一种肺炎衣原体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种肺炎衣原体IgG化学发光免疫检测试剂盒，所述试剂盒包括：肺炎衣原体抗原包被的磁微粒、吖啶酯标记的鼠抗人IgG抗体、肺炎衣原体IgG定标品、预激发液、激发液。另外本发明专利技术还公开了一种肺炎衣原体IgG化学发光免疫检测试剂盒的制备方法。本发明专利技术所述试剂盒与现有试剂盒相比操作简便，灵敏度高，检测范围广等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及体外诊断免疫检测领域，具体地，本专利技术提供了一种化学发光免疫检测肺炎衣原体IgG试剂盒及其制备方法。
技术介绍
肺炎衣原体（Chlamydia pneumoniae，Cpn）是1989 年确定的一种严格真核细胞内寄生的原核细胞微生物，根据2004年公布的伯杰氏细菌分类学手册，已被更名为肺炎嗜衣原体，与鹦鹉热嗜衣原体、流产嗜衣原体、豚鼠嗜衣原体、猫嗜衣原体、兽类嗜衣原体共同组成嗜衣原体属。CPn基因组大小约1.2Mbp，由21个Pmp基因，一个III型分泌毒力因子系统，3个丝氨酸/ 苏氨酸蛋白激酶，2个磷脂酶-D样蛋白基因组成。Cpn的感染极为普遍，呈世界性的分布，主要引起人类的呼吸道感染，与人口密度呈正相关，在临床上多以隐性、持续性感染形式存在，反复迁延导致难以治疗的并发症，与哮喘、支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、动脉粥样硬化、心肌梗塞、冠心病等心脑血管疾病的发生和发展密切相关。儿童感染率在20％左右，随着年龄的增加感染率迅速上升，青壮年可达50-60％，老年70-80％。肺炎衣原体通过呼吸道分泌物的进行人与人传播，家庭、学校、军队以及其他人口集中的工作区域可存在小范围的流行。目前，肺炎衣原体已是继肺炎链球菌和流感嗜血杆菌之后引起社区获得性肺炎（community acquired pneumonia，CAP）的主要病原体，肺炎衣原体急性感染率占23％，肺炎病人仅占感染者的小部分，70-90％为亚临床表现。肺炎衣原体感染的潜伏期为15-23天，可引起上呼吸道感染，如鼻窦炎、中耳炎和咽炎，也可引起下呼吸道感染，如支气管炎和肺炎。呼吸道感染多数表现为咽痛、发热、咳嗽，病情通常较轻，有自限性。老年肺炎衣原体肺炎病人症状可能较为严重，有时甚至致死，尤其是合并细菌性感染或存在慢性阻塞性肺疾病等时。因此，Cpn感染早期诊断对于尽早发现和治疗Cpn感染性疾病非常重要。目前 ，国内外一致认为Cpn IgM、IgG等特异性抗体测定是临床感染较为可靠的指标之一，且特异性强 、灵敏度高。Cpn IgM一般在感染后7-9天左右开始升高，3-4周达高峰，持续 4-6个月。Cpn IgG出现较Cpn IgM稍晚，持续时间更长，特异性更强。据报道，在感染后的恢复期，Cpn IgG抗体滴度明显上升，高滴度或相隔大约两周的双份血清样本IgG明显升高，可判定处于感染发展期。临床检测肺炎衣原体IgG的主要方法为酶联免疫吸附法，但该方法存在着下述的不足之处：（1） 使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原包被用具和反应容器，在使用时只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，无法进行独立的、单人份的检测；（2） 定量测定所用的试剂种类较多，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类多，加注试剂的操作也极为繁琐；（3） 缺少对检测信息的相应标注，只能通过查看试剂盒外包装盒的标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息，而且所知悉的信息在检测过程中不受控，具有很大的随意性；（4） 检测试剂在检测过程中处于开放的空间，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果的准确性；（5） 检测过程多采用手工操作，试剂或样本的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，检测结果的准确度和精密度较差；（6） 在检测项目成套试剂的数量配置及使用上均为项目数×48/96人份，如果需要检测10个项目，则试剂的配置及使用数须为10×48/96人份，如果只有一份样本需要检测10个不同的项目，也需要配置10×48/96人份的试剂，存在着不够经济合理的缺点。
技术实现思路
目前肺炎衣原体IgG检测技术存在以下缺点：检测成本高、检测灵敏度低、检测线性范围窄、重现性低、不能定量、操作复杂等。本专利技术正是为了克服以上所述缺点，公开了一种检测成本低、灵敏度高、检测线性范围广、重现性高、可以定量、操作简单的肺炎衣原体IgG试剂盒及其制备方法。本专利技术首先制备化学发光免疫分析试剂盒，主要包括：肺炎衣原体IgG单克隆抗体包被的磁颗粒、肺炎衣原体IgG单克隆抗体包被的吖啶酯以及肺炎衣原体IgG定标品；然后利用全自动化学发光免疫分析仪对定标品进行检测，绘制标准曲线，内置于电脑软件，测试实际样本，根据样本发光值计算样本浓度；最后对肺炎衣原体IgG全自动化学发光免疫分析系统进行性能（灵敏度、线性、精密度、干扰性）的评价。本专利技术与目前技术相比，具有以下优点：1、本专利技术选择吖啶酯作为标记材料，并应用于化学发光免疫分析系统，该发光体系为直接化学发光，与传统的酶促化学发光相比，该反应不需要酶的参与，更加节约成本；2、本专利技术选用的吖啶酯化学发光免疫分析系统检测灵敏度高，能够达到3.0 AU/mL；3、本专利技术选用的吖啶酯化学发光免疫分析系统线性范围宽，能达到3.0-200.0 AU/mL；4、本专利技术选用的吖啶酯化学发光免疫分析系统重复性高，批内及批间差均在5%以内，这是其它化学发光免疫分析系统难以达到的；5、本专利技术的化学发光免疫分析系统已实现样本的定量，通过内置标准曲线到测试软件，只需测试样本就可直接得到样本的浓度值；6、本专利技术的化学发光免疫分析系统已实现全自动化，试剂及样本的添加全有仪器完成，操作更加简便，减少了人为的误差。附图说明图1为实施例3得到的肺炎衣原体IgG标准曲线图。具体实施方式实施例1：肺炎衣原体IgG化学发光免疫检测试剂盒制备方法（1）肺炎衣原体IgG单克隆抗体包被的纳米磁珠制备：取50mg羧基化的磁微粒（粒径为0.05-1um）悬浮液，磁分离去上清，用0.02 M，pH为5.5 MES缓冲液重悬，加入0.5-2mL新配置的10 mg/mL的EDC水溶液，活化磁珠表面羧基，加入3-5 mg 肺炎衣原体IgG单克隆抗体，室温下混悬2-10 h，磁分离，去除上清，用含2% BSA 的0.1 M pH为8.0的Tris缓冲液重悬到1mg/mL，得到肺炎衣原体IgG单克隆抗体包被的磁颗粒，每瓶5mL分装保存于4℃备用。（2）肺炎衣原体IgG衍生物标记的吖啶酯的制备：取50 uL 25mg/mL的肺炎衣原体IgG衍生物，加入150 uL 0.1-0.2 M pH 9.0-9.5的碳酸盐缓冲液，混匀，然后加入1-2 uL 5 mg/mL的吖啶酯混匀，室温下避光反应，1-2 h后取出，用2 mL的zeba离心脱盐柱脱盐处理，脱盐过程中首先分别用纯净水及TBS缓冲液进行处理，最后加入得到的肺炎衣原体IgG衍生物标记的吖啶酯溶液，收集离心管中的液体至保存管得到肺炎衣原体IgG衍生物标记的吖啶酯，每瓶5 mL分装保存于4℃备用。（3）肺炎衣原体IgG定标品的制备：用标准品缓冲液（40 mM Tris-HCl，0.5% BSA，1% NaCl，pH 8.0）将肺炎衣原体IgG配置成浓度为0 AU/mL、20AU/mL、40 AU/mL、80 AU/mL、160 AU/mL、320 AU/mL，每瓶0.5 mL分装冻干，4 ℃保存备用。(4)化学发光预激发液的配制：量取1.0升纯化水，依次加入80uL质量分数为20%的双氧水(H2O2)、1.0克叠氮化钠本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肺炎衣原体IgG化学发光免疫检测试剂盒，所述试剂盒包括：肺炎衣原体抗原包被的纳米磁微球、吖啶酯标记的鼠抗人IgG抗体、化学发光底物液、肺炎衣原体IgG定标品。

【技术特征摘要】
1.一种肺炎衣原体IgG化学发光免疫检测试剂盒，所述试剂盒包括：肺炎衣原体抗原包被的纳米磁微球、吖啶酯标记的鼠抗人IgG抗体、化学发光底物液、肺炎衣原体IgG定标品。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述肺炎衣原体抗原包被的固相载体为磁微粒。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述肺炎衣原体抗原包被的固相载体为羧基化的粒径为0.05-1um磁微粒。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为吖啶酯、吖啶酯磺酰胺、吖啶酯甲苯磺酰胺、吖啶酯对甲基磺酰胺、吖啶酯三氟甲基磺酰胺。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物优选吖啶酯。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物液包括化学发光激发液、化学发光预激发液。7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光预激发液为质量分数0.005% ~ 0.5%的双氧水(H2O2)溶液，激发液为0.005mol/L ~ 0.025mol/L的氢氧化钠(NaOH)溶液。8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述肺炎衣原体IgG定标品为用标准品缓冲液将肺炎衣原体IgG配制成浓度为0 AU/mL、20AU/mL、40 AU/mL、80 AU/mL、160 AU/mL、320 AU/mL，4 ℃保存备用。9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的制备方法，其特征在于包括肺炎衣原体抗原包被的磁微粒的制备、吖啶酯标记的鼠抗人IgG抗体的制备、化学发光底物液的制备、肺炎衣原体IgG定标品的制备。10.根据权利要求1和权利要求9所述试剂盒的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）肺炎衣原体抗原包被的磁微粒的制备：取...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋锦城，刘星，夏福臻，钱纯亘，徐向红，
申请(专利权)人：深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44