一种新型免疫层析检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种新型免疫层析检测试剂盒，包括：采样装置和试纸条，其中所述采样装置由移液管和标记物‑抗体偶联物组成；所述试纸条由样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和底板组成。本实用新型专利技术的试剂盒能使待测物与标记物‑抗体偶联物反应更充分，在硝酸纤维素膜上层析更均一，灵敏度更高，操作更加简便。

Novel immune chromatography detection reagent kit

The utility model relates to a novel immunochromatographic test kit, including sampling device and strip, wherein the sampling device is composed of a pipette and marker antibody conjugates; the test strip consists of a sample pad, nitrocellulose membrane and absorbent pad and a bottom plate. Reagent box of the utility model can make the object to be measured and the marker antibody conjugate reaction more fully, the nitrocellulose membrane chromatography is more uniform, higher sensitivity, easy to operate.

【技术实现步骤摘要】

本技术属于食品安全与临床医学检验领域，具体而言，本技术涉及一种新型免疫层析检测试剂盒。
技术介绍
免疫层析技术，或称侧向流层析技术，因其检测快速、操作简便、成本低廉的优点而广泛应用于食品安全、临床医学检验领域。现有基于免疫层析原理开发的试纸条构造包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，依次相互交叠贴在底板上。标记物抗体偶联物一般固定在结合垫上，在滴加样品液后，大概一半左右的液体即可推动标记物抗体偶联物的层析过硝酸纤维素膜上的检测线位置，会造成待测物与标记物抗体偶联物反应不充分，在硝酸纤维素膜上层析不均匀，最终导致反应灵敏度不高。有的研究采取在微孔中预先真空冷冻干燥好标记物抗体偶联物，在检测时将样品液滴入微孔中，并反复吹打混匀，再将试纸条插入微孔中进行层析。如果需要仪器定量检测，还需将试纸条从微孔中拿出，再放入仪器测定，步骤相对繁琐。为了解决上述问题，本技术提供了一种改变标记物-抗体偶联物固定位置及改变试纸条构造的新型免疫层析试纸条，其改良了免疫层析标记物的固定位置以及试纸条的构造，该试纸条能使待测物与标记物-抗体偶联物反应更充分，在硝酸纤维素膜上层析更均一，灵敏度更高，操作更加简便。
技术实现思路
本技术通过如下技术方案实施：一种新型免疫层析检测试剂盒，包括：采样装置和试纸条，其中所述采样装置由移液管和标记物-抗体偶联物组成；所述试纸条由样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和底板组成。其中所述硝酸纤维素膜位于底板上中间位置，样品垫与吸水垫分别位于所述硝酸纤维素膜的两端，所述样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次相互交叠贴在底板上。所述标记物-抗体偶联物中的标记物可以是胶体金、胶体碳、磁性颗粒、彩色乳胶颗粒、荧光颗粒、量子点和时间分辨荧光颗粒。所述标记物-抗体偶联物中的抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。所述标记物-抗体偶联物固定于移液管内部，例如可以通过烘干或真空冷冻干燥的方式进行。固定位置要保证在吸液后，液体在移液管中要没过所有固定的标记物-抗体偶联物。所述标记物-抗体偶联物例如可以为海绵体状。所述样品垫为玻璃纤维膜或纤维素膜或玻璃纤维与纤维素的混合膜。所述吸水垫为纤维素膜。所述移液管上端可连接用于吸液与排液的气囊或移液器。在检测样品时，利用采样装置吸取样品液，将标记物-抗体偶联物溶解在吸取的样品液中形成混合物，使得标记物-抗体偶联物与所吸样品液中全部待测物接触，充分反应。再利用采样装置将上述混合物滴到试纸条样品垫上，进行层析。本技术的试剂盒可用于食品安全和临床医学检验领域的检测。本技术的有益效果是：改良了免疫层析标记物的固定位置以及试纸条的构造，标记物-抗体偶联物固定于移液管中，吸液后，样品液中待测物可以与标记物-抗体偶联物充分接触，促进免疫反应的进行，提高检测灵敏度；标记物-抗体偶联物在样品液中分布更均匀，使层析过程更均一。由于在吸取样品液时即完成了标记物-抗体偶联物与样品液的混合，所以将混合液直接滴到试纸条上即可进行层析，仅需吸液、加液步骤即可完成检测，省去了向微孔中插入、取出试纸条的步骤，操作更加简便。附图说明图1是本技术的试剂盒结构示意图。附图标记说明：1、移液管；2、标记物-抗体偶联物；3、样品垫；4、硝酸纤维素膜；5、吸水垫；6、底板；I-采样装置；II-试纸条。具体实施方式为了更好的理解本技术，下面通过具体的实施例对本技术做进一步详细的非限制性说明。实施例1：本技术试剂盒的制备1、制备采样装置：将50μL磁颗粒-盐酸克伦特罗(CLB)抗体偶联物溶液(1μL磁颗粒-CLB抗体偶联物溶于含1％BSA，1％蔗糖的0.01MPBS溶液，pH为7.2)加到移液管中，真空冷冻干燥4h后，加入干燥剂封存备用。由此，标记物-抗体偶联物固定在移液管中，得到本技术的采样装置。2、本技术的免疫层析试纸条的制备：(a)、硝酸纤维素膜的处理：用包被缓冲液(含2％BSA的0.01MPBS溶液，pH为7.2，过0.22μm滤膜)将CLB-BSA(上海杰一公司生物技术有限公司，产品号JY-QT02，作检测线)稀释为1mg/mL，羊抗鼠IgG抗体(上海杰一生物技术有限公司，产品号JY-QT03，作质控线)稀释为1.5mg/mL，使用Biodot公司XYZ3060喷膜机的Biojet喷头以1μL/cm的量将二者以0.8cm的间隔喷涂于硝酸纤维素膜上，37℃晾干后，加入干燥剂封存备用。(b)、试纸条的组装与切割试纸板的组装：将35mm宽的来自(a)的经处理的硝酸纤维素膜，25mm宽的吸水垫，10mm宽的样品垫，依次相互交错2mm粘贴在底板上，上层盖上透明塑料膜，组成试纸板。试纸条的裁切：使用上海金标生物科技有限公司ZQ2000切条机将上述试纸板切成5mm宽的试纸条。将切割好的5mm宽的试纸条放入塑料底卡的卡槽内，盖上上盖，利用压卡机(美国QuantumDesign公司，产品号4094-497-01)将上下两片塑料卡压紧，确保整个试纸条处于绷紧状态。加入干燥剂室温下封存备用。得到本技术的免疫层析试纸条1。3、样品的测试与结果判读将固定了磁颗粒偶联CLB抗体的移液管连上微量移液器，吸取100μL样品液后，全部加到上述免疫层析试纸条1的样品垫上。3min后对结果进行判读。检测线与质控线同时出现可见褐色或浅褐色的线，表示样品液中CLB浓度小于0.5ppb，为阴性；检测线没有颜色，而质控线可见褐色或浅褐色的线，表示样品液中CLB浓度大于等于0.5ppb，为阳性；如果检测线与质控线同时没有颜色，表示检测结果无效。对比实施例1：对比试剂盒的制备1、标记物-抗体偶联物在结合垫上的固定：将5μL磁颗粒-CLB抗体偶联物溶液(含1μL磁颗粒-CLB抗体偶联物，溶于1％BSA，1％蔗糖的0.01MPBS溶液，pH为7.2)加到5mm宽的结合垫上(上海杰一公司生物技术有限公司，产品号JY-BX113)，真空冷冻干燥4h后，加入干燥剂封存备用。2、硝酸纤维素膜的处理：同实施例1。3、对比免疫层析试纸条的组装与切割试纸板的组装：将10mm宽的样品垫，5mm宽的结合垫，35mm宽的步骤2的经处理的硝酸纤维素膜，25mm宽的吸水垫，依次从左至右相互交错2mm粘贴在底板上，上层盖上透明塑料膜，组成试纸板。试纸条的裁切：使用上海金标生物科技有限公司ZQ2000切条机将上述试纸板切成5mm宽的试纸条。将切割好的5mm宽的试纸条放入塑料底卡的卡槽内，盖上上盖，利用压卡机(美国QuantumDesign公司，产品号4094-497-01)将上下两片塑料卡压紧，确保整个试纸条处于绷紧状态。加入干燥剂室温下封存备用。得到对比的免疫层析试纸条2。4、样品的测试与结果判读吸取100μL样品液后，全部加到上述免疫层析试纸条2的样品垫上。3min后对结果进行判读。检测线与质控线同时出现可见褐色或浅褐色的线，表示样品液中CLB浓度小于3ppb，为阴性；检测线没有颜色，而质控线可见褐色或浅褐色的线，表示样品液中CLB浓度大于等于3ppb，为阳性；如果检测线与质控线同时没有颜色，表示检测结果无效。由实施例1和对比实施例1的检测结果可以看出，使用本技术的试剂盒可以判定的CLB浓度为0.5ppb，对比实施例中的试纸条可以判定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新型免疫层析检测试剂盒，包括：采样装置(I)和试纸条(II)，其中所述采样装置(I)由移液管(1)和标记物‑抗体偶联物(2)组成；所述试纸条由样品垫(3)、硝酸纤维素膜(4)、吸水垫(5)和底板(6)组成；其中所述标记物‑抗体偶联物(2)固定在移液管中；所述标记物‑抗体偶联物(2)在移液管(1)中的固定位置的选择是使得在吸液后液体在移液管(1)中没过所有固定的标记物‑抗体偶联物(2)；所述样品垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水垫(5)依次相互交叠贴在底板(6)上，其中所述硝酸纤维素膜(4)位于底板(6)上中间位置，样品垫(3)与吸水垫(5)分别位于所述硝酸纤维素膜(4)的两侧；所述移液管(1)上端连接气囊或移液器。

【技术特征摘要】
1.一种新型免疫层析检测试剂盒，包括：采样装置(I)和试纸条(II)，其中所述采样装置(I)由移液管(1)和标记物-抗体偶联物(2)组成；所述试纸条由样品垫(3)、硝酸纤维素膜(4)、吸水垫(5)和底板(6)组成；其中所述标记物-抗体偶联物(2)固定在移液管中；所述标记物-抗体偶联物(2)在移液管(1)中的固定位...

【专利技术属性】
技术研发人员：管笛，武会娟，魏颖，李俊博，
申请(专利权)人：北京市理化分析测试中心，
类型：新型
国别省市：北京;11