抗癌抗体制造技术

本发明专利技术阐述了Ｃｒｉｐｔｏ－１蛋白、Ｐｉｍ－１蛋白或结肠癌细胞裂解物中存在的一种抗原的一种分离的结合配偶体。所述结合配偶体抑制一或多类癌细胞生长，可以用作抗癌剂治疗癌症。所述结合配偶体还可以用于诱导癌细胞凋亡的方法中，以及用于使癌细胞对细胞毒性化合物敏感的方法中。此外，本发明专利技术阐述了一种癌症疫苗，所述疫苗包含Ｃｒｉｐｔｏ－１蛋白（或其抗原性片段）、Ｐｉｍ－１蛋白（或其抗原性片段）或结肠癌细胞裂解物中存在的一种抗原，或者其包含编码Ｃｒｉｐｔｏ－１蛋白（或其抗原性片段）、Ｐｉｍ－１蛋白（或其抗原性片段）或结肠癌细胞裂解物中存在的一种抗原的一种可表达的ＤＮＡ分子。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗癌制剂，特别是抑制人结肠癌细胞、前列腺癌细胞和乳腺癌细胞在体外和体内生长的制剂。本专利技术还涉及癌症疫苗。
技术介绍
早在二十世纪八十年代，就特别感兴趣研制用作抗癌制剂的单克隆抗体(Mab)。在一些情况中，这些被设计为“魔弹”，通过缀合不同的细胞毒性化合物(例如毒素)或其它物质(例如同位素和药物)，输送至癌细胞。然而，由于许多原因包括特异性低、穿透性低(即针对实体瘤而言)及产生人抗小鼠抗体(即HAMA)应答，这些基于Mab的抗癌制剂未获成功并大多已被放弃。近年来，对基于Mab的抗癌制剂又重新注目，而且先前经历的许多问题已经通过遗传工程技术得以解决(Hudson PJ，“癌症治疗中的重组抗体构建体”，免疫学通用观点11，pp 548-557(1999)；在此将其揭示内容并入作为参考)。确实，目前有三种Mab正在使用或在临床试验阶段(即治疗HER2/neu阳性乳腺癌的人源化的HER2/neu Mab，商品名为Transtuzu Mab；治疗非霍奇金淋巴瘤的人源化的抗CD20Mab，商品名为Rituxan；及C225，其是一种抗EGFR Mab)。这些抗体不是作为细胞毒性抗体发挥作用，也不是通过Fc介导的炎症应答而发挥作用，而是结合抗原以干扰细胞信号化及引起细胞凋亡。例如，以HER2/neu Mab为例，所述抗体阻止或“阻断”生长因子的结合，导致HER2/neu阳性乳腺癌细胞死亡。显然需要更多抗癌制剂以补充现有的癌症治疗。通过用已知在某些癌细胞中表达的Cripto-1蛋白的抗原性部分(Montuori N等，“分离和定性CRIPTO常染色体基因及其X-连锁相关序列”，Am J HumGenet，49(3)，pp 555-565(1991))、或者Pim-1蛋白的一种融合蛋白(Friedmann M等，“定性原癌基因pim-1激酶活性和底物识别序列”，Arch Biochem Biophys，298(2)，pp 594-601(1992))、或者结肠癌细胞裂解物对大鼠进行免疫，结果令人惊奇地发现，本专利技术人生产的Mab可抑制不同癌细胞系生长。
技术实现思路
第一方面，本专利技术提供了Cripto-1蛋白、Pim-1蛋白或结肠癌细胞裂解物中存在的一种抗原的一种分离的结合配偶体(bindingpartner)，其中所述结合配偶体抑制一或多类癌细胞生长。第二方面，本专利技术提供了一种抗癌制剂，其包含Cripto-1蛋白、Pim-1蛋白或结肠癌细胞裂解物中存在的一种抗原的一种结合配偶体，其中所述结合配偶体抑制一或多类癌细胞生长。第三方面，本专利技术提供了一种治疗癌症患者的方法，所述方法包括为所述患者施用有效量的第二方面所述的抗癌制剂。第四方面，本专利技术提供了一种癌症疫苗，其包含Cripto-1蛋白、Pim-1蛋白或结肠癌细胞裂解物中存在的一种抗原，或者其包含编码Cripto-1蛋白、Pim-1蛋白或结肠癌细胞裂解物中存在的一种抗原的一种可表达的DNA分子。第五方面，本专利技术提供了一种治疗癌症患者的方法，所述方法包括为所述患者施用有效量的第四方面所述的癌症疫苗。第六方面，本专利技术提供了一种诱导癌细胞凋亡的方法，所述方法包括用Cripto-1蛋白、Pim-1蛋白或结肠癌细胞裂解物中存在的一种抗原的结合配偶体处理所述细胞。第七方面，本专利技术提供了一种使癌细胞对细胞毒性化合物敏感的方法，所述方法包括用Cripto-1蛋白、Pim-1蛋白或结肠癌细胞裂解物中存在的一种抗原的结合配偶体处理所述细胞。I具体实施方式本专利技术的结合配偶体优选抑制以下一或多种癌细胞生长结肠癌细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、白血病细胞和肺癌细胞，所述结合配偶体特征在于其结合Cripto-1蛋白、Pim-1蛋白或结肠癌细胞裂解物中存在的抗原。优选地，所述结合配偶体是一种抗体或其片段，但也可以是Cripto-1蛋白(Bianco C.等，“Cripto-1通过一种新受体间接刺激erb B-4的酪氨酸磷酸化”，生物化学杂志274(13)，pp 8624-8629(1999))、Pim-1蛋白或结肠细胞裂解物抗原的受体蛋白，或者另外是特异性结合Cripto-1蛋白、Pim-1蛋白或结肠细胞裂解物抗原的任何其它肽、多肽或蛋白质。文中所用术语“特异性结合”是指肽、多肽或蛋白质的结合特性，其只结合Cripto-1蛋白、Pim-1蛋白或结肠细胞裂解物抗原，或者与其它哺乳动物蛋白的交叉反应可以忽略不计。更优选地，所述结合配偶体是一种Mab或其片段，而且特别选自结合Cripto-1蛋白抗原性决定簇的Mab或其片段，所述抗原性决定簇包含基本上相应于下面的氨基酸序列CPPSFYGRNCEHDVRKE(SEQ ID NO1)，和/或结合结肠癌细胞裂解物中存在的抗原的Mab或其片段，其中所述抗原的分子量通过SDS-PAGE估计为16Kd或30Kd。所述16Kd和/或30Kd的抗原可以是结肠癌细胞和/或乳腺癌细胞生长所需的生长因子。本专利技术的Mab可以通过本领域的任何标准技术生产。Mab的片段如F(ab′)2、Fab和Fc可以通过例如本领域标准的胃蛋白酶和木瓜蛋白酶裂解方法生产，或者通过重组DNA技术生产，所述重组DNA技术包括表达分离自杂交瘤细胞系或产生抗体的动物细胞的抗体基因。特别优选的抗体片段是单链Fv(scFv)抗体片段。生产scFv的方法见于Pluckthun A，生物/技术9，pp 545-551(1991)和美国专利No.4,946,778所述。这两个文献所揭示的内容在此并入作为参考。确信本专利技术的抗体片段可以提供比Mab及其它“大型”结合配偶体更多的优势，因为它们对实体瘤特别是大肿瘤具有更佳的穿透性。本专利技术的Mab及抗体片段可以根据美国专利No.5,225,539所述技术进行人源化(在此并入作为参考)。Mab及抗体片段还可以通过使用取自免疫动物(例如小鼠或大鼠)的脾细胞生产，所述脾细胞融合于人骨髓瘤细胞系(例如Karpas707H人骨髓瘤细胞系；Karpas A等，“适于产生人Mab的人骨髓瘤细胞系”，美国科学院院报98，pp 1799-1804(2001))，以生产人抗体或抗体片段。嵌合的小鼠/人Mab可以根据Mount PF等所述方法生产(Mount PF等，“嵌合的(小鼠/人)抗结肠癌抗体c30.6抑制scid/SCID小鼠中人结肠直肠癌异种移植体生长”，癌症研究54，pp 6160-6166(1994)，在此并入作为参考)。Mab及抗体片段可以通过标准技术大量生产(例如通过组织培养或无血清发酵)，及使用亲和层析柱纯化如A蛋白(例如针对小鼠Mab)、G蛋白(例如针对大鼠Mab)或MEP HYPERCEL(例如针对IgM和IgG Mab)。本专利技术的结合配偶体可以与细胞毒性化合物或上述其它物质缀合。优选的细胞毒性化合物包括一线化疗药物如蒽环类抗生素(如依达比星、多柔比星、道诺霉素、表阿霉素)、5-氟尿嘧啶(5FU)、拓扑异构酶抑制剂(如伊立替康)、顺铂、卡铂和紫杉醇。本专利技术的结合配偶体也可以与第一种结合蛋白(例如生物素)缀合以通过施用第二种结合蛋白(例如抗生物素蛋白)使结合配偶体之间交联，所述第二种结合蛋白结合第一种蛋白。在后文实施例11所述的体外试验中，与二级抗体的交联本文档来自技高网...

【技术保护点】
Ｃｒｉｐｔｏ－１蛋白、Ｐｉｍ－１蛋白或结肠癌细胞裂解物中存在的一种抗原的一种分离的结合配偶体，其中所述结合配偶体抑制一或多类癌细胞生长。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：伊恩法奎尔坎贝尔麦肯奇，邢培祥，胡秀凤，
申请(专利权)人：奥斯汀研究院，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]