一种定量检测sST2的时间分辨荧光免疫试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种定量检测sST2的时间分辨荧光免疫试纸条及其制备方法，定量检测sST2的时间分辨荧光免疫试纸条包括底板，底板上依次相互交错排列样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，包被膜贴合在底板中部，包被膜一侧边缘上端贴覆结合垫，另一侧边缘上端贴合吸水纸，结合垫远离包被膜的一侧边缘上方贴覆样品垫。与现有技术相比，本发明专利技术具有以下优点：将时间分辨免疫层析技术引入可溶性生长刺激基因2蛋白的检测中，结合时间分辨荧光检测仪，实现了可溶性生长刺激基因2蛋白的单人份定量检测，且灵敏度高，批内、批间差小，为临床使用提供了极大便利；本发明专利技术操作简便，适合大规模生产，对于可溶性生长刺激基因2蛋白的定量检测有着积极的意义。

Time resolved fluorescent immunity test strip for quantitative detection of sST2 and preparation method thereof

The invention discloses a preparation method for quantitative detection of sST2 time resolved fluorescence immunoassay test strip and method for quantitative detection of sST2, time-resolved fluorescence immunoassay test strip comprises a bottom plate, bottom plate are mutually staggered with the sample pad, pad, coating film and absorbent paper, coated film in the middle of the bottom plate, the upper envelope on one side of the membrane covered with pad edge, the edge of the other side is attached to the absorbent paper, combining pad away from the package side edge above the membrane covering the sample pad. Compared with the prior art, the invention has the following advantages: the time-resolved immunochromatographic technology into soluble growth stimulating protein 2 gene detection, combined with time-resolved fluorescence detector, the soluble growth stimulating gene single quantitative detection of 2 protein, and high sensitivity, the intra - and inter difference, provide a great convenience for clinical use; the present invention has simple operation, suitable for mass production and has a positive significance for quantitative soluble growth stimulated gene 2 protein detection.

【技术实现步骤摘要】
一种定量检测sST2的时间分辨荧光免疫试纸条及其制备方法
本专利技术属于医学检验领域，具体涉及一种定量检测sST2的时间分辨荧光免疫试纸条及其制备方法。
技术介绍
生长刺激表达基因2蛋白(ST2)是心肌细胞受到生物机械应力后产生的一种心肌蛋白，1989年Tominaga等首先发现了ST2基因，但因未发现其功能性配体，一直被误认为是孤儿受体。2005年Schmitz等发现其特异性功能配体白细胞介素IL-33。ST2基因表达于肥大细胞、激活的辅助性T细胞(Th2)、巨噬细胞和心肌细胞。人的ST2基因可编码一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)和一种跨膜形式生长刺激表达基因2蛋白(ST2L)，两者的转录分别受到不同的启动子调控。IL-33属于IL-1家族，广泛存在于多种组织细胞中，是炎症反应的重要调节因子之一。正常情况下，IL-33存在于细胞核中，作为转录抑制因子发挥作用。当细胞受到损伤时，IL-33可分泌到胞外，主要通过结合受体ST2传递信号，作为细胞因子发挥免疫调节等作用。ST2L/IL-33信号通路在抗动脉粥样硬化、抗心肌纤维化和心肌细胞肥大等的过程中发挥重要作用。心脏成纤维细胞受到机械应力刺激后可产生IL-33，而IL-33与其受体ST2L结合后，将活化信号传递至细胞内，经过下游的IL-1相关蛋白激酶、髓样分化因子88和肿瘤坏死因子受体相关因子6等一系列信号分子，激活核转录核因子(NF)-κB和Map激酶，从而影响基因的转录，诱发Th2细胞效应分子IL-4和IL-5等的释放。当心脏成纤维细胞和心肌细胞受到强压力负荷时，这些效应分子可使心脏做出保护性变化，拮抗牵拉过度导致的心肌肥大并心肌纤维化发生。而sST2是IL-3的诱骗受体，能够结合并中和IL-33，表现为对ST2L/IL-33信号通路的负性调节。血清中过多的sST2可以使心肌在受到机械应力损伤时缺乏足够的IL-33保护作用，进而发生心肌重塑和心功能障碍。与冠脉造影和左心室功能正常人群相比，主动脉狭窄患者和充血性心肌病患者的sST2水平显著增高。急性心衰患者的sST2水平越高，心衰的严重程度越高，sST2与NYHA心功能分级正相关。因此，通过检测sST2水平，可鉴别不同风险水平的患者，从而针对不同风险的患者给予适当的治疗方案，进而有效降低心衰的发病率和死亡率。临床上，sST2的浓度可用于估计心脏代谢失调，心室重构等。sST2可作为心衰的标志物，不仅可用于筛查心衰患者，独立的对心力衰竭进行诊断，对心衰患者进行风险分层；作为急性心力衰竭患者结构和功能恶化的预测性指标，是急性心力衰竭预后的强有力的预测因子；sST2能够很好的预测患者在短期、中长期(三个月、一年、三至五年)内的死亡率，为患者是否进行心脏移植提供数据支持，有利于提前干预提供患者的治愈率和成活率。标记免疫分析法是将具有高度敏感性的标记示踪技术和免疫学中抗原抗体的高度特异性反应相结合的产物，包括放射免疫(RIA)、酶联免疫分析(EIA)、化学发光免疫分析(CLIA)、电化学发光免疫分析(ECLIA)和时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)。TRFIA技术是20世纪70年代末Wallac公司创立的一种非放射性标记免疫分析技术。示踪物选用的是镧系元素如铕、铋、钐和镝的三价稀土离子及其螯合物，用以代替荧光物质、酶、同位素、化学发光物质来标记抗体、抗原、激素、多肽、蛋白质、核酸探针及生物细胞等，在一定的反应体系(例如常用的抗原抗体反应、生物素亲和素反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等)内发生反应后，用时间分辨荧光免疫分析检测仪测定反应产物中的特异荧光强度，并与相对应的标准荧光曲线比对，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分析待测物的目的。TRFIA的反应原理和其他标记免疫分析相似。常用的有双位点夹心法和固相抗体竞争法。双位点夹心分析法多用来测定蛋白质类大分子化合物。使用针对被测物上不同抗原决定簇的两个单克隆抗体，一个用Eu3+标记，另一个包被固相载体，经过免疫反应形成免疫复合物后，再将Eu3+从复合物上完全解离下来，在Eu3+的增强液中与另一种螯合剂结合，在协同剂的作用下，形成一个Eu3+包裹于其内部的微胶囊(胶态分子团)。它在激发光作用下能发射出很强的荧光信号,其强弱与待测抗原(或抗体)含量相关。该法用于测定蛋白质类大分子化合物。固相抗体竞争法多用于一些小分子半抗原化合物的测定，因分子质量小，不能直接进行固相包被，如多肽、甲状腺激素类和一些药物等，都必须经过化学耦联剂与载体蛋白质进行共价键结合,然后可包被聚苯乙烯微量滴定条孔壁，制成固相抗原。其原理是：限量固相抗体与Eu3+标记抗原和样品中的待测抗原竞争性结合，样品中的抗原浓度越高，固相抗体结合的Eu3+标记抗原量就越少，反之亦然，即固相抗体上的荧光信号强度与样品中的抗原浓度成反比。TRFIA技术是近年来新兴起来的一种超微量快速免疫检测技术，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好，而且测定范围更宽，实际寿命长，操作简便和非放射性等特点，非常适用于生物学、医学上的分析检测。该技术越来越受到各领域科研工作者的关注，应用范围也不断发展，是继放射免疫分析、酶标、化学发光、电化学发光之后的一种更新、更灵敏的检测方法。目前，检测sST2的方法主要是采用的是酶联免疫法(ELISA)。ELISA技术存在以下缺点：检测设备要求高，成本高；干扰因素较多，重复性不好；检测时间长。因此酶联免疫技术检测可溶性生长刺激基因2蛋白不适合临床快速诊断。
技术实现思路
为了解决现有技术存在的缺陷，本专利技术提供一种可用于定量检测sST2的时间分辨荧光免疫分析试纸条及其制备方法，采用该免疫分析试纸条，不仅能够提供较高的灵敏度和特异性，操作简单，可实现快速检测，满足了临床检验的需要，而且降低了成本，满足国内市场的需求。为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术一种定量检测sST2的时间分辨荧光免疫分析试纸条，包括：包括底板，底板上依次相互交错排列样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，包被膜贴合在底板中部，包被膜一侧边缘上端贴覆结合垫，另一侧边缘上端贴合吸水纸，结合垫远离包被膜的一侧边缘上方贴覆样品垫；底板以及底板上依次相互交错排列的样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述包被膜贴合在底板中部上，所述结合垫贴合在底板上，一侧压覆在包被膜一侧边缘上，所述样品垫贴合在底板上，一侧压覆在结合垫边缘上，所述吸水纸一侧压覆在包被膜另一侧边缘上；所述结合垫上包被有稀土离子微球标记的sST2单克隆抗体I，所述稀土离子微球标记的sST2单克隆抗体I为鼠源性sST2单克隆抗体，所述包被膜上包被有检测线和质控线，所述检测线固定有识别不同抗原表位的sST2单克隆抗体II，所述质控线固定有兔抗鼠IgG抗体；所述包被膜上检测线和质控线相互平行，所述检测线靠近所述结合垫，所述质控线靠近所述吸水纸。优选的，所述结合垫为聚酯膜。优选的，所包被膜为硝酸纤维素膜。优选的，所述稀土离子微球为用于标记的任何镧系金属元素微球。优选的，所述稀土离子微球表面带有活性基团，可以连接蛋白、糖类等生物物质。优选的，所述稀土离子微球的直径为100nm-300nm。优选的，本专利技术提供定量检测sST2的时间分辨荧光免疫分析试纸条本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)的时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，包括：底板以及底板上依次相互交错排列的样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述包被膜贴合在底板中部上，所述结合垫贴合在底板上，一侧压覆在包被膜一侧边缘上，所述样品垫贴合在底板上，一侧压覆在结合垫边缘上，所述吸水纸一侧压覆在包被膜另一侧边缘上；所述结合垫上包被有稀土粒子微球标记的sST2单克隆抗体I，所述包被膜上包被有检测线和质控线，所述检测线固定有识别不同抗原表位的sST2单克隆抗体II，所述质控线固定有兔抗鼠IgG抗体；所述包被膜上检测线和质控线相互平行，所述检测线靠近所述结合垫，所述质控线靠近所述吸水纸。

【技术特征摘要】
1.一种定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)的时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，包括：底板以及底板上依次相互交错排列的样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述包被膜贴合在底板中部上，所述结合垫贴合在底板上，一侧压覆在包被膜一侧边缘上，所述样品垫贴合在底板上，一侧压覆在结合垫边缘上，所述吸水纸一侧压覆在包被膜另一侧边缘上；所述结合垫上包被有稀土粒子微球标记的sST2单克隆抗体I，所述包被膜上包被有检测线和质控线，所述检测线固定有识别不同抗原表位的sST2单克隆抗体II，所述质控线固定有兔抗鼠IgG抗体；所述包被膜上检测线和质控线相互平行，所述检测线靠近所述结合垫，所述质控线靠近所述吸水纸。2.根据权利要求1所述定量检测sST2的时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述结合垫为聚酯膜；所包被膜为硝酸纤维素膜。3.根据权利要求1所述定量检测sST2的时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述稀土离子微球为用于标记的任何镧系金属元素微球。4.根据权利要求3所述定量检测sST2的时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述稀土离子微球表面带有活性基团。5.根据权利要求3所述定量检测sST2的时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，稀土离子微球的直径为100nm-300nm。6.根据权利要求1-5中任一项所述定量检测sST2的时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述试纸条还包括一卡壳，所述试纸条装入在卡壳内，露出样品垫、结合垫、包被膜上的检测线和质控线、以及吸水垫。7.根据权利要求6所述定量检测sST2的时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述卡壳为塑料卡壳。8.一种根据权利要求6或7所述定量检测sST2的时间分辨荧光免疫分析试纸条的制备方法，包括如下步骤：(1)在包被膜的不同位置分别固定识别不同抗原表位的sST2单克隆抗体II和兔抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线；(2)制备稀土离子微球标记的sST2单克隆抗体I，并喷涂在结合...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶剑，周颖，兰成杰，
申请(专利权)人：天津欧尔克医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12