一种果糖胺测定试剂盒液体校准品的制备方法技术

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，尤其是一种果糖胺测定试剂盒液体校准品的制备方法。该方法包括如下步骤：(1)糖化：取动物血清白蛋白溶于0.05

【技术实现步骤摘要】
一种果糖胺测定试剂盒液体校准品的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，尤其是一种果糖胺测定试剂盒液体校准品的制备方法。

技术介绍

[0002]血清果糖胺是葡萄糖与血清蛋白进行非酶促糖化反应形成的高分子酮胺结构，又称糖化血清蛋白，它的浓度与血糖水平成正相关，并相对保持稳定。由于血清蛋白的半衰期为17
‑
20天，故果糖胺可以反映检测前2
‑
3周内的平均血糖水平，果糖胺的测定可以辅助糖尿病的诊断、病情监测、疗效观察。
[0003]果糖胺测定试剂盒(四氮唑蓝法)用于体外定量检测人血清样本中果糖胺(FMN)的含量。目前报导的作为测定果糖胺的校准物有：糖化人血清蛋白、1
‑
脱氧
‑1‑
吗啉
‑
D
‑
果糖(DMF)、五乙酸葡萄糖脂(GPA)和1
‑
脱氧
‑1‑
哌啶
‑
D
‑
果糖。上述测定果糖胺的校准物存在如下不足：(1)糖化人血清蛋白需要人血清蛋白作为反应底物，存在生物安全隐患；(2)1
‑
脱氧
‑1‑
吗啉
‑
D
‑
果糖和1
‑
脱氧
‑1‑
哌啶
‑
D
‑
果糖价格昂贵，增加了生产成本；(3)五乙酸葡萄糖脂不易溶于水，溶解时需要添加丙酮，但丙酮易挥发，影响浓度。
[0004]现有的果糖胺测定试剂盒的制备方法大多采用以下两种工艺路线：
[0005]方法一：生理盐水+40g/L人血清白蛋白
→
D
‑
葡萄糖1.5kg/L
→
50℃水浴搅拌8h
→
4℃过夜
→
冻干；
[0006]方法二：Dulbecco磷酸盐缓冲液
→
饱和葡萄糖
→
人血清白蛋白100g/L
→
37℃四天
→→
透析48h。
[0007]上述方法中，方法一的不足为：使用了人血清白蛋白，潜在生物安全风险；原料使用量高、产率低，过程消耗时长；需透析、大量原料被浪费；需冻干、冻干品使用时需复溶，增加使用不方便，且复溶后易不稳定，能量消耗大，成本高。方法二的不足为：原料使用量高、产率低，耗时长，使用了人血清白蛋白，潜在生物安全风险。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供一种果糖胺测定试剂盒液体校准品的制备方法，克服前述现有技术的不足，使用牛血清白蛋白，安全性高，原料用量少、产率高、耗时低，使用生物学方法去除剩余的葡萄糖，无需冻干、透析，2
‑
8℃保存长期稳定性良好。
[0009]本专利技术解决其技术问题所采取的技术方案是：
[0010]一种果糖胺测定试剂盒液体校准品的制备方法，包括如下步骤：
[0011](1)糖化：取动物血清白蛋白溶于0.05
‑
2mol/L的磷酸盐缓冲液中，至动物血清白蛋白的浓度达到10
‑
60g/L，加入葡萄糖至葡萄糖浓度达到1.25
‑
7.5g/L，40
‑
70℃水浴条件下800
‑
2000r/min搅拌6
‑
10h，置入冰箱，放置5
‑
24h，得试剂液A；
[0012](2)去除葡萄糖：从冰箱中取出试剂液A加入葡萄糖氧化酶，至葡萄糖氧化酶浓度达到0.1
‑
10KU/L，20
‑
60℃水浴，水浴过程中50
‑
2000r/min搅拌0.5
‑
6h，用0.05
‑
2mol/L的磷
酸盐缓冲液稀释至2.20
±
0.5mmol/L；
[0013](3)分装：步骤(2)反应结束后加入防腐剂至防腐剂的浓度达到0.5
‑
5g/L，分装，2
‑
8℃保存。
[0014]优选的，所述动物血清白蛋白选用牛血清白蛋白、羊血清白蛋白、兔血清白蛋白中的任一种。
[0015]优选的，所述磷酸盐缓冲液的pH为4
‑
9。
[0016]优选的，所述步骤(1)中冰箱的温度设置为2
‑
8℃。
[0017]优选的，所述步骤(3)中的防腐剂选用叠氮钠、Proclin系列防腐剂、甲基异噻唑啉酮、山梨酸钾、苯甲酸钠中的一种或多种。
[0018]优选的，所述步骤(3)的分装过程分装为0.5mL/支，或1mL/支，或2mL/支。
[0019]优选的，所述步骤(1)中，取牛血清白蛋白溶于0.2mol/L的磷酸盐缓冲液中，至动物血清白蛋白的浓度达到40g/L，磷酸盐缓冲液的pH为7.5，加入葡萄糖至葡萄糖浓度达到5g/L，60℃水浴条件下1000r/min搅拌8h，置入冰箱，放置12h，得试剂液A。
[0020]优选的，所述步骤(2)中，从冰箱中取出试剂液A加入葡萄糖氧化酶至葡萄糖氧化酶的浓度达1KU/L，25℃水浴，水浴过程中200r/min搅拌2h，用0.2mol/L的磷酸盐缓冲液稀释至2.2mmol/L。
[0021]优选的，所述步骤(3)中，加入叠氮钠至叠氮钠的浓度达1g/L。
[0022]本专利技术的有益效果是：与现有技术相比，本专利技术的一种果糖胺测定试剂盒液体校准品的制备方法具有以下优点：(1)使用动物血清白蛋白，例如牛血清白蛋白，相对来源广泛，价格低廉，并降低了生物安全风险；(2)无需冻干、透析，降低了生产时长，减少了能耗及成本；(3)大大减少了葡萄糖的使用量，降低成本；(4)长期稳定性良好；(5)能够直接使用，无需复溶。
具体实施方式
[0023]实施例1
[0024]一种果糖胺测定试剂盒液体校准品的制备方法，包括如下步骤：
[0025](1)糖化过程：取牛血清白蛋白40g溶于1L0.2mol/L的磷酸盐缓冲液中，磷酸盐缓冲液的pH为7.5，加入5g葡萄糖完全溶解后，60℃水浴条件下1000r/min搅拌8h，置入冰箱。2℃下放置12h；
[0026](2)去除葡萄糖过程：加入葡萄糖氧化酶1KU，25℃水浴200r/min搅拌2h，用0.2L0.2mol/L的磷酸盐缓冲液稀释。
[0027](3)分装：反应结束后加入1g叠氮钠，分装为1mL/支，2
‑
8℃保存。
[0028]实施例2
[0029]一种果糖胺测定试剂盒液体校准品的制备方法，包括如下步骤：
[0030](1)糖化：取羊血清白蛋白20g溶于1L0.2mol/L的磷酸盐缓冲液中，磷酸盐缓冲液的pH为7.5，加入2.5g葡萄糖完全溶解后，60℃水浴条件下1200r/min搅拌10h，置入冰箱，4℃下放置20h，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种果糖胺测定试剂盒液体校准品的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)糖化：取动物血清白蛋白溶于0.05
‑
2mol/L的磷酸盐缓冲液中，至动物血清白蛋白的浓度达到10
‑
60g/L，加入葡萄糖至葡萄糖浓度达到1.25
‑
7.5g/L，40
‑
70℃水浴条件下800
‑
2000r/min搅拌6
‑
10h，置入冰箱，放置5
‑
24h，得试剂液A；(2)去除葡萄糖：从冰箱中取出试剂液A加入葡萄糖氧化酶，至葡萄糖氧化酶浓度达到0.1
‑
10KU/L，20
‑
60℃水浴，水浴过程中50
‑
2000r/min搅拌0.5
‑
6h，用0.05
‑
2mol/L的磷酸盐缓冲液稀释至2.20
±
0.5mmol/L；(3)分装：步骤(2)反应结束后加入防腐剂至防腐剂的浓度达到0.5
‑
5g/L，分装，2
‑
8℃保存。2.根据权利要求1所述的一种果糖胺测定试剂盒液体校准品的制备方法，其特征在于：所述动物血清白蛋白选用牛血清白蛋白、羊血清白蛋白、兔血清白蛋白中的任一种。3.根据权利要求1或2所述的一种果糖胺测定试剂盒液体校准品的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄周亮，姚继承，饶志明，于士杰，张秋霞，
申请(专利权)人：威海威高生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：