【技术实现步骤摘要】
本专利技术公开了一种检测试剂卡,具体的说是,一种测定人血清、血浆或全血等样本中的脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂卡,属于荧光免疫层析检测领域。
技术介绍
近年来,随着人们生活水平的提高,心脑血管疾病的发病率和死亡率都呈逐年上升的趋势。心脑血管报告指出,我国心脑血管病现患人数达2.9亿,每5个成年人就有1人患心脑血管病,每10秒钟就有1人死于心脑血管病,因此预防治疗心脑血管疾病已经刻不容缓。心脑血管疾病的基础是动脉粥样硬化,而动脉粥样硬化是一种炎性反应性疾病,在动脉粥样斑块的形成、进展和破裂的过程中均有炎性反应介质的参与,目前国际上已经发现了一种新的炎性标志物,即Lp-PLA2。Lp-PLA2,属于磷脂酶A2家族,主要由炎症细胞分泌。Lp-PLA2是由441个氨基酸组成的蛋白质,其分子量为45KDa。它能水解低密度脂蛋白上的氧化卵磷脂,生成促炎物质溶血磷脂酰胆碱和氧化型游离脂肪酸,能促进动脉粥样硬化的形成和发展。Lp-PLA2的检测能直接准确的反映血管内炎症的程度,并且可作为一个动态指标,确定动脉粥样硬化疾病的进程;通过监测Lp-PLA2水平的变化,可以了解发生粥样硬化相关的心脑血管栓塞性疾病的风险,并及时采取预防和治疗措施。目前,Lp-PLA2的检测方法主要有以下五种方法:(1)酶联免疫分析法,该方法的检测灵敏度较高,但是操作过程繁琐,测定时间较长,不太适合临床应用。(2)连续监测法,该方法是根据酶的 ...
【技术保护点】
一种人Lp‑PLA2生物素‑链霉亲和素荧光免疫层析检测卡,所述的检测试纸包括底板,所述的底板上衔接样品垫,第一标记垫、第二标记垫、包被膜和吸收垫,其特征在于,所述的标记垫包括第一标记垫和第二标记垫,所述的第一标记垫偶联荧光微球的抗Lp‑PLA2单克隆抗体1,所述的第二标记垫偶联生物素抗Lp‑PLA2单克隆抗体2;所述的包被膜上设有一条链霉亲和素检测线T线和一条羊抗鼠多克隆抗体质控线C线,两条线平行排列。
【技术特征摘要】
1.一种人Lp-PLA2生物素-链霉亲和素荧光免疫层析检测卡,所述的检测试纸包括
底板,所述的底板上衔接样品垫,第一标记垫、第二标记垫、包被膜和吸收垫,其特征在
于,所述的标记垫包括第一标记垫和第二标记垫,所述的第一标记垫偶联荧光微球的抗
Lp-PLA2单克隆抗体1,所述的第二标记垫偶联生物素抗Lp-PLA2单克隆抗体2;所述的
包被膜上设有一条链霉亲和素检测线T线和一条羊抗鼠多克隆抗体质控线C线,两条线
平行排列。
2.制备权利要求1所述的一种人Lp-PLA2生物素-链霉亲和素荧光免疫层析检测卡
的方法,在PVC底上依次衔接样品垫,第一标记垫、第二标记垫、包被膜和吸收垫,其
特征在于,所述的第一标记垫的制备方法是将标记好的偶联荧光微球的抗Lp-PLA2抗体
1的溶液喷至第一标记垫;所述的第二标记垫的制备方法是将偶联生物素的抗Lp-PLA2
抗体2的溶液喷至第二标记垫上,放入35-40℃烘箱,干燥2~5小时;所述的包被膜的制
备方法是:在硝酸纤维素膜上缘,用0.01MPH7.4的PBS将羊抗鼠多克隆抗体稀释到
0.8-1.2mg/mL进行包被划线;在硝酸纤维素膜下缘,用0.01MPH9.5的碳酸盐缓冲液将链
霉亲和素稀释到4-6μg/mL进行包被划线;
其中:
所述的偶联荧光微球的抗Lp-PLA2抗体1的制备方法依次包括下述步骤:
1)向1ml0.1M的2-(N-吗啡啉)乙磺酸加入0.24-0.36mg0.3μM稀土元素荧光微
球;再加入24-36μL,8-12mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸溶液和
24-36μL40-60mg/mlN-羟基琥珀酰亚胺,室温震荡反应1~2小时,离心弃上清,收集沉
淀,用0.1M的MES缓冲液重悬,超声分散微球;
2)取15μg抗Lp-PLA2单克隆抗体1加入至步骤1)中,室温震荡反应1~2小时;
3)按16-25μg/1mL的量,向步骤2)中加入牛血清白蛋白,封闭未偶联抗体的活化
羧基位点,反应30~60min;
4)将偶联抗体的荧光微球溶液离心分离后弃去上清,加入500μL抗体保存液;
所述的偶联生物素的抗Lp-PLA2抗体2的制备方法依次包括下述步骤:
1)用DMSO配制浓度8-12mg/mlN-羟基琥珀酰亚胺生物素溶液;
2)用硼酸盐缓冲液配制浓度为1~3mg/ml的抗体溶液;
3)向步骤2)的每毫升的抗体溶液中加入80-120μg步骤1)制备N-羟基琥珀酰亚胺
生物素溶液,混合均匀并放入34-40℃恒温...
【专利技术属性】
技术研发人员:汤永平,解巧丽,潘秀华,张晓丽,李之华,
申请(专利权)人:广州市微米生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:广东;44
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