本发明专利技术公开了一种基于兔单克隆抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒。本发明专利技术包括盒体和设在盒体内的96孔酶标板以及试剂,96孔酶标板内包被有黄体酮包被抗原，盒内的试剂如下:(1)洗涤浓缩液；(2)稀释浓结液；(3)黄体酮标准溶液；(4)黄体酮抗体；(5)辣根过氧化物酶标羊抗兔抗体；(6)底物稀释液；(7)底物；(8)底物显色液；(9)反应终止液。本发明专利技术适用于牛奶、猪尿等样本中黄体酮残留的检测。该试剂盒能同时检测大批量样本,方便又快速，对现场监控痕量分析具有十分重要的现实意义；同时使检测成本大大降低，具有潜在的经济价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及试剂盒，尤其涉及一种基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒。
技术介绍
黄体酮(progesterone)，其属于广谱抗生素，对革兰氏阳性菌、阴性菌均有良好的抑制作用，因而广泛应用于畜牧、水产养殖业。但在动物性食品内残留的黄体酮对人体的健康具有潛在的危害。为此，世界上许多国家均制定了黄体酮的最高残留标准，严格限制其使用。为了适应加入WTO后的国际竞争与挑战，必须建立起一种具有自主知识产权的快速检测方法。因此开发出一种简单快速，适用于黄体酮残余现场监控的痕量分析具有十分重要的现实意义。目前对黄体酮残宙检测的主要方法有色谱法、微生物法等。其中HPLC法、气相色谱以及液相色谱一串联质谱等方法虽然具有灵敏、准确等特点，但该类方法前处理较复杂，所需仪器昂贵，而且需要有熟练的技术人员，难以在基层工作中普及推广。微生物检测方法操作简单，费用低，但耗时长，敏感性和专一性低，易漏检，也会出现假阳性，引起误判，一般用于定性检测筒使。而免疫分析法具有一定的灵敏度和特异性，而且不需要昂贵的仪器设备，为黄体酮提供了一个简単实用的分析检测途径。适用于大量样本的快速检测，ELISA检测方法势必成为检测黄体酮残留的发展趋势。兔单克隆抗体较常规的鼠单克隆抗体具有更多优点。首先，兔子相比于小鼠能识别更多免疫抗原的表位。其次，由于兔脾脏较大，可以进行更多的融合实验，使得高通量筛选融合细胞成为可能。本试剂盒应用杂交瘤技术及重组抗体技术得到黄体酮兔单克隆抗体，开发出基于兔单克降抗体的黄体酮间接酶联免疫试剂盒，国内外均未见有报道。因此，需要对现有技术进行改进。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种具有高特异性、高灵敏度的基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒。基于兔単克隆抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒，包括盒体和设在盒体内的96孔酶标板以及试剂；96孔酶标板内包被有黄体酮包被抗原；所述盒内的试剂包括：洗涤浓缩液，稀释浓缩液，黄体酮标准溶液，黄体酮抗体，辣根过氧化物酶标羊抗兔抗体，底物稀释液，底物，底物显色液及反应终止液。作为本专利技术基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒的改进：所述的黄体酮包被抗原为黄体酮与卵清蛋白的偶联产物，黄体酮包被抗原能与抗黄体酮抗体特异性结合。作为本专利技术基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒的进一步改进：所述的洗涤浓缩液的组成为：氣化钠7～9g、磷酸二氧钾0.1～0.3g、磷酸氢二钠3～5g、氯化钾0.1～0.3g、吐温200.5～1ml和去离子水。作为本专利技术基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒的进一步改进：所述的稀释浓缩液的组成为：氯化钠7～9g、磷酸二氢钾0.1～0.3g、磷酸氢二钠3～5g、氯化钾0.1～0.3g和去离子水。作为本专利技术基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒的进一步改进：所述的黄体酮抗体是兔单克降抗体，是以兔子为免疫动物，经过杂交瘤技术以及重组抗体技术最终得到的。作为本专利技术基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒的进一步改进：所述的底物显色液为3，3，5，5一四甲基联苯胺配制液。作为本专利技术基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒的进一步改进：所述的底物稀释液为pH5.0柠檬酸缓冲液，pH5.0柠檬酸缓冲液的组成为：3～6g柠檬酸、6～9g磷酸氢二钠和去离子水。作为本专利技术基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒的进一步改进：所述的黄体酮标准溶液的浓度为：10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.625ng/mL或0.3125ng/mL。作为本专利技术基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒的进一步改进：所述的底物为过氧化氢或过氧化脲。作为本专利技术基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒的进一步改进：所述的反应终止液为2M硫酸或盐酸。本专利技术的优点是：本专利技术适用于牛奶、峰蜜等样品中黄体酮残留的检测。该试剂盒能同时检测大批量样本，方便又快速，对现场监控痕量分析具有十分重要的现实意义；同时使检测成本大大降低，具有潜在的经济价值。附图说明下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。图1是本专利技术基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒以PBS缓冲液为基质的黄体酮单抗间接竞争ELISA标准曲线图；图2是本专利技术基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒以牛奶为基质的黄体酮单抗间接竞争ELISA标准曲线图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此。实施例、基于兔単克隆抗体开发黄体酮残留分析的间接酶联免疫吸附试剂盒，如图1-2所示，该试剂盒基于免疫反应和酶促反应，能够检测牛奶及峰蜜等样本中的黄体酮的残留。基于兔单克隆抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒包括盒体和设在盒体内的96孔酶标板以及试剂。96孔酶标板内包被有黄体酮包被抗原，盒内的试剂如下：(1)洗涤浓缩液；(2)稀释浓缩液；(3)黄体酮标准溶液；(4)黄体酮抗体；(5)辣根过氧化物酶标羊抗兔抗体；(6)底物稀释液；(7)底物；(8)底物显色液；(9)反应终止液。洗涤浓缩液的组成为：氯化钠7～9g、磷酸二氢钾0.1～0.3g、磷酸氢二钠3～5g、氯化钾0.1～0.3g、吐温200.5～ml和去离子水。所述的稀释浓缩液的组成为：氯化的7～9g、磷酸二氢钾0.1～0.3g、磷酸氢二钠3～5g、氯化钾0.1～0.3g和去离子水。黄体酮抗体是兔单克隆抗体，是以兔子为免疫动物，经过杂交瘤技术以及重组抗体技术最终得到的。底物显色液为3，3，5，5一四甲基联苯胺配制液。底物稀释液为pH5.0柠檬酸缓冲液，pH5.0柠檬酸缓冲液的组成为：3～6g柠檬酸、6～9g磷酸氢二钠和去离子水。黄体酮标准溶液的浓度为：10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.625ng/mL或0.3125ng/mL。底物为过氧化氢或过氧化脲。反应终止液为2M硫酸或盐酸。盒内的试剂设置：(1)洗涤浓缩液1瓶，25～35mL/瓶，内含有氯化与内7～9g、磷酸二氢钾0.1～0.3g、磷酸氧二钠3～5g、氯化钾0.1～0.3g、吐温200.5～lm1，为正常使用浓度的30～40倍；(2)稀释浓缩液1瓶，25～35mL/瓶，内含有氯化钠7～9g、磷酸二氢钾0.1～0.3g、磷酸氢二钠3～5g、氯化钾0.1～0.3g，为正常使用浓度的30～40倍；(3)黄体酮标准溶液(10ng/mL、5ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.lng/mL、0.05ng/mL)各1瓶，lmL/瓶；(4)黄体酮抗体1管，25～50μ1/管，使用时2000～3000倍稀释；(5)辣根过氧化物酶标羊抗兔抗体(酶标二抗)1管，50-100μ1/管，使用时1000～2000倍稀释；(6)底物稀释液1瓶，25～35mL/瓶，内含3～6g柠檬酸，6～9g磷酸氧二钠，为正常使用量的30-40倍，(7)底物1瓶，1～5mL/瓶，其为过氧化氢或过氧化脲；(8)底物显色液为四甲基联苯1按配制液1瓶，2～5mL/本文档来自技高网...
【技术保护点】
基于兔単克隆抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒，其特征在于：包括盒体和设在盒体内的96孔酶标板以及试剂，96孔酶标板内包被有黄体酮包被抗原；所述盒内的试剂包括：洗涤浓缩液，稀释浓缩液，黄体酮标准溶液，黄体酮抗体，辣根过氧化物酶标羊抗兔抗体，底物稀释液，底物，底物显色液及反应终止液。
【技术特征摘要】
1.基于兔単克隆抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒，其特征在于：包括盒体和设在盒体内的96孔酶标板以及试剂，96孔酶标板内包被有黄体酮包被抗原；所述盒内的试剂包括：洗涤浓缩液，稀释浓缩液，黄体酮标准溶液，黄体酮抗体，辣根过氧化物酶标羊抗兔抗体，底物稀释液，底物，底物显色液及反应终止液。2.根据权利要求1所述的基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒，其特征在于：所述的黄体酮包被抗原为黄体酮与卵清蛋白的偶联产物，黄体酮包被抗原能与抗黄体酮抗体特异性结合。3.根据权利要求1所述的基于兔单克隆抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒，其特征在于：所述的洗涤浓缩液的组成为：氣化钠7～9g、磷酸二氧钾0.1～0.3g、磷酸氢二钠3～5g、氯化钾0.1～0.3g、吐温200.5～1ml和去离子水。4.根据权利要求1所述的基于兔单克降抗体的黄体酮残留分析酶联免疫吸附试剂盒，其特征在于：所述的稀释浓缩液的组成为：氯化钠7～9g、磷酸二氢钾0.1～0.3g、磷酸氢二钠3～5g、氯化钾0.1～0.3g和去离子水。5.根据权利要求1所述的基于兔単克隆抗体的黄体酮残...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑晓冬，李洪波，楚强，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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