定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条、制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条、制备方法及其应用。它包括荧光试纸条、铕标记的抗辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用单克隆抗体试剂和反应瓶，其中：所述荧光试纸条包括纸板，纸板的粘性面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述的检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述的质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述的检测线上包被辣椒素类物质包被抗原；所述抗辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201534的杂交瘤细胞株分泌产生。其可用于定量检测辣椒素类物质的含量，且操作简单、快速、准确度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条、制备方法及其应用。
技术介绍
辣椒素类化合物是使辣椒具有辛辣刺激的主要化学物质，其成分主要包括辣椒素、二氢辣椒素、高二氢辣椒素、降二氢辣椒素、高辣椒素等化合物。其中辣椒素和二氢辣椒素约占辣椒素类物质总量的90％，并提供了约90％的辣热感刺激。合成辣椒素具有与天然辣椒素类似的结构部和功能，且在价格和辣度上比天然辣椒素更占优势，也被广泛应用于医药、杀虫剂、防污涂料、军事武器等领域。除了赋予食品辛辣味被用作调味品以外，辣椒素类物质还具有消炎镇痛、抗病菌、抗肿瘤作用，能促进脂肪燃烧、降低血脂，抑制胃酸分泌、对胃黏膜损伤有保护作用等药用价值。农药领域，辣椒素类物质被认为是一种理想的无公害农药，已有报道被应用于水果、蔬菜、谷物等作物上，免除了耐药性及残留检验。在轻工业领域可被用于高档特种防污涂料，防止海洋水生物对船体的附着；用于电缆材料中以驱赶老鼠啃咬等。在医药领域，辣椒素类物质的药物动力学研究离不开对动物组织及血清样品中辣椒素类物质的检测。此外还有报道指出，辣椒素类物质被可作为兴奋剂的主要成分，被非法应用于各种竞技赛事中，特别是赛马活动中。因此，样品中辣椒素类物质分析测定方法的研究对辣椒素类物质的规范使用及其安全评价意义重大。现有的辣椒素类物质分析检测方法主要是精密仪器分析法，主要包括高效液相色谱法、色谱-质谱联用，这些方法灵敏度高，准确性好，但存在仪器昂贵，要求辣椒素类物质样品纯化程度高，样品前处理过程繁琐，耗时长，对实验环境要求高等不足，难以实现快速检测，并且，要测得辣椒素类物质总量，需要计算各种辣椒素类物质的含量之和。近年来迅速发展起来的免疫分析方法由于克服了上述方法的缺点，并具有特异性强、灵敏度高、分析容量大、方便快捷、成本低廉、适于现场批量检测等优点，被广泛应用于医学、农学等各个领域。
技术实现思路
本专利技术所要解决的问题是提供一种定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条、制备方法及其应用。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于：它包括荧光试纸条、铕标记的抗辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用单克隆抗体试剂和反应瓶，其中：所述荧光试纸条包括纸板，纸板的粘性面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述的检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述的质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述的检测线上包被辣椒素类物质包被抗原；所述抗辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用单克隆抗体由保藏编号为CCTCCNO.C201534的杂交瘤细胞株分泌产生。所述的杂交瘤细胞株YQQD8已于2015年4月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCNO.C201534。按上述方案，所述铕标记的抗辣椒素类物质单克隆抗体是按照以下方法制备得到的：将铕标记试剂活化后与抗辣椒素类物质单克隆抗体震荡过夜，即得目标产物铕标记的抗辣椒素类物质单克隆抗体。按上述方案，所述铕标记的抗辣椒素类物质单克隆抗体的制备方法：将铕标记试剂超声分散在硼酸缓冲液中，加入EDC振荡活化，离心，去除上清液，加入硼酸缓冲液振荡混匀，超声分散，然后加入抗辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用单克隆抗体，其中铕标记试剂与抗辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用单克隆抗体的质量比为1:(0.04-0.3)，混匀后，摇床震荡过夜，离心去除未结合部分，然后加入OVA封闭铕标记试剂表面多余的结合位点，得目标产物铕标记的抗辣椒素类物质单克隆抗体。按上述方案，所述的辣椒素类物质包被抗原的分子结构式如式Ⅱ所示：Pr载体蛋白。按上述方案，所述载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、卵清白蛋白OVA或钥孔血蓝蛋白KLH，优选为卵清白蛋白OVA。按上述方案，所述荧光试纸条中的吸水垫长35～45mm，宽3～5mm；检测垫长23～28mm，宽3～5mm；样品垫长10～15mm，宽3～5mm，相邻各垫的交叠长度为1～3mm；所述荧光试纸条中检测垫上的检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为5～10mm，质控线和检测线的间距为5～10mm。按上述方案，所述荧光试纸条中检测垫上每厘米检测线所需的辣椒素类物质包被抗原包被量为0.125～0.6μg；每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为0.1～0.6μg；所述反应瓶中铕标记的抗辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用单克隆抗体的含量为0.31～0.53μg。按上述方案，所述的定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条还包括样品稀释液和样品稀释液吸管，所述的样品稀释液为质量体积分数为0.01～0.30％的吐温-20，0.5～1.5％蔗糖和0.1～1％卵清蛋白(OVA)水溶液。按上述方案，所述的荧光试纸条的制备步骤如下：(1)将吸水纸剪裁得吸水垫；(2)检测垫的制备：将辣椒素类物质包被抗原配制成浓度为0.2～1.0mg/mL的包被液，于距硝酸纤维素膜上沿5～10mm的位置，用线喷方式将其横向包被于硝酸纤维素膜上，得到检测线，每厘米检测线所需辣椒素类物质包被抗原的包被量为0.125～0.6μg，然后于37℃条件下干燥30～60分钟；将兔抗鼠多克隆抗体配成浓度为0.15～1.0mg/mL的包被液，于距检测线5～10mm的位置，用线喷方式将其横向包被于硝酸纤维素膜上，得质控线，每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为0.1～0.6μg，然后于37℃条件下干燥30～60分钟；(3)样品垫的制备：将玻璃纤维膜放入封闭液中浸湿，取出，于37℃条件下干燥6～12小时，得样品垫，然后置干燥器中室温保存；(4)荧光试纸条的组装：在纸板的粘性面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，交叠长度为1～3mm，即得荧光试纸条。按上述方案，所述荧光试纸条的制备中配制辣椒素类物质包被抗原(4-[(4-羟基-3-甲氧基)苄胺基]-4-羰基羧酸-OVA)包被液中所使用的包被缓冲液为：每10mL中含有卵清蛋白OVA0.1g，叠氮化钠0.002g，氯化钠0.08g，十二水磷酸氢二钠0.029g，氯化钾0.002g，磷酸二氢钾0.002g；配制兔抗鼠多克隆抗体包被液中所使用的包被缓冲液为：每10mL中含有牛血清白蛋白0.1g，叠氮化钠0.002g，氯化钠0.08g，十二水磷酸氢二钠0本文档来自技高网...

【技术保护点】
定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于：它包括荧光试纸条、铕标记的抗辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用单克隆抗体试剂和反应瓶，其中：所述荧光试纸条包括纸板，纸板的粘性面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述的检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述的质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述的检测线上包被辣椒素类物质包被抗原；所述抗辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201534的杂交瘤细胞株分泌产生。

【技术特征摘要】
1.定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于：它包括荧光
试纸条、铕标记的抗辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用单克隆抗体试剂和反应瓶，其中：
所述荧光试纸条包括纸板，纸板的粘性面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻
各垫在连接处交叠连接，所述的检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下
设置横向质控线和检测线，所述的质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述的检测线上包被
辣椒素类物质包被抗原；所述抗辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用单克隆抗体由保藏编
号为CCTCCNO.C201534的杂交瘤细胞株分泌产生。
2.根据权利要求1所述的定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其
特征在于：所述铕标记的抗辣椒素类物质单克隆抗体是按照以下方法制备得到的：将铕标
记试剂活化后与抗辣椒素类物质单克隆抗体混合，震荡过夜，即得目标产物铕标记的抗辣
椒素类物质单克隆抗体。
3.根据权利要求2所述的定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其
特征在于：所述铕标记的抗辣椒素类物质单克隆抗体的制备方法：将铕标记试剂超声分散
在硼酸缓冲液中，加入EDC振荡活化，离心，去除上清液，加入硼酸缓冲液振荡混匀，超声分
散，然后加入抗辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用单克隆抗体，混匀，摇床震荡过夜，离
心去除未结合部分，然后加入OVA封闭铕标记试剂表面多余的结合位点，得目标产物铕标记
的抗辣椒素类物质单克隆抗体。
4.根据权利要求1所述的定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于：所
述的辣椒素类物质包被抗原的分子结构式如式Ⅱ所示：Pr载体蛋白，所述载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、卵清白蛋白OVA或钥孔血蓝蛋白KLH。
5.根据权利要求1所述的定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其
特征在于：所述定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条还包括样品稀释液
和样品稀释液吸管，所述的样品稀释液为质量体积分数为0.01～0.30％的吐温-20，0.5～
1.5％蔗糖和0.1～1％卵清蛋白水溶液；
所述荧光试纸条中的吸水垫长35～45mm，宽3～5mm；检测垫长23～28mm，宽3～5mm；样
品垫长10～15mm，宽3～5mm，相邻各垫的交叠长度为1～3mm；所述荧光试纸条中检测垫上的
检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为5～10mm，质控线和检测线的间距为5～10mm。
6.根据权利要求1所述的定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其
特征在于：所述荧光试纸条中检测垫上每厘米检测线所需的辣椒素类物质包被抗原包被量
为0.125～0.6μg；每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为0.1～0.6μg；所述样
品反应瓶中铕标记的抗辣椒素、二氢辣椒素、合成辣椒素通用单克隆抗体的含量为0.31～
0.53μg。
7.根据权利要求1所述的定量检测辣椒素类物质的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其
特征在于：所述的荧光试纸条的制备步骤如下：
(1)将吸水纸剪裁得吸水垫；
(2)检测垫的制备：
将辣椒素类物质包被抗原配制成浓度为0.2～1.0mg/mL的包被液，于距硝酸纤维素膜
上沿5～10mm的位置，用线喷方...

【专利技术属性】
技术研发人员：李培武，杨青青，马飞，张奇，张良晓，张文，李慧，丁晓霞，张兆威，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42