一种一步法乙肝病毒PreS1抗原酶联免疫测定试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种“一步法PreS1抗原酶联免疫测定试剂盒”，能非常专一地检测患者血清中HBsAg-PreS1蛋白的浓度。该试剂盒是包括主要成分亲和素预先包被后加入生物素化抗乙肝病毒PreS1单克隆抗体或抗HBS抗体的酶标板包被反应条、酶标记前S1抗体、阳性对照液一支、阴性对照液一支、20倍浓洗涤液1瓶、底物缓冲液甲1瓶、底物缓冲液乙1瓶及终止液(2NH2SO4)1瓶组成。本发明专利技术具有较好的均一性，特异性，灵敏度，采快速简便，用一步法可在30分钟左右获得实验结果，比PCR检测法省时(PCR法最快需要6-8小时完成实验)，经临床试用PreS1蛋白检测阳性与PCR检测的HBV-DNA阳性有很好的符合率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属生物制剂
具体涉及一种一步法乙肝病毒前SI (PreSl)抗原(Ag)酶联免疫测定试剂盒及制备方法。
技术介绍
我国属于乙型肝炎病毒高发区，乙型肝炎已经成为危害我国人民身体健康的社会公众性问题，乙型肝炎病毒血清标志物(HBVM)作为乙型肝炎病毒诊断的常规项目已不能满足临床，HBV-DNA、病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒前SI (PreSlAg)抗原都作为HBV在人体内感染和复制的证据。HBV为嗜肝DNA病毒，由一个不完全双链DNA组成，约3200个氨基酸，有4个开放读码框为S区、C区、P区、X区。S基因区又可分成三段，从上游开始依次为前SI (preSl)区、前S2(preS2)区和S区。PreSl原具有较强的免疫原性，是由108或119个氨基酸组成。HBV以前SI区氨基酸21-47片段作为结合部位结合肝细胞，只要这一片段完好就有传染性和高度的免疫源性。PreSl抗原出现在急性乙型肝炎病毒感染的最早期，比HbeAg出现早，是早期传染性的标志。乙型肝炎病毒的大量复制，导致大量的PreSlAg表达，刺激机体产生较强的免疫应答，从而导致大量肝细胞损伤，并认为Pr本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种“一步法乙肝病毒PreS1抗原酶联免疫测定试剂盒”，其特征在于该试剂盒包括：(1)用亲和素先包被酶标板，并加入生物素标记的前S1单克隆抗体或抗HBS进行二次包被反应，制成抗体预包被反应条48?96孔；(2)酶标记前S1抗体；(3)阳性对照液1支、阴性对照液1支；(4)20倍浓缩洗液1瓶；(5)底物缓冲液甲1瓶；(6)底物缓冲液乙1瓶；(7)终止液(4N?H2SO4)1瓶组成。

【技术特征摘要】
1.ー种“一歩法こ肝病毒PreSl抗原酶联免疫测定试剂盒”，其特征在于该试剂盒包括 (1)用亲和素先包被酶标板，并加入生物素标记的前SI单克隆抗体或抗HBS进行二次包被反应，制成抗体预包被反应条48-96孔； (2)酶标记前SI抗体； (3)阳性对照液I支、阴性对照液I支； (4)20倍浓缩洗液I瓶； (5)底物缓冲液甲I瓶； (6)底物缓冲液こI瓶； (7)終止液(4NH2S04) I瓶组成。2.—种如权利I所描述的ー种“ー步法こ肝病毒PreSl抗原酶联免疫测定试剂盒”的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤 (1)利用HBV-DNA重组PreSlAg基因片段通过原核表达或者真核表达制备抗原； (2)制备抗体的制备和纯化用上述重组抗原免疫豚鼠，得抗PreSl抗血清或免疫Balb/C小鼠得阳性鼠脾细胞与骨髄瘤细胞融合成杂交瘤细胞，筛选阳性克隆建株，得腹水；抗血清或腹水用盐析、离子交换层析、或者亲和层析法进行纯化，得纯抗PreSl抗体，其纯度95%以上，效价大于10万。(3)用亲和素先包被酶标板，并加入生物素标记的抗こ肝病毒PreSl单克隆抗体或抗HBS进行二次包被反应，制成抗体预包被反应条48-96孔； (4)辣根过氧化物酶(HRP)与纯化的抗こ肝病毒PreSl抗体酶联，制成酶标抗体； ...

【专利技术属性】
技术研发人员：张年，
申请(专利权)人：武汉康珠生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：