一种高分子量绣球菌β-葡聚糖的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种高分子量绣球菌β

【技术实现步骤摘要】
一种高分子量绣球菌
β
‑
葡聚糖的制备方法
技术背景
[0001]广叶绣球菌(Sparassis latifolia)具有很高的营养保健价值。研究结果表明绣球菌中β
‑
葡聚糖含量丰富，其活性的研究结果表明其具有显著的免疫调节活性和免疫介导的抗肿瘤活性。现有报道所研究的绣球菌活性β
‑
葡聚糖，主是由强碱溶液提取得到，分子量在200万道尔顿以上，主链结构是带有1
‑
6分支结构的β
‑
1,3
‑
葡聚糖，难溶于水，低浓度溶液呈凝胶状。
[0002]绣球菌β
‑
葡聚糖主要存在于细胞壁中，其具有分子量高、结构有序、难溶于水的特点。导致采用常规的热水提取、超声辅助提取、酶法辅助提取均难以获得理想的得率，获得的提取物中β
‑
葡聚糖较低，仅占30％左右，且含有大量其他中低分子量的α
‑
葡聚糖。目前，针对绣球菌高分子量β
‑
葡聚糖成分的可行的提取方法主要是采用强碱溶液提取和氢氧化钠
‑
尿素体系提取。但这些方法具有碱和尿素的使用量大，提取得率较低，同时提取产物色泽深、还含有大量α
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葡聚糖以及蛋白质杂质，导致后续的脱盐、脱色和进一步纯化的成本高等缺点，工业化规模化生产难度较大。
[0003]为解决上述绣球菌高分子量β
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葡聚糖提取中存在的问题，有必要针对绣球菌高分子β
‑
葡聚糖成分的提取技术和方法进行研发改进，提高提取过程中绣球菌细胞壁中高分子β
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葡聚糖的溶出效率，并降低粗提产品中α
‑
葡聚糖及蛋白质等杂质含量，提高产品纯度。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种高分子量绣球菌β
‑
葡聚糖的制备方法，该方法主要解决的技术问题为:1、提高绣球菌子实体中高分子量β
‑
葡聚糖的溶出效率。2、提高绣球菌高分子量β
‑
葡聚糖产品纯度。3、在高温高压酸裂解过程中保护绣球菌高分子量β
‑
葡聚糖结构和生物活性。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术的技术思路如下：
[0006]酸水解技术是常用的多糖和蛋白质水解方法，由于多糖之间连接靠的是糖苷键，即缩醛酮所形成的碳
‑
氧
‑
碳键，其在碱性条件下是较稳定的，而在酸性条件下由于氢离子能加到氧原子上促使一根碳氧键断裂，因此多糖在酸性下能被水解成寡糖或单糖。因此，在多糖提取中一般不采用酸提取的方法进行提取，以避免对多糖结构和功能造成破环。但事实上，多糖在酸性条件下的水解也有难易之分，一般来说易溶解、结构无序的多糖较易水解，α
‑
1，4糖苷键较其他类型糖苷键易水解。
[0007]绣球菌β
‑
葡聚糖是以β
‑
(1
→
3)糖苷键链接的线性主链并带有β
‑
(1
→
6)糖苷键链接的分支结构的葡聚糖，分子量极大，可达2000KDa以上，其主要存在于菌体细胞壁中，在细胞壁结构中形态稳定，呈三维卷曲交联状结构，极性基团暴露有限，因而溶剂化作用较弱，较难溶解。这些特点导致酸溶液侵入结构内部和裂解糖苷键的效率较低，在低浓度酸的水解作用下有较好的稳定性。
[0008]高温高压处理条件对多糖对高分子多糖具有促进糖链结构伸展、极性集团外露、增加电荷量、改善亲水性促进溶剂化的作用。本专利技术通过控制高温高压条件下的酸水解作
用，破坏绣球菌细胞和细胞壁中的易于水解的α
‑
1，4葡聚糖和蛋白质成分，从而瓦解细胞壁，改善难溶性的β
‑
葡聚糖亲水性，进而获得较高的绣球菌高分子β
‑
葡聚糖的提取得率和产品纯度。该技术工艺简单，易于生产应用，同时使用的酸碱量少，提取效率高，且通过控制水解作用去除了大部分的α
‑
葡聚糖和蛋白质杂质，因而粗产品具有纯度高、分子量均一性较好的优点。
[0009]基于上述原理，本专利技术采用的技术方案如下：
[0010]一种高分子量绣球菌β
‑
葡聚糖的制备方法，包括以下步骤；
[0011]1)绣球菌粉碎脱脂
[0012]取绣球菌子实体干品，粉碎得到粉末，加入有机溶剂脱脂，回流提取，过滤得到残渣，残渣干燥挥除溶剂备用；
[0013]2)高温高压酸裂解
[0014]在上述残渣中加入2～4％的酸溶液(v/v)、控制料液比20～30(v/w)并搅拌均匀得到混合液，将混合液在室温下搅拌8～12h，将混合液装入高压反应釜进行高温高压裂解，控制反应温度130～140℃，压力0.18
‑
0.30MPa，反应时间2～4h，反应结束后待料温冷却至80℃出料，得到裂解液；
[0015]3)裂解液碱化与固液分离
[0016]向裂解提取液中加入碱液调节pH至8.0～8.5，80～90℃搅拌反应2～3h，待溶液粘稠度显著下降后进行固液分离，分别收集固体残渣和上清液，将固体残渣重复用少量pH＝8.0～8.5的稀碱溶液洗涤1～2次并离心、收集上清液，将上述上清液合并得到绣球菌β
‑
葡聚糖提取液；
[0017]4)醇沉分离
[0018]将上述绣球菌β
‑
葡聚糖提取液冷却后，加入0.9～1.2倍体积的95％乙醇溶液，搅拌均匀，置于0～4℃温度下沉淀8～12h，离心或过滤处理后，收集沉淀，用50～60％乙醇洗涤1～2次，进入干燥程序；
[0019]5)真空冷冻干燥
[0020]将步骤4)中收集到的沉淀在真空环境下冻干，得到绣球菌高分子β
‑
葡聚糖。
[0021]进一步的，步骤1)中脱脂用的有机溶剂为乙醇、乙酸乙酯、石油醚及三氯甲烷中的一种或多种。
[0022]进一步的，步骤2)中的酸溶液为盐酸、乙酸、硫酸、草酸中的一种或多种。
[0023]进一步的，步骤3)中的碱液所用的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、碳酸钠、碳酸钙中的一种或多种。
[0024]进一步的，步骤3)中所述的固液分离方式为离心、过滤方式的一种或几种。
[0025]本专利技术采用高温高压条件下低浓度酸裂解技术，通过酸水解较易水解的α
‑
1，4葡聚糖和蛋白质成分，对绣球菌细胞壁结构进行破坏，并增加难溶性的高分子β
‑
葡聚糖亲水性，从而达到提高绣球菌高分子β
‑
葡聚糖提取率和产品纯度的目的。
[0026]中国专利申请CN 105384842 A公开了一种从绣球菌子实体中提取水溶性β
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葡聚糖的方法，利用到了酸水解的原理，但其基本技术路线是用碱提取绣球菌β
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葡聚糖，利用α淀粉酶酶解脱除α
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高分子量绣球菌β
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葡聚糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1) 绣球菌粉碎脱脂取绣球菌子实体干品，粉碎得到粉末，加入有机溶剂脱脂，回流提取，过滤得到残渣，将残渣干燥挥除溶剂；2)高温高压酸裂解在上述残渣中加入2~4%的酸溶液（v/v），控制料液比20~30（v/w，），搅拌均匀得到混合液，将混合液在室温下搅拌8～12h，然后将混合液装入高压反应釜进行高温高压裂解，控制反应温度为130～140℃，压力为0.18～0.3MPa，反应时间2～4h，反应结束后冷却后出料，得到裂解液；3）裂解液碱化与固液分离向裂解提取液中加入碱液调节pH至8.0～8.5，80～90℃搅拌反应2～3h以降低提取液粘稠度，然后进行固液分离，分别收集固体残渣和上清液，上清液即为绣球菌β
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葡聚糖提取液；4）醇沉分离将上述绣球菌β
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葡聚糖提取液冷却后，加入0.9～1.2倍体积的95%乙醇溶液，搅拌均匀，置于0~4℃温度下沉淀8～12h，离心或过滤处理后，收集沉淀并洗涤；5）真空冷冻干燥将步骤4）中收集到的沉淀在真空环境下冻干，得到绣球菌高分子β
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葡聚糖。2.根据权利要求1所述的一种高分子量绣球菌β
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葡聚糖的制备方法，其特征在于，步骤1）中脱脂用...

【专利技术属性】
技术研发人员：王宏雨，张迪，罗贝贝，翁梦婷，
申请(专利权)人：福建省农业科学院食用菌研究所，
类型：发明
国别省市：