人肺炎衣原体量子点免疫层析检测卡制造技术

本实用新型专利技术提供了一种人肺炎衣原体量子点免疫层析检测卡，该检测卡包括底板、样品垫、吸水垫、结合垫和检测层；结合垫包被有量子点标记的抗人肺炎衣原体纳米探针；检测层是由带有一条检测线以及一条质控线的固相硝酸纤维素膜构成；检测线包被有鼠抗人肺炎衣原体98KD膜蛋白多克隆抗体；质控线包被有抗兔IgG；检测层粘贴在底板上；结合垫和吸水垫分别设置在检测层两端部上方且与检测层部分重叠后分别与检测层和底板粘贴；样品垫设置在结合垫上方且与结合垫部分重合后分别与结合垫及底板粘贴。本实用新型专利技术具有操作简便、检测快速、可定量及高灵敏度等优点。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本技术提供了一种人肺炎衣原体量子点免疫层析检测卡，该检测卡包括底板、样品垫、吸水垫、结合垫和检测层；结合垫包被有量子点标记的抗人肺炎衣原体纳米探针；检测层是由带有一条检测线以及一条质控线的固相硝酸纤维素膜构成；检测线包被有鼠抗人肺炎衣原体98KD膜蛋白多克隆抗体；质控线包被有抗兔IgG;检测层粘贴在底板上；结合垫和吸水垫分别设置在检测层两端部上方且与检测层部分重叠后分别与检测层和底板粘贴；样品垫设置在结合垫上方且与结合垫部分重合后分别与结合垫及底板粘贴。本技术具有操作简便、检测快速、可定量及高灵敏度等优点。【专利说明】人肺炎衣原体量子点免疫层析检测卡
本技术涉及医学检测
，具体为一种人肺炎衣原体量子点免疫层析检测卡。
技术介绍
肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae, Cpn)作为衣原体属的一种重要的呼吸道病原微生物，自从上个世纪80年代中期由Grayston等人正式命名，在随后的时间里被研究者们广泛研究。现仅知人是该病原体的宿主，感染方式可能为人与人之间通过呼吸道分泌物传播。5岁以下儿童极少受染，8岁以上儿童及青年易被感染，尤其是人群聚集处，如家庭、学校、兵营中易流行，经血清流行病学调查，证实成人中至少有40%已受到该衣原体感染，大部分为亚临床型。肺炎衣原体是专性细胞内寄生的微生物，寄居于人呼吸道和咽喉等处，在儿童和成人中产生上呼吸道和呼吸道感染，常引起肺炎和支气管炎等呼吸道疾病。目前研究表明，其还与动脉粥样硬化综合症、老年痴呆症、心肌炎、哮喘等疾病有关。临床上由于其与其他呼吸道病原体引起的感染症状类似，因此常难以根据临床表现、X-射线检查等得出结论，确诊往往依赖于实验室诊断。快速有效的诊断方法应该是在疾病的发病初期就可以得到明确的诊断，便于实施针对性的治疗，阻止病情的发展迁延。 尽管肺炎衣原体在全球范围内传播，但可用于实验室诊断的标准化商品试剂的种类极少。目前，肺炎衣原体感染的诊断方法有血清学检测法，核酸检测法和病原体直接检测法。检测血清中肺炎衣原体IgG、IgA、IgM抗体常用的有5种方法:微量免疫荧光抗体检测(MIF)，补体结合试验(CF)，重组酶免疫测定(rEIA)，血清补体结合一酶免疫测定试验(SeroCF — EIA)，OY酶免疫试剂盒(LoY— EIA)。这5种方法要求肺炎衣原体不同成分做为抗原，而且肺炎衣原体抗体的检出只能说明该个体感染过肺炎衣原体，却不能反映体内是否仍有肺炎衣原体活菌存在，并且血清学特异性抗体检测常需要根据IgM抗体的动态结果进行判断，需要较长的时间。同时，这些技术均存在灵敏度低、操作步骤复杂、需要专业人员操作、重复性差、检测时间长、检测特异性差、成本较高等缺陷，因而难以满足临床的实际需要。 核酸检测包括核酸杂交和聚合酶链式反应(PCR)，核酸杂交检测肺炎衣原体的特异性强，但敏感性不高，主要用于PCR结果的检测、判定，尚未直接用于临床标本的检测；PCR具有较高的敏感性，应用肺炎衣原体外膜蛋白基因片段的一对特异性引物对临床咽拭子进行PCR测定，其结果与血清学检测具有较好的一致性。但PCR实验对实验室有特殊要求，标本处理、扩增和检测要求严格，且易出现假阳性，在我国还不能作为常用的临床诊断方法。 抗原检测方法有鸡胚卵黄囊分离培养和细胞培养法(常用HL和Hep-2两种细胞)，然后采用荧光标记或酶标记抗体检测标本中的衣原体，但该法存在操作步骤复杂，细胞培养时间长等明显缺陷，并不适合临床应用。近年也尝试直接应用于临床标本的检验，其敏感性与标本采集有关:痰液和咽拭子涂片后用EIA可检测肺炎衣原体抗原的存在，其敏感性、特异性和可重复性不理想，且仅限于急性呼吸道感染；酶联免疫吸附试验(ELISA)也可以直接检出病原体，主要检测肺炎衣原体外膜蛋白_2，所用抗体为抗衣原体属特异性抗体，不能直接识别肺炎衣原体，与“金标准”(MIF)相比，虽然很灵敏，特异性却不高。 因此，目前建立具高灵敏度、高特异性的人肺炎衣原体抗原快速检测法以满足临床的检测需求就显得非常必要了。
技术实现思路
本技术针对
技术介绍
中现存的几种人肺炎衣原体在检测方式中遇到的技术瓶颈，提出了一种具有操作简便、检测快速、可定量及高灵敏度等优点的人肺炎衣原体量子点免疫层析检测卡。 本技术的目的是通过以下技术手段来实现的: 一种人肺炎衣原体量子点免疫层析检测卡，其特征在于:所述人肺炎衣原体量子点免疫层析检测卡包括底板、样品垫、结合垫、检测层以及吸水垫；所述结合垫包被有量子点标记的抗人肺炎衣原体纳米探针；所述检测层是由带有一条检测线及一条质控线的固相硝酸纤维素膜构成；所述检测线包被有鼠抗人肺炎衣原体98KD膜蛋白多克隆抗体；所述质控线包被有抗兔IgG ;所述检测层粘贴在底板上；所述结合垫以及吸水垫分别设置在检测层两端部的上方且与检测层部分重叠后分别与检测层以及底板粘贴在一起；所述样品垫设置在结合垫上方且与结合垫部分重合后分别与结合垫及底板粘贴在一起。 作为优选，本技术所采用的量子点是羧基化两亲聚合物修饰的水溶性CdSe/ZnS量子点。 作为优选，本技术所采用的抗兔IgG包括但不限于羊抗兔IgG。 作为优选，本技术所采用的检测层长2cm，所述检测层粘贴在长度是 6.6-7.7cm的底板表面中间段；所述检测层与粘贴在检测层以及底板上的且长度是2.5-3cm的吸水垫重叠0.2-0.4cm ;所述检测层与粘贴在检测层以及底板上的且长度是0.5-0.8cm的结合垫重叠0.2-0.4cm ;所述结合垫与粘贴在结合垫以及底板上的长度是 2.5cm的样品垫重叠0.2一0.4cm ;所述检测线与质控线的间距是0.5-0.8cm ;所述底板的宽度是 0.3—0.5cm。 作为优选，本技术所采用的吸水垫是吸水滤纸；所述底板是PVC板。 与现有技术相比，本技术具有如下优点: 1、本技术是将免疫层析与量子点标记技术综合起来，利用本技术制备的高效价、高特异性多克隆抗体，通过激发荧光来对样品进行检测，具有灵敏度高的特点(其对人肺炎衣原体的检测底线为lng/ml)，用其对临床样品的检测结果与目前对该病原体的检测“金标准”-培养法的相比无统计学差异。 2、本技术所用的抗体均是识别人肺炎衣原体特异性98KD表面抗原胞外保守区的多克隆抗体，其特异性高，属于种特异性抗体，不与沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体起交叉反应，同时其较目前最广泛使用的单克隆抗体而言制备成本低廉，因此，本技术检测成本较低。 3、本技术检测方法简单，检测快速，易于判定，结果判定在20分钟内完成，既可以用紫外检测仪进行定性检测，亦可结合CCD扫描等技术进行定量检测，检测成本低廉，克服了现有技术GnELISA)检测成本高、操作复杂繁琐、耗时长、且必需专业人员才能操作的不足。 4、由于检测卡检测的是人肺炎衣原体抗原而非抗体(抗体的出现需要感染几天至几周以后)，故该方法在人肺炎衣原体的早期临床诊断和防治、病原体亚型鉴别、流行病学调查等方面具有很高的实用价值。 5、本技术首次以人肺炎衣原体所独有的98KD表面膜蛋白作为目标抗原，其检测特异本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人肺炎衣原体量子点免疫层析检测卡，其特征在于：所述人肺炎衣原体量子点免疫层析检测卡包括底板、样品垫、结合垫、检测层以及吸水垫；所述结合垫包被有量子点标记的抗人肺炎衣原体纳米探针；所述检测层是由带有一条检测线及一条质控线的固相硝酸纤维素膜构成；所述检测线包被有鼠抗人肺炎衣原体98KD膜蛋白多克隆抗体；所述质控线包被有抗兔IgG；所述检测层粘贴在底板上；所述结合垫以及吸水垫分别设置在检测层两端部的上方且与检测层部分重叠后分别与检测层以及底板粘贴在一起；所述样品垫设置在结合垫上方且与结合垫部分重合后分别与结合垫及底板粘贴在一起。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡征，杨波，董俊，
申请(专利权)人：董俊，
类型：新型
国别省市：湖北;42