【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及ー种用量子点荧光免疫层析试纸条检测的方法，属于免疫检测领域。
技术介绍
免疫层析试纸条检测也称为免疫侧向层祈，是ー种快速、简便、灵敏、直观、价格低廉，并可进行现场检测的方法。具有放射性免疫、酶联免疫吸附法、气相色谱法、液相色谱法、毛细管电泳等仪器检测方法所不具备的优点，在检测技术中处于重要地位，是对传统和大型仪器检测方法的有力补充。随着社会的发展，人类对生活质量有了更高的要求，免疫层析检测技术在面对人类疾病、环境污染物、食品安全、动物医学等重大问题时具有重要的作用。当前免疫层析产品主要是基于胶体金技术而开发的，在医学检验、毒品检测、食品安全检测等领域得到了广泛的应用。但该技术由于存在颗粒粒径均一性差、免疫标记物不稳定、顔色単一只能单指标检测、无法实现准确定量检测、灵敏度不高等不足，无法满足人们的需求。因此专利技术高灵敏度、多指标同时检测、简便、直观、价格低廉的免疫层析检测方法十分必要。量子点是ー种在光源激发下发射出明亮荧光的半导体纳米晶粒。具有以下特点1、粒径不同，发光颜色不同，并且可以用单一光源激发多种不同顔色的量子点；2、量子点的发射谱狭窄对称...
【技术保护点】
一种用量子点荧光免疫层析试纸条检测的方法，其特征是至少采用如下步骤：（1）.?量子点标记蛋白液的制备：取浓度为1μM?10μM的0.2?2nmol羧基水溶性CdSe/ZnS量子点平衡至室温，并用超声波处理；将量子点、EDC、蛋白均用20mM~200mM?、pH6.0~7.4的磷酸盐溶液或硼酸盐溶液溶解；按照1μmol~5μmol?EDC/2nmol量子点的比例加入EDC，EDC即碳二亚胺盐酸盐，涡旋振荡混匀，再按1nmol~100nmol?蛋白/1nmol量子点的比例加入浓度为1~10mg/mL的蛋白，涡旋混匀，室温搅拌反应1?4小时；反应结束后用截留分子量为10kDa?1...
【技术特征摘要】
1.一种用量子点荧光免疫层析试纸条检测的方法，其特征是至少采用如下步骤 (1).量子点标记蛋白液的制备取浓度为Iμ M-1O μ M的O. 2-2nmol羧基水溶性CdSe/ZnS量子点平衡至室温，并用超声波处理；将量子点、EDC、蛋白均用20mlT200mM、ρΗ6. (Γ7· 4的磷酸盐溶液或硼酸盐溶液溶解；按照I μ mo广5 μ mo I EDC/2nmol量子点的比例加入EDC, EDC即碳二亚胺盐酸盐,润旋振荡混勻，再按InmoflOOnmol蛋白/Inmol量子点的比例加入浓度为f 10mg/mL的蛋白，涡旋混匀，室温搅拌反应1_4小时；反应结束后用截留分子量为IOkDa-1OOkDa的离心超滤管超滤浓缩至20-100 μ L，然后采取凝胶尺寸排阻色谱法进行纯化，收集有荧光的部分，再用离心超滤管浓缩至量子点浓度为O. 2-2 μ mol/L,保存于lOmM-lOOmM、pH为7. 4 9. O的、含有质量百分比浓度为O. 05%的NaN3的硼酸盐缓冲液中，2 8°C冰箱保存备用； (2).量子点标记蛋白检测液的制备将上述量子点标记蛋白液取出放置至室温，用PBS-TBN稀释100-1000倍成量子点标记蛋白检测液，PBS-TBN为含20mM_150mM氯化钠NaCl、0. 02%-0· 1% 吐温Tween-20、2mg/mL-10m/mL 牛血清白蛋白 BSA、0. 05% 叠氮化钠NaN3的IOmM-1OOmM磷酸盐缓冲液PB，然后置于2 8°C冰箱保存备用； (3).制备包被有检测指标的反应膜检测指标为抗体或抗原，以硝酸纤维素膜为反应膜，将反应膜固定粘贴在PVC背衬的中间部位，将抗原或抗体用包被缓冲液调节浓度至0.1 5mg/mL,并将二抗IgG用包被缓冲也调节浓度至0.1 5mg/mL,按照0. 8 1. 2uL/cm的膜液量，将抗原或抗体，以及二抗IgG喷到反应膜上对应的检测区和控制区上进行包被，检测区和控制区之间间隔为3 7mm，放置25 37°C烘箱处理1_3小时，置于恒温恒湿保藏箱里备用，所用包被缓冲液为含有20mM-150mM氯化钠NaCl、0. 05%_3%聚...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭俊，朱小波，庞代文，张志凌，余慧，
申请(专利权)人：武汉珈源生物医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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