绍
黄热病毒属病毒属于正链RNA病毒,该属包含80多个成员，其中过半数以上的病毒能够诱发人和动物产生疾病，患病率高而治愈率差，容易留下一些严重的后遗症，给人类健康带来很大威胁(Monath TP, 1996),如JEV、登革热病病毒(DEN)、黄热病毒(YFV)、蜱传脑炎病毒(TBEV)等。长期以来，其相关疫苗的研制、药物的开发进展都非常缓慢，到目前为止，仅YFV、JEV、TBEV有疫苗问世，而其他大部分的成员尚无有效的预防和治疗手段。流行性乙型脑炎(JE)是亚洲最常见的一种病毒性脑炎，我国是乙脑发病人数最多的国家，占世界总发病数的80%以上，除新疆、西藏、青海外，其他各地区均有发病病例，至今每年仍有几千例病人，对居民健康造成极大的危害，被卫生部列为乙类传染病。尽管大部分人在JEV感染后没有明显的症状发生，但是也有一部分患者能够出现永久的神经性疾病，甚至是致死性疾病，同时超过一半的幸存者会有持久的神经性后遗症。(Vau...
【技术保护点】
日本脑炎病毒SA14?14?2株基于DNA的感染性克隆，其特征在于，所述感染性克隆以pBR322质粒为骨架载体，通过插入日本脑炎病毒SA14?14?2疫苗株的全长cDNA获得，所述SA14?14?2疫苗株全长cDNA的5′端连接CMV启动子，3′端添加BGH多聚腺苷酸化序列，且在基因组cDNA的第356位点和第2217位点上分别添加一段用于起稳定作用的嵌合内含子序列。
【技术特征摘要】
1.本脑炎病毒SA14-14-2株基于DNA的感染性克隆，其特征在于，所述感染性克隆以PBR322质粒为骨架载体，通过插入日本脑炎病毒SA14-14-2疫苗株的全长cDNA获得，所述SA14-14-2疫苗株全长cDNA的5'端连接CMV启动子，3'端添加BGH多聚腺苷酸化序列，且在基因组cDNA的第356位点和第2217位点上分别添加一段用于起稳定作用的嵌合内含子序列。2.根据权利要求1所述的感染性克隆，其核苷酸序列如SEQID No:1所示。3.一种构建权利要求1或2所述感染性克隆的方法，其特征在于，通过分段RT-PCR法获得日本脑炎病毒SA14-14-2疫苗株的全长基因组cDNA序列，然后在基因组cDNA序列5丨端连接CMV启动子，3'端添加BGH多聚腺苷酸化序列，并在基因组cDNA的第356位点和第2217位点上分别添加一段用于起稳定作用的嵌合内含子序列，最终克隆到质粒PBR322中。4.权利要求1或2所述感染性克隆在作为新型病毒载体中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，将日本脑炎病毒SA14-14-2疫苗株全长基因组cDNA序列中编 码前膜蛋白和包膜蛋白的核苷酸序列替代成编码另一种病毒前膜蛋白和包膜蛋白的核苷酸序列，或直接将外源基因插入...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄莺，贾丽丽，孙志伟，徐宏山，俞炜源，俞永新，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所，中国食品药品检定研究院，
类型：发明
国别省市：
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