基于滤纸干血斑检测ToRCH10项抗体的方法技术

本发明专利技术提供的一种基于滤纸干血斑检测ToRCH10项抗体的方法，其中，所述方法包括以下步骤：从滤纸片干血斑取得直径为2‑4mm的血片；将血片采用样本稀释液复溶，制得复溶样品；复溶样品采用流式荧光发光法测定。上述基于滤纸干血斑检测ToRCH10项抗体的方法，采用干全血滤纸法结合流式荧光发光法测定IgG抗体或IgM抗体，解决了现有检测方法中需样本量较多的问题，减少了需要的样本量，对人体损伤小，样本便于保存和运输，特别是针对采用对象是新生儿时，无需静脉采血，采样更加方便。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗体检测方法领域，特别是涉及一种基于滤纸干血斑检测ToRCH10项抗体的方法。
技术介绍
ToRCH一词是美国学者Nahmias于1971年提出的，由多种引起宫内感染的微生物和病毒的英文名称首字母组成。其中To代表刚地弓形虫(ToxopLasmagondii，Tox)，R代表风疹病毒(RubeLLaVirus,Rub)，C代表巨细胞病毒(CytomegaLoVirus,CMV)，H代表单纯疱疹病毒1型和2型(HerpesSimpLexVirus1and2,HSV1/2)。ToRCH感染是宫内感染的重要危险因素，孕妇被感染其中一种或多种病原体后，可通过胎盘传播给胎儿或通过产道引起围产期感染，导致流产、死胎、早产、先天畸形和智力障碍等不良结局，在围产医学中称为ToRCH综合症。在免疫分析方法中，由于全血中的过氧化物酶、凝血因子等成分对于检测结果有影响，传统的均采用血清进行免疫分析检测。目前，国际上公认的较为准确的ToRCH检测方法是测定人体血清中的特异性IgG、IgM抗体，以判断受感染的情况。检测方法有酶联免疫法、化学发光法等分析检测技术。然而上述方法需要最终测定血清样本，因此需要采集较多的全血样本用于制备血清样本，当检测人群为新生儿时会较难采集血清或全血样本。另外还存在样本不易保存或运输的问题。
技术实现思路
基于此，有必要针对检测ToRCH10项抗体时样本用量多以及样本不易保存或运输的问题，提供一种基于滤纸干血斑检测ToRCH10项抗体的方法。本专利技术提供的一种基于滤纸干血斑检测ToRCH10项抗体的方法，其中，所述方法包括以下步骤：从滤纸片干血斑取得直径为2-4mm的血片；将血片采用样本稀释液复溶，制得复溶样品；复溶样品采用流式荧光发光法测定。在其中的一个实施例中，所述样本稀释液为包括羊抗人IgG抗体或牛血清白蛋白的磷酸缓冲溶液。在其中的一个实施例中，所述血片采用样本稀释液复溶是将血片置于离心管中，向离心管中加入所述样本稀释液，室温震荡0.5-2h复溶，制得复溶样品。在其中的一个实施例中，所述血片为4-8片，所述加入的样本稀释液为100-200μL。在其中的一个实施例中，所述血片为4片，所述加入的样本稀释液为100μL。在其中的一个实施例中，所述流式荧光发光法包括以下步骤：步骤1：将所述复溶样品与磁性微球悬液混合，使复溶样品中的特异性IgG抗体或IgM抗体分别结合到交联有与所述IgG抗体或IgM抗体对应抗原的磁性微球上，洗涤去除反应后的剩余液体，制得磁性微球-抗原-抗体复合物；步骤2：将藻红蛋白标记的抗人IgG抗体或IgM抗体加入步骤1制备的磁性微球-抗原-抗体复合物中，洗涤去除反应后的剩余液体，制得磁性微球-抗原-抗体-藻红蛋白标记的抗人IgG抗体或IgM抗体复合物；步骤3：将磁性微球重悬液加入步骤2制备的磁性微球-抗原-抗体-藻红蛋白标记的抗人IgG抗体或IgM抗体复合物中，采用多功能流式分析仪检测。在其中的一个实施例中，所述步骤1为：在96孔反应板上各孔加入50μL/孔的磁性微球悬液；在96孔反应板上各孔中分别加入10μL/孔的对照品、阴性质控品、阳性质控品以及复溶样品；加盖封板纸，微孔板振荡器上充分混匀，置37℃恒温箱避光反应30min；取出96孔反应板，振荡30s混匀后置于磁板上静置60s，甩掉反应液后各孔分别加入200μL/孔的洗液，重悬30s后置于磁板上静置60s，甩掉洗液，以除去反应残留物。在其中的一个实施例中，所述步骤2为：在所述步骤1处理后的96孔反应板的各孔分别加入50μL/孔的藻红蛋白标记的抗人IgG抗体或IgM抗体溶液，加盖封板纸，微孔板振荡器上充分混匀，置37℃恒温箱避光反应30min；取出96孔反应板，振荡30s混匀后置于磁板上静置60s，甩掉反应液后各孔分别加入200μL/孔洗液，重悬30s后置于磁板上静置60s，甩掉洗液，以去除反应残留物。在其中的一个实施例中，所述步骤3为：在所述步骤2处理后的96孔反应板的各孔分别加入150μL/孔的磁性微球重悬液，充分振荡，使磁性微球悬浮；将96孔反应板在多功能流式分析仪上测试。上述基于滤纸干血斑检测ToRCH10项抗体的方法，克服了免疫分析法中认为全血中的凝血因子会对检测结果产生影响、而采用血清作为检测样品进行分析的普遍认识，通过采用滤纸干血斑(全血)结合流式荧光发光法(化学发光免疫分析法中的一种)测定IgG抗体或IgM抗体，解决了现有检测方法中需样本量较多的问题，减少了需要的样本量，对人体损伤小，样本便于保存和运输，特别是针对采用对象是新生儿时，无需静脉采血，采样更加方便。附图说明为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术方法与基于静脉血清检测ToRCHIgG抗体相关性示意图；图2为本专利技术方法与基于静脉血清检测ToRCHIgM抗体相关性示意图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下通过实施例，并结合附图，对本专利技术的基于滤纸干血斑检测ToRCH10项抗体的方法进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术基于滤纸干血斑检测ToRCH10项抗体，采样量少，采样方便，结合流式荧光发光法能达到基于静脉血清检测ToRCH10项抗体的准确性。具体的，本专利技术方法包括以下步骤：从滤纸片干血斑打下直径为2-4mm的血片；血片采用样本稀释液复溶，制得复溶样品；复溶样品采用流式荧光发光法测定。样本稀释液优选为包括羊抗人IgG抗体或牛血清白蛋白的磷酸缓冲溶液。血片采用样本稀释液复溶是将4-8片血片置于离心管中，向离心管中加入100-200μL样本稀释液，室温震荡0.5-2h复溶，制得复溶样品。流式荧光发光法包括以下步骤：步骤1：将所述复溶样品与磁性微球悬液混合，使复溶样品中的特异性IgG抗体或IgM抗体分别结合到交联有与所述IgG抗体或IgM抗体对应抗原的磁性微球上，洗涤去除反应后的剩余液体，制得磁性微球-抗原-抗体复合物；其中，步骤1具体为：在96孔反应板上各孔加入50μL/孔的磁性微球悬液；在96孔反应板上各孔中分别加入10μL/孔的对照品，阴性质控品、阳性质控品以及复溶样品；其中对照品优选加入复数个孔位；加盖封板纸，微孔板振荡器上充分混匀，置37℃恒温箱避光反应30分钟；取出96孔反应板，振荡30s混匀后置于磁板上静置60s，甩掉反应液后各孔分别加入200μL/孔的洗液，重悬30s后置于磁板上静置60s，甩掉洗液，以除去反应残留物。步骤2：将藻红蛋白标记的抗人IgG抗体或IgM抗体加入步骤1制备的磁性微球-抗原-抗体复合物中，洗涤去除反应后的剩余液体，制得磁性微球-抗原-抗体-藻红蛋白标记的抗人IgG抗体或IgM抗体复合物；其中，步骤2具体为：在所述步骤1处理后的96孔反应板的各孔分别加入50μL/孔的藻红蛋白标记的抗人IgG抗体或IgM抗体溶液，加盖封板纸，微孔板振荡器上充分混匀，置37℃恒温箱避光反应30min；取出96孔反应板，振荡3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于滤纸干血斑检测ToRCH10项抗体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：从滤纸片干血斑取得直径为2‑4mm的血片；将血片采用样本稀释液复溶，制得复溶样品；复溶样品采用流式荧光发光法测定。

【技术特征摘要】
1.一种基于滤纸干血斑检测ToRCH10项抗体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：从滤纸片干血斑取得直径为2-4mm的血片；将血片采用样本稀释液复溶，制得复溶样品；复溶样品采用流式荧光发光法测定。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样本稀释液为包括羊抗人IgG抗体或牛血清白蛋白的磷酸缓冲溶液。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述血片采用样本稀释液复溶是将血片置于离心管中，向离心管中加入所述样本稀释液，室温震荡0.5-2h复溶，制得复溶样品。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述血片为4-8片，所述加入的样本稀释液为100-200μL。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述血片为4片，所述加入的样本稀释液为100μL。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流式荧光发光法包括以下步骤：步骤1：将所述复溶样品与磁性微球悬液混合，使复溶样品中的特异性IgG抗体或IgM抗体分别结合到交联有与所述IgG抗体或IgM抗体对应抗原的磁性微球上，洗涤去除反应后的剩余液体，制得磁性微球-抗原-抗体复合物；步骤2：将藻红蛋白标记的抗人IgG抗体或IgM抗体加入步骤1制备的磁性微球-抗原-抗体复合物中，洗涤去除反应后的剩余液体，制得磁性微球-抗原-抗体-藻红蛋白标记的抗人IgG抗体或IgM抗体复合物；步骤3：将磁性...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈姗姗，骆亦奇，余国良，
申请(专利权)人：杭州量康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33