本发明专利技术提供一种DNA免疫吸附剂，其包括碳化树脂载体和P(HEMA‑b‑GMA)聚合物膜层，DNA通过物理包埋作用以及与GMA的环氧基团发生开环反应而固载于碳化树脂载体表面。P(HEMA‑b‑GMA)中的GMA可以和DNA分子发生开环反应将DNA化学固载在膜层上，可防止DNA脱落，提高吸附剂的吸附性能。此外，还提供一种DNA免疫吸附剂的制备方法。
DNA immune adsorbent and preparation method thereof
The invention provides a DNA immune adsorbent, including its carbonized resin carrier and P (HEMA B GMA) polymer film, DNA encapsulation effect by physical and epoxy groups and GMA ring opening reaction and immobilized on the surface of carbide resin carrier. P (HEMA B GMA) in GMA and DNA molecules ring opening reaction of DNA chemical immobilization in the film, can prevent the shedding of DNA, improve the adsorption performance of the adsorbent. In addition, the invention also provides a preparation method of DNA immune adsorbent.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及血液净化领域，具体涉及碳化树脂DNA免疫吸附剂的制备方法。
技术介绍
系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,以下简称SLE)是一种常见的累及多系统多器官的自身免疫性疾病。由于患者机体免疫调节障碍及自身免疫耐受状态被打破，产生多种针对自身组织的抗体，导致组织和器官的损伤，这些抗体主要是抗Sm抗体、抗核抗体以及抗DNA抗体。其中抗DNA抗体可分为抗单链DNA抗体(抗ss-DNA抗体)和抗双链DNA抗体(抗ds-DNA抗体)。根据国内外临床及基础研究表明，抗ds-DNA抗体的滴度与疾病严重程度及活动性呈正相关。最近几年，激素及免疫抑制剂的应用使SLE患者的愈后效果得到明显改善，但依旧存在很多患者药物疗效不显著的现象，过度的免疫抑制治疗所引起的感染是引起SLE患者死亡的主要原因。另外，多方面研究证实，抗双链DNA抗体(抗ds-DNA抗体)与DNA结合成为免疫复合物在肾小球基底膜沉积，或ds-DNA抗体直接作用于肾小球抗原，从而造成SLE患者的肾损伤。使用DNA免疫吸附(IA)对患者进行血液灌流，是近二、三十年发展起来的新型疗法。Jones,FrankR(EP0272792A1,1987)对这种方法作了详细说明。DNA免疫吸附剂的吸附作用是依靠DNA对致病性抗ds-DNA抗体的特异识别作用，清除患者血液中的致病物质，缓解病情，改善患者的免疫功能，从而逐渐恢复健康。美国的TermanDS等人(Lancet,1979,2(8147):824-7)首次使用活性炭为载体材料，采用火棉胶包膜固定DNA，得到DNA免疫吸附剂用于血液灌流治疗一名重度SLE患者，使患者生命延长，从此开辟了DNA吸附剂治疗SLE的先河。使用火棉胶包膜，使DNA免疫吸附剂的安全有效性得到了保证，但吸附率仅为50％左右。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是针对现有技术的缺陷，提供一种吸附性能更好的DNA免疫吸附剂。为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案为：DNA免疫吸附剂，包括碳化树脂载体以及交联P(HEMA-b-GMA)膜层，DNA通过物理包埋作用以及与GMA的环氧基团发生开环反应而固载于碳化树脂表面。P(HEMA-b-GMA)化学名称为聚(甲基丙烯酸羟乙酯-b-甲基丙烯酸缩水甘油酯)，交联P(HEMA-b-GMA)中的GMA可以和DNA分子发生开环反应将DNA化学固载在膜层上，可防止DNA脱落，提高吸附剂的吸附性能。本专利技术要解决的另一技术问题是提供一种制备DNA免疫吸附剂的方法。为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案为：DNA免疫吸附剂的制备方法，将碳化树脂载体与包膜溶液混合，然后搅拌、过滤、干燥、冷却，得到DNA免疫吸附剂；其中，包膜溶液与碳化树脂的体积比为(3-5)：1；包膜溶液中含有DNA和交联P(HEMA-b-GMA)。包膜溶液中含有DNA和交联P(HEMA-b-GMA)。在包膜后的后处理过程中，DNA会与交联P(HEMA-b-GMA)侧链中的GMA发生开环反应，使DNA通过化学作用固载在膜层上，可防止DNA脱落，有效提高吸附剂的吸附性能。另外，P(HEMA-b-GMA)中的GMA与HEMA中的羟基可发生开环交联反应，从而降低P(HEMA-b-GMA)的溶解性能，增强膜的稳定性，进而增加DNA分子在膜层内部的物理包埋作用。优选的，包膜溶液中含有DNA的浓度为0.17-0.4mg/ml,P(HEMA-b-GMA)的质量浓度为0.4％-0.8％。较好的方案为交联P(HEMA-b-GMA)中GMA的含量范围为1％-5％。当GMA在聚合物中的含量在1％-5％时，形成的P(HEMA-b-GMA)/DNA膜层溶胀性能不明显，部分DNA与GMA发生化学键合作用，DNA几乎没有脱落，吸附剂的吸附率均可达到75％以上，吸附性能好。较好的方案为所述包膜溶液通过以下方法制得：将DNA原液与P(HEMA-b-GMA)乙醇溶液按1：(4-5)的体积比混合，然后搅拌或振荡至DNA完全溶解，得到所述包膜溶液，DNA原液中DNA的浓度为1-2mg/ml，P(HEMA-b-GMA)乙醇溶液中交联P(HEMA-b-GMA)的质量浓度为0.5％-1.0％。还好的方案是干燥温度为70℃-85℃，干燥时间为1.5-3小时。GMA的开环反应需要在加热条件下进行，但DNA在加热条件下会发生变性导致DNA双链双螺旋解开，DNA能耐受的最高温度为85℃，故优选的干燥温度为70℃-85℃，干燥1.5-3小时。更优选的，干燥时间为2小时。为解决上述技术问题，本专利技术提供的另一技术方案为DNA免疫吸附剂的制备方法，包括以下步骤：步骤一：将DNA原液与P(HEMA-b-GMA)乙醇溶液按1：(4-5)的体积比混合，搅拌或振荡至DNA完全溶解，得到包膜溶液；步骤二：量取一定体积的干燥碳化树脂，倒入所述包膜溶液中，搅拌、过滤、干燥、冷却，得到所述DNA免疫吸附剂；其中，DNA原液中DNA的浓度为1-2mg/ml，P(HEMA-b-GMA)乙醇溶液中交联P(HEMA-b-GMA)的质量浓度为0.5％-1.0％；包膜溶液与碳化树脂的体积比为(3-5)：1。包膜溶液中含有DNA和交联P(HEMA-b-GMA)。在包膜后的后处理过程中，DNA会与P(HEMA-b-GMA)侧链中的GMA发生开环反应，使DNA通过化学作用固载在膜层上，可防止DNA脱落，有效提高吸附剂的吸附性能。另外，P(HEMA-b-GMA)中的GMA与HEMA中的羟基可发生开环交联反应，从而降低P(HEMA-b-GMA)的溶解性能，增强膜的稳定性，进而增加DNA分子在膜层内部的物理包埋作用。较好的方案为交联P(HEMA-b-GMA)中GMA的含量范围为1％-5％。当GMA在聚合物中的含量在1％-5％时，形成的P(HEMA-b-GMA)/DNA膜层溶胀性能不明显，部分DNA与GMA发生化学键合作用，DNA几乎没有脱落，吸附剂的吸附率均可达到75％以上，吸附性能好。还好的方案是干燥温度为70℃-85℃，干燥时间为1.5-3小时。GMA的开环反应需要在加热条件下进行，但DNA在加热条件下会发生变性导致DNA双链双螺旋解开，由于DNA能耐受的最高温度为85℃，故优选的干燥温度为70℃-85℃，干燥1.5-3小时。更优选的，干燥时间为2小时。本专利技术DNA免疫吸附剂的载体为碳化树脂，但对碳化树脂的选择没有严格的限制，可以通过商业途径购买，可以通过任何公知的方法制备，亦可以通过以下方法制得：以苯乙烯和二乙烯苯为单体，二乙烯苯占混合单体总质量的0.5％，以三倍于单体(重量比)的甲苯为致孔剂，以过氧化苯甲酰为引发剂，用量为混合单体总质量的1％，以1％明胶水溶液为分散介质，进行悬浮聚合，在80℃下反应5小时，获得大孔树脂；将上述制备的树脂放入电阻炉中，在惰性气体保护下，在300℃的温度下烧灼10小时，然后升温至800℃，即获得碳化树脂。本专利技术对DNA原液亦没有严格的要求，可通过公知技术手段制备，如通过以下的方法制备：将高纯度小牛胸腺DNA(DNA含量85％以上)溶解于0.2mol/LTris-HCL(pH＝7.9)缓冲溶液中，配制DNA浓度为1-2mg/ml的DNA原液，备用。具体实施本文档来自技高网...
【技术保护点】
DNA免疫吸附剂，包括碳化树脂载体，其特征在于：所述DNA免疫吸附剂还包括交联P(HEMA‑b‑GMA)膜层，DNA通过物理包埋作用以及与GMA的环氧基团发生开环反应而固载于所述碳化树脂载体表面。
【技术特征摘要】
1.DNA免疫吸附剂，包括碳化树脂载体，其特征在于：所述DNA免疫吸附剂还包括交联P(HEMA-b-GMA)膜层，DNA通过物理包埋作用以及与GMA的环氧基团发生开环反应而固载于所述碳化树脂载体表面。2.DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于：将碳化树脂与包膜溶液混合，然后搅拌、过滤、干燥、冷却，得到所述DNA免疫吸附剂；其中，所述包膜溶液与所述碳化树脂的体积比为(3-5)：1；所述包膜溶液中含有DNA和交联P(HEMA-b-GMA)。3.根据权利要求2所述DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于：所述交联P(HEMA-b-GMA)中GMA的含量为1％-5％。4.根据权利要求2所述DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于：所述包膜溶液通过以下方法制得：将DNA原液与P(HEMA-b-GMA)乙醇溶液按1：(4-5)的体积比混合，然后搅拌或振荡至DNA完全溶解，得到所述包膜溶液，其中，所述DNA原液中DNA的浓度为1-2mg/ml，所述P(HEMA-b-GMA)乙醇溶液中交联P(HEMA-b-GMA)的质量浓...
【专利技术属性】
技术研发人员：董凡，谢高峰，邵柯，
申请(专利权)人：珠海健帆生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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