【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体涉及一种结合了免疫磁微粒分离技术和化学发光免疫分析技术的癌抗原CA15-3的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法。
技术介绍
癌抗原CA15-3(Carbohydrate Antigen 15-3, CA15-3)是一种多形态上皮糖蛋白，分子量约为400kD，分子结构尚不完全清楚。CA15-3是1984年由Hilkens等从人乳脂肪球膜上糖蛋白MAM-6制成的单克隆抗体(115-DB),与此同时Kufu等自肝转移乳腺癌细胞膜制成单克隆抗体(DF-3)，两者合起来故被命名CA15-3。CA15-3主要用于乳腺癌的监测和筛选，以及用于评价患者预后情况的指标。乳腺癌患者30-50%CA15-3含量增高，有转移灶者增高可达80% ;发现癌转移的敏感性比癌胚抗原和组织多肽抗原高，且早于临床发现转移；CA15-3是监测病人术后复发情况，特别是癌症转移患者的术后监测的重要指标，血清CA15-3水平增高，提示乳腺癌的局部或全身复发，且增高早于核素检查和临床检查；用于对治疗的随查评估及早期发现转移灶，CA15-3的增高比临床诊断出转移...
【技术保护点】
一种癌抗原CA15?3的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒，所述试剂盒包括：第一试剂：含荧光素标记的癌抗原CA15?3抗体的溶液；第二试剂：含碱性磷酸酶标记的癌抗原CA15?3抗体的溶液；磁分离剂：含包被着荧光素抗体的磁微粒的悬浮液；其中，该碱性磷酸酶标记的癌抗原CA15?3抗体由碱性磷酸酶与癌抗原CA15?3抗体通过交联剂4?(N?马来酰亚胺基甲基)环己烷?1?羧酸琥珀酰亚胺酯和2?亚氨基硫烷盐酸盐连接构成。
【技术特征摘要】
1.一种癌抗原CA15-3的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒，所述试剂盒包括第一试剂含突光素标记的癌抗原CA15-3抗体的溶液；第二试剂含碱性磷酸酶标记的癌抗原CA15-3抗体的溶液；磁分离剂含包被着荧光素抗体的磁微粒的悬浮液；其中，该碱性磷酸酶标记的癌抗原CA15-3抗体由碱性磷酸酶与癌抗原CA15-3抗体通过交联剂4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯和2-亚氨基硫烷盐酸盐连接构成。2.根据权利要求1所述的癌抗原CA15-3的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒，其特征在于所述磁分离试剂中，荧光素抗体与磁微粒之间相化学偶联。3.根据权利要求1或2所述的癌抗原CA15-3的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒，其特征在于所述第一试剂中的荧光素标记的癌抗原CA15-3抗体的浓度为O. 5^1 μ g/mL，所述第一试剂的pH为7-9 ;所述第二试剂中的碱性磷酸酶标记的癌抗原CA15-3抗体的浓度为O.5^1 μ g/mL，所述第二试剂的pH为7-9。4.一种如权利要求3所述的癌抗原CA15-3的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒的制备方法，其包括分别制备所述含有荧光素标记的癌抗原抗体的溶液、所述含有碱性磷酸酶标记的癌抗原CA15-3抗体的溶液以及所述包被有荧光素抗体的磁微粒的悬浮液的步骤，其特征在于所述含有碱性磷酸酶标记的癌抗原CA15-3抗体的溶液的制备过程如下①将癌抗原CA15-3抗体加入交联剂2-亚氨基硫烷盐酸盐溶液中室温静置后，再加入甘氨酸溶液，再次室温静置，收集活化后的癌抗原CA15-3抗体，于2l°C下保存备用；②将碱性磷酸酶溶液加入交联剂4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯溶液，室温静置，收集活化后的碱性磷酸酶，于2l°C下保存备用；③将上述步骤①所得活化后的癌抗原CA15-3抗体与步骤②所得活化后的碱性磷酸酶混合，静置反应，使生成碱性磷酸酶标记的癌抗原CA15-3抗体，反应结束后，将反应液用Supperdex200凝胶纯化柱纯化,选择具有适当pH值的缓冲液调整浓度和pH值即得所述第二试剂；其中，所述的癌抗原CA15-3抗体、所述碱性磷酸酶的纯度均大于等于95wt%，且所述碱性磷酸酶的比活性超过1000u/mg。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于步骤①中，取癌抗原CA15-3抗体，加入偶联剂2-1T溶液溶解，室温...
【专利技术属性】
技术研发人员：于大为，程晓蕾，赵文姬，
申请(专利权)人：苏州浩欧博生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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