脱氢表雄酮酶联免疫吸附测定试剂盒的研制方法技术

技术编号:8488778 阅读:363 留言:0更新日期:2013-03-28 07:17
本发明专利技术公开的了一种脱氢表雄酮酶联免疫吸附测定试剂盒的研制方法,采用脱氢表雄酮和琥珀酸酐作为原料,利用混合酸酐法,分别制备脱氢表雄酮人工抗原(DHEA-BSA和DHEA-OVA)、抗脱氢表雄酮(DHEA)单克隆抗体,进而制备酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒。通过与高效液相色谱(HPLC)法的比较,其操作步骤简单、可一次检测多个样本、且不需贵重仪器、同时在检测灵敏度、所需时间等方面均优于HPLC法。同时,相较于HPLC法ELISA方法无需使用正己烷、乙腈、甲醇等有机试剂,可减少对实验者及环境的毒害,在环保方面更胜一筹。

【技术实现步骤摘要】

本技术专利技术是一种,设计生物

技术介绍
脱氢表雄酮(DHEA),是一种C19类固醇激素,主要由肾上腺皮质网状带分泌,在循环血液中以DHEA及其储存硫酸盐形式(DHEAS)存在(体内后者是前者的100倍左右),DHEA能转化为雌激素、雄激素、孕激素、皮质醇和皮质酮等其他激素,因此被誉为多向性“激素缓冲剂”。许多研究表明,DHEA在促进脂肪代谢、抗氧化、提高机体免疫力、增强细胞活性、防治老年性痴呆等方面均有积极的作用。机体衰老后体内DHEA及DHEAS水平显著下降,导致各种类固醇激素的含量明显下降,同时伴随心血管疾病、肿瘤发病率的上升以及免疫功能的下降。在实际应用中,DHEA已作为抗衰老保健药进入市场,它不仅抗衰老,还对糖尿病、心脏病、乳腺癌、子宫癌的预防和治疗有明显作用。同时该激素是近年来国际奥委会列出的禁用药物之一,是常规的兴奋剂检测项目。目前对血清和尿液中DHEA的检测方法主要分为色谱技术和免疫分析技术。色谱分析法包括气相色谱法(HPLC)、气质联用和液质联用法等,该类技术需要昂贵的仪器设备,而且DHEA和DHEAS在检测过程中能衍生成同种物质,干扰测定,所以样本首先本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脱氢表雄酮酶联免疫吸附测定试剂盒的研制方法,采用脱氢表雄酮和琥珀酸酐作为原料,其特征在于包括以下步骤:步骤一、制备脱氢表雄酮人工抗原(DHEA?BSA),采用混合酸酐法制备DHEA?BSA,取脱氢表雄酮与琥珀酸酐作为原料,将两者反应、层析、洗脱、收集,合并后留取反应产物得到修饰的半抗原;取适量修饰过的半抗原,加入氯甲基异丁酯和三正丁胺,反应后得A液,取适量BSA溶解在碳酸盐缓冲液中得B液,将A液加入B液中,经过搅拌、洗脱、收集得到蛋白部分,再进行浓缩、冷冻、干燥后得到抗原DHEA?BSA;步骤二、制备脱氢表雄酮人工包被抗原(DHEA?OVA),采用混合酸酐法制备DHEA?OVA,取脱氢表雄...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:何峰容李华渊童晓玲杨娟章秀波汪景谢正红
申请(专利权)人:武汉优尔生科技股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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