增强铝盐吸附疫苗的免疫刺激效力的方法技术

本发明专利技术提供的是(1)一种混合铝盐吸附免疫原与含单磷酰脂质A(MPLA)的脂质体(L(MPLA))的方法，和(2)所得的免疫原性组合物。所得的免疫原性组合物，与含有混合有L(MPLA)的未包封免疫原的组合物或单独使用的铝盐吸附免疫原相比，均具有增强的免疫刺激效力。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求享受2014年3月25日提交的美国临时申请号61/969905的权利。美国政府的权利本专利技术是在美国政府的支持下进行的。美国政府对本专利技术享有一定的权利。专利
本专利技术中所描述的是一种通过混合铝盐吸附免疫原与包含单磷酰脂质A(MPLA)的脂质体，来增强铝盐吸附免疫原的免疫刺激效力的方法，及其所得到的组合物。专利技术背景许多现代疫苗要获得最佳有益效果，需要使用能够在注射后保持全身安全性和最小副作用的同时增强免疫应答的疫苗佐剂。临床批准的最常见的佐剂形式是铝盐，其几乎是在九十年前首次测试。铝盐目前已应用于许多疫苗中，例如，针对宫颈癌(HPV)、肝炎、脊髓灰质炎、破伤风、白喉、以及季节性流感的疫苗。参见例如，Baylor等，2002，Vaccine20：S18-S23；另外参见Kristensen，2012SummaryofStabilitydataforlicensedvaccines，互联网网址http：//www.path.org/publications/files/TS_vaccine_stability_table.pdf。尽管它们的精确作用机制尚待充分理解研究，这些佐剂已被广泛地用于经许可的人用疫苗数十年。它们具有较长的安全记录，并已被施用于人类数十亿人次的剂量。尽管如此，铝盐佐剂的作用效果各不相同，例如，其作用效果的范围从有效到效果不佳或甚至无效。参见例如，Aprile等，1966，Can.J.PublicHealth57：343-60.专利技术概要因此，本领域仍然需要开发更有效的疫苗制剂。针对这一点，可能需要鉴定和表征新佐剂。可替代地，这样的目标可以通过增强现有铝盐吸附疫苗的免疫刺激效力来实现。本专利技术所提供的是一种通过混合含单磷酰脂质A(MPLA)的脂质体(L(MPLA))组合物与铝盐吸附免疫原，来获得具有增强的免疫刺激效力的组合物，进而增强铝盐吸附免疫原的免疫刺激效力的方法。本专利技术还描述了由这种方法生产的组合物。例如，本专利技术提供了一种包含与L(MPLA)混合的氢氧化铝凝胶吸附gp120蛋白的HIV疫苗组合物，其显示出具有增强的免疫应答效应，例如，提高了免疫受试者的抗体生成。相应地，本专利技术提供了制备免疫原性组合物的方法，包括将铝盐吸附免疫原与含有单磷酰脂质A(MPLA)的脂质体(L(MPLA))混合，得到液相的免疫原性组合物，其中所述铝盐吸附免疫原包含一种被铝盐吸附的免疫原。该方法还可包括在混合时将所述铝盐吸附免疫原和L(MPLA)在约4℃到约37℃的温度范围内，温育约30分钟至约24小时，或优选约1小时至约12小时。该方法可导致所得免疫原性组合物与单独使用的铝盐吸附免疫原相比具有增强的免疫刺激效力。另外或可替代地，该方法可导致所得免疫原性组合物与混合有L(MPLA)的未包封免疫原相比具有增强的免疫刺激效力。一方面，所述L(MPLA)可以是冻干形式。所述L(MPLA)可包含约50mM至约150mM磷脂，并且所述免疫原性组合物中的铝与MPLA之间的干重比可为约1∶110至约85∶3。铝盐吸附免疫原中的铝和免疫原之间的干重比可为约1∶30至约85∶1。另一方面，所述铝盐可以是磷酸铝、氢氧化铝、硫酸铝钾或其任意组合。所述铝盐吸附免疫原可以是针对乙型流感嗜血杆菌、甲型肝炎、乙型肝炎、人类乳头状瘤病毒、流感、日本脑炎、脑膜炎球菌、肺炎球菌、狂犬病、破伤风类毒素、白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎、莱姆病、炭疽病、伤寒或其组合的铝盐吸附疫苗。另外的方面，铝盐吸附免疫原可包含铝盐吸附的HIV-1蛋白gp120。优选地，铝盐吸附的HIV-1蛋白gp120中的铝盐为氢氧化铝。本专利技术还提供了一种通过混合铝盐吸附免疫原和含单磷酰脂质A(MPLA)的脂质体(L(MPLA))制备的免疫原性组合物。所述免疫原性组合物还可包含生理上可接受的载体。所述免疫原性组合物可包含氢氧化铝吸附的HIV-1蛋白gp120作为铝盐吸附免疫原，并且单次剂量的免疫原性组合物可进一步包含：(1)约10微克至约600微克的gp120蛋白；(2)约20微克至约850微克的铝；和(3)约30微克到约2.2毫克的L(MPLA)，其包含约50mM至约150mM的磷脂。本专利技术还提供了一种增强铝盐吸附免疫原的免疫刺激效力的方法，包括混合L(MPLA)和铝盐吸附免疫原，以获得在液相的免疫原性组合物，其中所述铝盐吸附免疫原包含一种被铝盐吸附的免疫原。该方法可进一步包括在混合时将铝盐吸附免疫原和L(MPLA)在约4℃到约37℃的温度范围内，温育约30分钟至约24小时，或优选约1小时至约12小时。一方面，所述L(MPLA)可以是冻干形式。所述L(MPLA)可包含约50mM至约150mM磷脂，并且所述免疫原性组合物中的铝与MPLA之间的干重比可为约1∶110至约85∶3。铝盐吸附免疫原中的铝和免疫原之间的干重比可为约1∶30至约85∶1。另一方面，所述铝盐可以是磷酸铝、氢氧化铝、硫酸铝钾或其任意组合。所述铝盐吸附免疫原可以是针对乙型流感嗜血杆菌、甲型肝炎、乙型肝炎、人类乳头状瘤病毒、流感、日本脑炎、脑膜炎球菌、肺炎球菌、狂犬病、破伤风类毒素、白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎、莱姆病、炭疽病、伤寒或其组合的铝盐吸附疫苗。另外的方面，铝盐吸附免疫原可包含铝盐吸附的HIV-1蛋白gp120。优选地，铝盐吸附的HIV-1蛋白gp120中的铝盐为氢氧化铝。本专利技术还提供了一种L(MPLA)组合物在增强铝盐吸附免疫原的免疫刺激效力方面的用途。附图简要说明附图被包含在本专利技术说明书范围内并为本专利技术的各种实施方案提供非限制性说明。图1显示了按照实施例1中所述方法混合(一种包含HIV-1gp120的实验性HIV疫苗)与L(MPLA)制备所得的复合物。专利技术详细说明1.定义“免疫原”是一种能够诱导体液和/或细胞介导的免疫应答反应的试剂。如本专利技术所述的免疫原可以是抗原或灭活的病原体。本专利技术所述的免疫原性组合物可以是例如疫苗制剂。用作佐剂的“铝盐”可以包括磷酸铝、氢氧化铝、硫酸铝钾(明矾)或其任意组合。在疫苗领域，所有铝盐佐剂，无论其确切化学成分，通常均被非正式地称为“明矾”。本专利技术所用的“脂质体”是指含有一定被包埋的水相体积的闭合双层膜。脂质体也可以是具有单个双层膜的单层囊泡或具有多个双层膜的多层囊泡，每个双层膜之间由水层隔开。由此而来的双层膜的结构是这样的，脂质的疏水性(非极性)尾部朝向双层膜的中心，而亲水性(极性)头部朝向水相。通常所使用的脂质体，由近晶中间相组成，并且可以由磷脂或非磷脂的近晶中间相组成。近晶中间相在Small撰写的HANDBOOKOFLIPIDRESEARCH，第4卷，Plenum，NY，1986，第49-50页中有最为精准的描述。根据Small的描述，“当分子被加热，其不会直接融化为各向同性液体时，相反，它可能会经过被称为中间相或液晶体的中间状态，其特征为分子在某些方向上排列有序而在另一些方向上排列无序......一般来说，液晶体分子的长度稍微长于它们的宽度并且在沿着分子长轴方向的某处具有极性或芳香族部分。分子形状以及极性部分间的相互作用或极性部分与芳香族部分的相互作用，使所述分子能够排列成部分有序阵列......这些结构特本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备免疫原性组合物的方法，包括混合铝盐吸附免疫原与含单磷酰脂质A(MPLA)的脂质体(L(MPLA))，以获得液相的免疫原性组合物，其中所述铝盐吸附免疫原包含被铝盐吸附的免疫原。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.03.25 US 61/9699051.一种制备免疫原性组合物的方法，包括混合铝盐吸附免疫原与含单磷酰脂质A(MPLA)的脂质体(L(MPLA))，以获得液相的免疫原性组合物，其中所述铝盐吸附免疫原包含被铝盐吸附的免疫原。2.根据权利要求1所述的方法，还包括在混合时，在约4℃至约37℃的温度范围内温育所述铝盐吸附免疫原和L(MPLA)约30分钟至约24小时。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述L(MPLA)为冻干形式。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述L(MPLA)包含约50mM至约150mM的磷脂，并且其中所述免疫原性组合物中的铝与MPLA之间的干重比为约1∶110至约85∶3。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述铝盐吸附免疫原中的铝与免疫原之间的干重比为约1∶30至约85∶1。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述铝盐是磷酸铝、氢氧化铝、硫酸铝钾或其任意组合。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述铝盐吸附免疫原是针对流感嗜血杆菌乙型、甲型肝炎、乙型肝炎、人类乳头状瘤病毒、流感、日本脑炎、脑膜炎球菌、肺炎球菌、狂犬病、破伤风类毒素、白喉、破伤风、百口咳、脊髓灰质炎、莱姆病、炭疽病、伤寒或其组合的铝盐吸附疫苗。8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述铝盐吸附免疫原包含铝盐吸附的HIV-1蛋白gp120。9.根据权利要求1-6和8中的任一项所述的方法，其中所述铝盐为氢氧化铝。10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫原性组合物与单独使用的铝盐吸附免疫原相比具有增强的免疫刺激效力。11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫原性组合物与混合有L(MPLA)的未包封免疫原相比具有增强的免疫刺激效力。12.根据前述权利要求中任一项所述的方法制备的免疫原性组合物。13.根据权利要求12所述的免疫原性组合物，其还包含生...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·R·阿尔文，J·H·金，M·劳，
申请(专利权)人：美国政府陆军部，
类型：发明
国别省市：美国;US