本发明专利技术涉及一种定量检测癌胚抗原的免疫层析试纸条及其制备方法，主要包括经过处理的样本垫、包被有检测磁珠的第一结合垫、包被有信号磁珠的第二结合垫、硝酸纤维素膜、底板和吸水纸，硝酸纤维素膜上固定有IgG抗体即质控线和CEA包被抗体即检测线。制备方法包括将吸水纸、硝酸纤维素膜、结合垫、样本垫依次叠加组合。本发明专利技术综合了磁珠与放大系统的特点，达到了灵敏特异、定量检测的目的，成本低廉，同时支持小样本与大样本检测，操作简单，检验方便快速，适合大规模的推广生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医学检测领域，特别涉及一种定量检测癌胚抗原的免疫层析试纸条及其制备方法。
技术介绍
癌胚抗原(Carcino-embryonic antigen,CEA)是细胞表面的一种糖蛋白，通常在发育中的胚胎组织内能够检测到较高的CEA含量。正常成人血清内CEA的含量很低，但多种癌症患者体内的CEA水平存在异常升高。CEA与肿瘤的扩散和转移息息相关，临床上已将其作为一种较广谱的糖蛋白肿瘤标志物，广泛应用于胃肠癌、肺癌、肠癌以及胰腺癌等的检测中，用来进行良性肿瘤与恶性肿瘤的区分以及肿瘤分期情况的判断等。一些非肿瘤疾病，如炎症、息肉患者血清中的CEA含量也会有一定程度的增多，但恶性肿瘤将导致CEA水平远远高于正常值。目前临床上判定CEA的正常临界值为5ng/ml，将其作为判断癌症的发生和预后情况的重要辅助指标。临床上用于检测血清中CEA含量的方法主要有电化学发光免疫分析法(electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA)、放射免疫测定法(radioimmunoassay，RIA)以及酶联免疫分析法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)等等。ECLIA被广泛应用于临床检测，此种方法的灵敏度高，特异性好，分析结果稳定，对环境的污染小，是一种新发展的免疫检测方法。但ECLIA技术操作复杂，依赖于精密仪器平台，成本和患者的检测费用较高。RIA方法的应用范围较广，操作简便，但对环境会造成放射性污染，试剂的储存时间短。ELISA方法的成本，应用领域广泛，但其结果的稳定性有待提高，且ELISA一般用于大批量样本检测，单人或少量样本检测比较困难，操作过程繁琐。侧流免疫层析技术(lateral-flowimmunoassay,LFIA)作为一种方便、快速的免疫诊断技术，得到了广泛关注和迅速发展。LFIA技术基于免疫标记的纳米颗粒，如纳米金、量子点等，但针对CEA的免疫层析检验的灵敏度大多在ng/ml级别，而且多局限于定性或半定量检测。磁性纳米颗粒(magnetic nanoparticles,MNPs)被越来越多地用作纳米生物标记材料来替代传统的标记物。MNPs具有稳定的物理性质，在生物标记的过程中不受环境的影响，不易与其它物质反应，检验的重复性好。更重要的是，MNPs能够产生稳定的磁信号，经过磁信号检测仪的接收，将其转化成相关的生物信号，实现定量检测。基于磁信号的检测不局限于免疫试纸条表面的纳米磁珠粒子，深层的不被肉眼可见的纳米磁珠也能够产生磁信号，因此纳米磁珠用于免疫层析检验能够达到更高的灵敏度。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种定量检测癌胚抗原的免疫层析试纸条及其制备方法，该试纸条综合了磁珠与放大系统的特点，达到了灵敏特异、定量检测的目的，成本低廉，同时支持小样本与大样本检测，操作简单，检验方便快速，适合大规模的推广生产。本专利技术的一种定量检测癌胚抗原的免疫层析试纸条，包括底板、吸水垫、硝酸纤维素膜、第一结合垫、第二结合垫和样本垫；所述第一结合垫包被有检测磁珠，所述第二结合垫包被有信号磁珠，所述硝酸纤维素膜上喷有羊抗鼠(IgG)抗体和CEA包被抗体。本专利技术的一种定量检测癌胚抗原的免疫层析试纸条的制备方法，包括：(1)将IgG抗体和CEA包被抗体稀释，随后喷淋在硝酸纤维素膜上形成C线(质控线)和T线(检测线)，烘干；(2)取玻璃纤维素膜浸泡于样本垫处理液中，取出烘干，得到样本垫；取另一玻璃纤维素膜浸泡于结合垫处理液中，取出烘干，得到结合垫；(3)取磁珠原液，用MES缓冲液清洗、磁分离、重悬，加入EDC、CEA抗体和生物素寡核苷酸探针进行标记，再加入牛血清白蛋白BSA继续标记，磁分离、清洗，用结合垫处理液重悬，将所得溶液铺在上述结合垫上，烘干，得到第一结合垫；(4)取磁珠原液，用MES缓冲液清洗、磁分离、重悬，加入EDC和链霉亲和素SA进行标记，磁分离、清洗，用结合垫处理液重悬，将所得溶液铺在另一结合垫上，烘干，得到第二结合垫；(5)将吸水垫、步骤(1)得到的硝酸纤维素膜、第一结合垫、第二结合垫、步骤(2)得到的样本垫依次交错叠加，切割成免疫层析试纸条。所述步骤(1)中的IgG抗体用灭菌氯化钠溶液稀释；CEA包被抗体用PBS缓冲液稀释。所述步骤(2)中的样本垫处理液的组成为：0.003M硼酸，0.004M硼酸钠，0.5％w/v氯化钠，0.5％w/v牛血清白蛋白BSA和2％v/v Tween-20。所述步骤(2)和(4)中的结合垫处理液的组成为：0.003M硼酸，0.004M硼酸钠，10％w/v蔗糖，2％w/v海藻糖，0.05％v/v Tween-20。所述步骤(3)中的标记温度为25℃，标记时间为30min～1.5h。所述步骤(4)中的标记温度为25℃，标记时间为2h。所述步骤(5)中交错1～2mm叠加。所述步骤(5)中的免疫层析试纸条使用方法为：将试纸条放置在Squid超导量子干涉器件中，匀速稳定移动试纸条，磁性粒子在装置中的运动引起磁场变化，产生随时间变化的磁场强度值pT/V，经过相关系数的换算，得到磁场强度值pT。本专利技术在传统的免疫层析检验技术的基础上，利用生物素-链霉亲和素系统
(biotin-streptavidin system，BSS)稳定地连接检测纳米磁珠和信号纳米磁珠，实现检测灵敏度的放大。结合磁珠可以产生稳定磁信号的优势，实现了针对CEA的高灵敏度定量免疫层析检验。具体的，本专利技术是以生物素-链霉亲和素系统为放大原理，将标记有CEA抗体的200nm免疫磁珠同时标记生物素-寡核苷酸探针，与标记有链霉亲和素(SA)的200nm信号磁珠连接在一起。有益效果(1)本专利技术通过生物素-链霉亲和素系统，对检测信号的灵敏度进行了提高，使改进后的试纸条检测CEA的灵敏度提高了20倍。(2)本专利技术利用磁珠稳定的磁性能，通过磁信号检测仪检测硝酸纤维素膜上条带的磁信号，实现了定量检测。(3)本专利技术综合了磁珠与放大系统的特点，达到了灵敏特异、定量检测的目的，制备过程成本低廉，同时支持小样本与大样本检测，操作简单，检验方便快速，适合大规模的推广生产。附图说明图1为本专利技术免疫层析试纸条各部分组成示意图；图2为本专利技术免疫层析试纸条中第一结合垫上预包被检测磁珠和第二结合垫上预包被信号磁珠示意图；图3为本专利技术检测过程中发生的具体反应的示意图。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1如图1所示，本实施例提供了一种定量检测癌胚抗原的免疫层析试纸条，包括底板1、吸水垫2、硝酸纤维素膜3、第一结合垫4、第二结合垫5和样本垫6。第一结合垫4包被有检测磁珠，第二结合垫5包被有信号磁珠。硝酸纤维素膜3上喷有IgG抗体(C线)7和CEA包被抗体(T线)8。将血清样品逐滴滴加到样本垫上，液体依次流经第二结合垫、第一结合垫、T线和C线。当样品中含有CEA抗原时，抗原先与第一结合垫上的检测磁珠结合，液体由于层析作用本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种定量检测癌胚抗原的免疫层析试纸条，包括底板(1)、吸水垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、第一结合垫(4)、第二结合垫(5)和样本垫(6)；其特征在于：所述第一结合垫(4)包被有检测磁珠，所述第二结合垫(5)包被有信号磁珠，所述硝酸纤维素膜(3)上喷有IgG抗体(7)和CEA包被抗体(8)。
【技术特征摘要】
1.一种定量检测癌胚抗原的免疫层析试纸条，包括底板(1)、吸水垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、第一结合垫(4)、第二结合垫(5)和样本垫(6)；其特征在于：所述第一结合垫(4)包被有检测磁珠，所述第二结合垫(5)包被有信号磁珠，所述硝酸纤维素膜(3)上喷有IgG抗体(7)和CEA包被抗体(8)。2.一种定量检测癌胚抗原的免疫层析试纸条的制备方法，包括：(1)将IgG抗体和CEA包被抗体稀释，随后喷淋在硝酸纤维素膜上形成C线和T线，烘干；(2)取玻璃纤维素膜浸泡于样本垫处理液中，取出烘干，得到样本垫；取另一玻璃纤维素膜浸泡于结合垫处理液中，取出烘干，得到结合垫；(3)取磁珠原液，用MES缓冲液清洗、磁分离、重悬，加入EDC、CEA抗体和生物素寡核苷酸探针进行标记，再加入牛血清白蛋白BSA继续标记，磁分离、清洗，用结合垫处理液重悬，将所得溶液铺在上述结合垫上，烘干，得到第一结合垫；(4)取磁珠原液，用MES缓冲液清洗、磁分离、重悬，加入EDC和链霉亲和素SA进行标记，磁分离、清洗，用结合垫处理液重悬，将所得溶液铺在另一结合垫上，烘干，得到第二结合垫；(5)将吸水垫、步骤(1)得到的硝酸纤维素膜、第一结合垫、第二结合垫、步骤(2)得到的样本垫依次交错叠加，切割成免疫层析试纸条。3.根据权利要求1所述的一种定量检测癌胚抗原的免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的IgG抗体用灭菌氯化钠溶液稀释；CEA包被抗体用PB...
【专利技术属性】
技术研发人员：毛红菊，刘芳铭，孔祥燕，张宏莲，金庆辉，赵建龙，
申请(专利权)人：中国科学院上海微系统与信息技术研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31
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