一种食用菌dsRNA病毒的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种食用菌dsRNA病毒的检测方法，利用dsRNA单克隆抗体J2通过斑点杂交检测食用菌dsRNA病毒，所述方法包括：食用菌检测样品的制备，样品点于杂交膜上，利用封闭液快速封闭杂交膜上多余的非特异性DNA结合位点，杂交膜分别与dsRNA单克隆抗体J2、羊抗鼠IgG孵育后显色，肉眼观察颜色变化确定食用菌带毒情况。本发明专利技术可同时检测多个样品，具有操作方便、快速便捷、无需特殊的仪器设备、阳性信号清晰、容易判断等优点。

Method for detecting dsRNA virus of edible fungus

The present invention discloses a kind of edible fungus dsRNA virus detection method by dot blot hybridization of edible fungi dsRNA virus using dsRNA monoclonal antibody J2, the method comprises the following steps: Mushroom samples preparation samples in hybrid membrane, using closed liquid membrane hybridization rapid closure of nonspecific DNA redundant binding sites. The hybrid membrane with dsRNA monoclonal antibody J2 and Goat anti mouse IgG after incubation with color, eye color changes determine the poisonous edible fungus. The invention can detect a plurality of samples at the same time, and has the advantages of convenient operation, fast and convenient operation, no need of special instruments and equipment, clear and clear positive signals, etc..

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食用菌病毒的检测方法，具体涉及一种利用dsRNA单克隆抗体J2通过斑点杂交检测食用菌dsRNA病毒的方法。
技术介绍
随着食用菌栽培的大规模发展，病害的发生也越来越普遍，给生产者造成了相当大的损失。病毒病是危害食用菌生产的较为重要的一类病害。病毒病害与细菌、真菌病害危害不同，其发病症状具有潜隐特性，可直到生产中的某个阶段才表现症状。因此，食用菌病毒已对对双孢蘑菇(Agaricus bisporus)、香菇(Lentinula edodes) 、平菇（Pleurotus ostreatus）、金针菇（Flammulina velutipes）等主要的食用菌生产构成了一种潜在的危害。病毒病目前尚没有有效的控制手段，使用无毒菌种是防治食用菌病毒病的最有效措施，因此快速、便捷的病毒检测手段在食用菌生产中尤为重要。目前发现的食用菌病毒以双链RNA病毒为主。食用菌不仅品种众多，且一种食用菌可能携带多种病毒。因此，在实际生产操作中，通过一种抗体可以同时检测多种病毒不仅可以提高检测的准确性，而且克服了常规抗体免疫检测时一对一的局限性，大大降低了检测成本。dsRNA单克隆抗体J2可以识本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种食用菌dsRNA病毒的检测方法，其特征在于：将食用菌匀浆后的上清液点于杂交膜上，加入封闭缓冲液封闭膜上多余的非特异性DNA结合位点；然后将杂交膜分别与dsRNA单克隆抗体J2、羊抗鼠IgG孵育并漂洗后将膜置于显色液中显色，观察膜的颜色变化，判断食用菌是否携带dsRNA病毒。

【技术特征摘要】
1.一种食用菌dsRNA病毒的检测方法，其特征在于：将食用菌匀浆后的上清液点于杂交膜上，加入封闭缓冲液封闭膜上多余的非特异性DNA结合位点；然后将杂交膜分别与dsRNA单克隆抗体J2、羊抗鼠IgG孵育并漂洗后将膜置于显色液中显色，观察膜的颜色变化，判断食用菌是否携带dsRNA病毒。2.根据权利要求1所述的一种食用菌dsRNA病毒的检测方法，其特征在于：所述检测方法具体包括以下步骤：（1） 检测样品的制备：将待检测的食用菌样品匀浆得到匀浆液，所述匀浆液以12000-14000 rpm/min的转速离心1-2 min，取上清液待用；（2） 点膜：根据样品数量剪取适当大小的膜，所述膜为硝酸纤维素膜、尼龙膜或PVDF膜，用铅笔划线将膜分成不同的方格，用于区分不同样品的位置，取上述匀浆后离心的上清液3-5μL点样于膜上，将膜放置于烘箱烘干或室温自然干燥；（3） 膜的封闭：根据膜的大小，在容器中加入一定体积的封闭液，将膜放置在封闭液中，使封闭液完全浸没膜，置于水平摇床上封闭10-15min；（4） dsRNA单克隆抗体孵育：利用TBST缓冲液将dsRNA单克隆抗体J2稀释2000-3000倍，取出封闭后的膜用滤纸吸尽封闭液，立即放入稀释后的dsRNA单克隆抗体J2中，室温轻摇孵育1-1.5小时或者在4℃孵育过夜；（5） 洗膜：孵育后，以PBST缓冲液为洗涤液，将膜放于洗涤液中缓慢摇动洗涤5-15min，吸尽洗涤液后，再加入洗涤液洗涤5-15min，共洗涤3-4次。（6） 二抗孵育：二抗选用碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG，参考二抗的说明书，按照适当比例用TBST缓冲液稀释碱性磷酸酶标记的二抗，将膜放入稀释后的二抗中，室温轻摇孵育1-1.5小时；（7）洗膜：以PBST缓冲液为洗涤液，将膜放于洗涤液中缓慢...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖冬来，杨菁，张迪，黄小菁，
申请(专利权)人：福建省农业科学院食用菌研究所，
类型：发明
国别省市：福建;35