乙肝病毒前Ｓ１抗原快速诊断试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种乙肝病毒前Ｓ１抗原快速诊断试剂盒及其制备方法，其主要包括乙型肝炎前Ｓ１抗原检测试纸条，试纸条由样品垫、金标垫、反应膜和吸水层依次粘贴在衬卡上，然后装入卡盒中。其金标垫的制备是将胶体金标记的抗－ＨＢｓ多克隆抗体载于玻璃纤维垫上；反应膜的制备是在玻璃纤维垫相连的检测载体硝酸纤维膜上包被抗－Ｓ１单克隆抗体制成检测线，同时包被重组乙肝表面抗原制成质控线。本发明专利技术当待检样本中含有前Ｓ１抗原，形成检测线和质控线两条紫红色线，判为阳性；反之则只有一条紫红色线，判为阴性。本发明专利技术用于检测人血清或血浆中的乙型肝炎病毒前Ｓ１抗原，具有操作简便、诊断快速、特异性强和灵敏度高的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种免疫诊断技术，具体地说是一种乙肝病毒前S1抗原快速诊断试剂盒及其制备方法。用于快速检测人血清或血浆中乙肝病毒前si抗原。
技术介绍
我们知道，乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一种世界性疾病，我国是乙 型肝炎的高发国。40-60X的人群感染过HBV，9-10X的人群为HBV表面抗原(HBsAg)携带 者，对这一亿多的HBsAg阳性者作为传染源的意义作出评估，才能比较公平地对待他们对 社会活动的参与。 通过对HBV病毒颗粒结构进行分析发现，其外膜蛋白包括S、前S2和前Sl三种成 分。前Sl蛋白主要存在于Dane颗粒和管型颗粒上，在病毒感染、装配、复制、侵入肝细胞过 程和剌激机体产生免疫反应中起重要作用；临床研究也发现，前S1蛋白在HBV感染的最早 期出现并与血清HBV-DNA、HBeAg及肝内HBcAg高度相关，其在病毒性乙型肝炎的临床诊断， 指导治疗等方面有重要价值。 首先，乙肝病毒前S1抗原的检测是早期诊断乙型肝炎病毒感染的指标。因为前S1 抗原出现在急性乙型肝炎感染的最早期，在转氨酶升高前即可查出，因而用于乙肝病毒感 染的早期诊断，尤其是在体检和献血员中加查前Sl抗原，在疾病的早期诊断和尽早切断传 染原方面有重要意义。 其次，乙肝病毒前S1抗原是反映HBV感染和复制状况的指标。前S1抗原与 HBV-DNA，HBeAg检测率高度符合，提示前Sl抗原可作为HbeAg和HBV-DNA检测的补充和对 照；HBeAb(+)慢性乙型肝炎(约占患者的30%左右)和HBV慢性无症状携带者中，前S1抗 原(+)可表示病毒的复制，提示临床上只检测"乙肝五项"是不够的，补充前S1抗原的测定 是十分重要的，可弥补因病毒变异和其它原因造成的HBeAg(-)的"误导";病毒附着于肝细 胞上，最重要的介导部位是前S1蛋白的氨基酸(AA) 21-47片段，变异的病毒只要这一区段 完好就有传染性。 再者，乙肝病毒前Sl抗原的检测可用于预后及药物疗效的判断。急性乙型肝炎患 者前Sl抗原阴转越早，预后越好，是病毒清除的最早迹象，反之，前Sl抗原持续阳性，将发 展至慢性肝炎；因病毒基因变异的HBeAb(+)慢性乙型肝炎病人，较易进展为肝硬化，甚至 肝癌，加强检测前Sl抗原，是一种检测疾病预后的良好手段；前Sl抗原可作为药物抗病毒 疗效的指标，是对HBV-DNA和HBeAg指标的补充和加强。 随着对乙肝病毒前Sl抗原蛋白特有性质的研究及其在乙肝发病机理、乙肝病毒 感染和复制等方面研究的深入，发现了越来越多前Sl抗原在HBV分子生物学上的重要意 义。在与肝细胞受体结合、调节HBVcccDNA(covalentlyclosed circular DNA)，合成、转化 病毒与细胞基因表达活性、调节机体免疫和对疫苗的免疫应答、导致肝炎以及在病毒装配 和传染性等方面的重要作用越来越受到人们重视。大量的临床与实验室研究表明应用前 Sl抗原检测试剂对乙肝病毒建立一种科学、灵敏、重复性好的血清学检测对临床诊断与指导治疗具有越来越重要的意义。 目前对乙肝病毒前S1抗原的检测方法主要为酶联免疫吸附法和化学发光法。二 者对于乙肝病毒前S1抗原的检测虽然是比较准确和敏感的，但是也存在如下的缺点(l) 检测需要专门的仪器设备辅助如酶标仪和化学发光检测仪，不利于实行现场直接检测；(2) 操作过程相对比较复杂，检测所需要的时间比较长，而且需要经过专业技术培训的技术人 员操作。(3) —般不能实现单人份的检测。 为满足临床快速检测的需要，近年来发展了多种简便、快速的免疫学检测方法，胶 体金法即为其中一种，胶体金技术是九十年代发展起来的快速诊断分析技术，近几年新发 展的胶体金快速测定试纸条主要适用于急诊检验、小型化验室或家中自测，已成为21世纪 检验医学一个重要的发展方向。胶体金免疫层析技术是应用胶体金标记技术，以胶体金作 为示踪物，应用于抗原抗体反应的一种新型的免疫标记技术。层析过程中，金标记物与事先 固相化于层析材料如硝酸纤维素膜上的抗原或抗体发生特异性的免疫反应而被截留，进一 步富集，形成肉眼可见的紫红色条带，从而得到直观的实验效果，达到快速检测的目的。 由于我国乙型肝炎患者较多，而且目前正处于经济发展阶段，为了对乙型肝炎患 者的病情作出正确而经济的分析，有必要加强对pre-Sl抗原的基础及临床应用研究。前Sl 蛋白检测是一种科学、灵敏、重复性好的血清学检测。传统的乙肝检测手段逐渐在病毒感染 的传染性、预后及疗效判断等方面的准确性与敏感性、可重复性表现出很多不足之处。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种操作简便、诊断快速、特异性强和灵敏度高的乙型肝炎病毒前si抗原快速诊断试剂盒及其制备方法。 本专利技术解决上述技术问题采用的技术方案是一种乙肝病毒前Sl抗原快速诊断 试剂盒，其特征是其卡盒中含有乙肝病毒前Sl抗原检测试纸条，所述试纸条是由样品垫、 金标垫、反应膜和吸水层依次粘贴在衬卡上，其中所述金标垫是由胶体金标记的抗-HBs多克隆抗体载于玻璃纤维垫上制成，所述反应膜是在硝酸纤维膜上包被抗-si单克隆抗体制成检测线，同时包被重组乙肝表面抗原制成质控线。 本专利技术上述乙肝病毒前Sl抗原快速诊断试剂盒的制备方法，其选择玻璃纤维做 样品垫、吸水纸做吸水层、有粘附作用的纸卡做衬卡，其特征在于还包括以下步骤 (a)金标垫的制备其是将胶体金标记的抗-HBs多克隆抗体载于载体玻璃纤维垫 上，在硅化处理后的玻璃容器中加入浓度为0. 01%的氯金酸，加热至沸腾，搅动下按照体积 比100 : 2加入浓度为1%的柠檬酸三钠，继续煮沸25分钟，冷去后用超纯水恢复到原体 积，制成直径为25nm左右的胶体金颗粒，用0. 1M K2C03溶液调节胶体金pH为7. 0，将胶体 金与抗-HBs多克隆抗体混合，调节比例使抗体的最终浓度为3-6 ii g/ml，室温震荡反应30 分钟，然后加入5% PEG20000至终浓度为0. 25%，混匀后室温静置5分钟，15000rpm离心 30分钟后，弃去上清，加入与胶体金等体积的洗脱液充分溶解沉淀物，同样转速离心，弃去上清后，将沉淀用1/10初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，4t:保存待用，用其包被玻璃纤维，每毫升胶体金标记抗体铺约10-15平方厘米的玻璃纤维垫，冷冻真空干燥后，分别 切成0. 4-0. 6cm2金标垫块； (b)反应膜的制备其是在硝酸纤维膜上包被抗-S1单克隆抗体制成检测线，同时4包被重组乙肝表面抗原制成质控线，选择0. 01M pH7. 5磷酸盐缓冲液作为包被液，检测线 包被的抗-SI单克隆抗体浓度为0. 8-1. 2mg/ml，质控线包被的重组乙肝表面抗原的浓度为 0. 5-1. Omg/ml，先用包被液冲洗划膜仪管道，设定划膜仪移动速度和包被浓度，然后加入检 测线抗体和对照线抗原，在硝酸纤维膜上划线，检测线位于膜中间位置，质控线在检测线上 方，二者的宽度为0. 7-lmm且质控线和检测线相距4-5mm，包被后膜置室温晾40分钟，封闭 液中浸泡5分钟，室温晾40分钟，保存待用； (c)试纸条的组装将所述样品垫切成长度30cm和宽度28mm，金标垫切成长度30cm 和宽度本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乙肝病毒前Ｓ１抗原快速诊断试剂盒，其特征是：其卡盒中含有乙肝病毒前Ｓ１抗原检测试纸条，所述试纸条是由样品垫、金标垫、反应膜和吸水层依次粘贴在衬卡上，其中所述金标垫是由胶体金标记的抗－ＨＢｓ多克隆抗体载于玻璃纤维垫上制成，所述反应膜是在硝酸纤维膜上包被抗－Ｓ１单克隆抗体制成检测线，同时包被重组乙肝表面抗原制成质控线。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：贾向阳，王晓伟，郭兰英，姚继承，丛日献，
申请(专利权)人：威海威高生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]