一种测量糖化血红蛋白的方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种测量糖化血红蛋白的方法及试剂盒，试剂盒包括盒体、试剂瓶、瓶垫、合页和盒盖，盒体通过合页与盒盖连接，试剂瓶为至少四个，分别放置磁性粒子悬液，红细胞裂解液，冲洗液和信号。本发明专利技术使用能够定量捕捉样本中的糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白的磁性颗粒，只需要检测磁性颗粒上糖化血红蛋白的含量，再与标准工作曲线做对照就能计算出样本中糖化血红蛋白占总血红蛋白的百分比。本发明专利技术操作简单只需一个动作即可完成糖化血红蛋白百分含量的定量检测。本发明专利技术可以不需使用抗体等生物原料，价格低廉，容易实现检测仪器小型化。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及血液检测领域，更具体地讲，涉及离体血液中糖化血红蛋白的检测方法及试剂盒。
技术介绍
目前临床上常用的糖化血红蛋白检测方法有高效液相色谱、免疫法、酶法、离子交换层析、化学发光法等。高效液相色谱、离子交换层析需要使用大型仪器，且仪器价格昂贵；免疫法需要使用大量抗体，且需要使用大型仪器才能进行检测，如生化分析仪等；酶法需要使用多种酶配合进行反应才能得到最终结果，最终结果也需要大型仪器检测。以上各种方法均需要分别检测总血红蛋白和糖化血红蛋白两个指标后，通过计算糖化血红蛋白占总血红蛋白的百分比才能得到最终结果，两次检测带来的直接后果就是检测结果准确性不高，且现有技术操作复杂，必须有专业人士操作才能进行。另外，现有技术使用的仪器价格昂贵且体积庞大。磁微粒分离酶联免疫检测技术是一种以磁性微粒为固相分离载体，将免疫磁微粒分离技术与酶联免疫检测技术相结合而建立的一种新型免疫检测方法。传统ELISA方法，抗原、抗体的结合反应是在固相(ELISA板反应孔)表面进行的，而磁微粒分离酶联免疫检测方法，抗原、抗体的结合反应也是在近似液相的条件下进行，因而反应快速、彻底，与传统ELISA相比具有灵敏度高、检测用时少的优点。中国专利申请糖化血红蛋白定量测定试剂盒及其检测方法(申请号201110257757. 5)即是利用了传统的磁微粒分离酶联免疫检测技术，磁性粒子标记抗糖化血红蛋白抗体，测量糖化血红蛋白总量，而糖化血红蛋白总量在临床上并没有意义，临床上需要的是糖化血红蛋白与总血红蛋白的比值。
技术实现思路
本专利技术所要解决的第一个技术问题是，提供一种操作简单、只需一个动作即可检测出糖化血红蛋白百分含量的定量检测方法。本专利技术所要解决的第二个技术问题是，提供一种操作简单、只需一个动作即可检测出糖化血红蛋白百分含量的试剂盒。本专利技术所要解决的第三个技术问题是，提供测量糖化血红蛋白的试剂盒的使用方法。为了解决上述第一个技术问题，本专利技术提供了一种非疾病治疗目的的测量糖化血红蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)将全血样本裂解以释放出红细胞中的血红蛋白，将固定量的磁性粒子悬液加入裂解后的样本中，磁性粒子吸附血红蛋白后用磷酸盐缓冲液冲洗，并重悬于磷酸盐缓冲液中； (2)在重悬液中加入经过荧光标记或酶标记的可特异性识别糖化血红蛋白的物质，吸附糖化血红蛋白后用磷酸盐缓冲液冲洗，所述可特异性识别糖化血红蛋白的物质是指抗糖化血红蛋白抗体或者间氨基苯硼酸中的一种或两种； (3)冲洗完成后，用荧光标记的，放入荧光检测仪中读数；用酶标记的，加入底物和终止液,反应终止后放入酶标仪中读数。作为一个优选方案，步骤(I)所述的磁性粒子表面为高分子聚合物，通过静电吸附血红蛋白，所述高分子聚合物指聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚乙烯基甲苯、纤维素、琼脂糖中的一种；或者磁性粒子表面为官能团，磁性粒子预先包被抗血红蛋白抗体之后再加入样本中，通过抗血红蛋白抗体捕获血红蛋白，所述官能团指羧基、巯基、环氧基、氨基或者醛基中的一种。步骤(2)所述荧光标记的标记物是罗丹明B、硒化镉量子点、镧配合物中的一种。步骤(2)所述酶标记的标记物是辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶中的一种，加入辣根过氧化物酶的标记物磷酸盐缓冲液冲洗后加入底物过氧化氢溶液和四甲基联苯胺溶液，温育后，加入硫酸溶液终止；加入碱性磷酸酶的标记物磷酸盐缓冲液冲洗后加入底物对硝基苯磷酸盐溶液，温育后，加入碳酸钠溶液终止。为了解决上述第二个技术问题，本专利技术提供了一种测量糖化血红蛋白的试剂盒，包括盒体、试剂瓶、瓶垫、合页和盒盖，盒体通过合页与盒盖连接，其特征在于，所述试剂瓶为至少四个，分别放置磁性粒子悬液，红细胞裂解液，冲洗液和信号，所述磁性粒子悬液吸附血红蛋白，所述红细胞裂解液为纯水或者表面活性剂溶液，通过将全血样本裂解以释放出红细胞中的血红蛋白，所述冲洗液是磷酸盐缓冲液，所述信号为经过荧光标记的可特异性识别糖化血红蛋白的物质，所述荧光标记的标记物是罗丹明B、硒化镉量子点、镧配合物中的一种，所述可特异性识别糖化血红蛋白的物质是指抗糖化血红蛋白抗体或者间氨基苯硼酸中的一种或两种。为了解决上述第二个技术问题，本专利技术亦提供了一种测量糖化血红蛋白的试剂盒，其特征在于，所述试剂瓶为至少六个，分别放置磁性粒子悬液，红细胞裂解液，冲洗液、信号、底物和终止液，所述磁性粒子悬液吸附血红蛋白，所述红细胞裂解液为纯水或者表面活性剂溶液，将全血样本裂解以释放出红细胞中的血红蛋白，所述冲洗液是磷酸盐缓冲液，所述信号为经过酶标记的可特异性识别糖化血红蛋白的物质，所述底物为特异的针对信号的放大系统，根据酶标的不同可以有不止一样底物，所述酶标记的标记物是辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶中的一种，当标记物是辣根过氧化物酶时，底物为过氧化氢溶液和四甲基联苯胺溶液，终止液为硫酸溶液，当标记物是碱性磷酸酶时，底物为对硝基苯磷酸盐溶液，终止液为碳酸钠溶液，所述可特异性识别糖化血红蛋白的物质是指抗糖化血红蛋白抗体或者间氨基苯硼酸中的一种或两种。作为一个优选方案，所述磁性粒子表面为高分子聚合物，通过静电吸附血红蛋白，所述高分子聚合物指聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚乙烯基甲苯、纤维素、琼脂糖中的一种；或者磁性粒子表面为官能团，磁性粒子预先包被抗血红蛋白抗体之后再加入样本中，通过抗血红蛋白抗体捕获血红蛋白，所述官能团指羧基、巯基、环氧基、氨基或者醛基中的一种。为了解决上述第三个技术问题，本专利技术提供了上述测量糖化血红蛋白的试剂盒的使用方法，其特征在于，将全血样本置于反应容器中，倒入红细胞裂解液将全血样本裂解以释放出红细胞中的血红蛋白，加入固定量的磁性粒子悬液，磁性粒子吸附血红蛋白后用磷酸盐缓冲液冲洗，并重悬于磷酸盐缓冲液中；然后在重悬液中加入经过荧光标记或酶标记的可特异性识别糖化血红蛋白的物质，吸附糖化血红蛋白后用磷酸盐缓冲液冲洗；冲洗完成后，用荧光标记的，放入荧光检测仪中读数；用酶标记的，加入底物和终止液，反应终止后放入酶标仪中读数。包被有抗血红蛋白抗体的磁珠只能捕获血红蛋白，包括糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白总量；而不包被的磁珠能捕获样本中的所有蛋白包括血红蛋白和样本中其他蛋白，其他蛋白含量较少。所以，不管包被与否的磁性粒子，只要能捕获血红蛋白均能实现本专利技术目的，但是包被后的灵敏度与抗干扰性要比不包被的好，这样准确度也会提高。磁珠在本专利技术中是以悬浮液的形式存在，只要加入固定体积固定浓度磁珠悬浮液就可以保证加入的磁珠量是固定的。本专利技术的优点在于，本专利技术可以称为“一步法”，基于这样一个全新的思路，由于样本中游离的糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白的比例是固定的，这样载体与样本反应时就能够将样本中的糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白按比例捕获到载体表面。本专利技术使用能够定量捕捉样本中的糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白的磁性颗粒，只需要检测磁性颗粒上糖化血红蛋白的含量，再与标准工作曲线做对照就能计算出样本中糖化血红蛋白占总血红蛋白的百分比。操作简单只需一个动作即可完成糖化血红蛋白百分含量的定量检测。本专利技术可以不需使用抗体等生物原料，价格低廉，容易实现检测仪器小型化。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种非疾病治疗目的的测量糖化血红蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将全血样本裂解以释放出红细胞中的血红蛋白，将固定量的磁性粒子悬液加入裂解后的样本中，磁性粒子吸附血红蛋白后用磷酸盐缓冲液冲洗，并重悬于磷酸盐缓冲液中；（2）在重悬液中加入经过荧光标记或酶标记的可特异性识别糖化血红蛋白的物质，吸附糖化血红蛋白后用磷酸盐缓冲液冲洗，所述可特异性识别糖化血红蛋白的物质是指抗糖化血红蛋白抗体或者间氨基苯硼酸中的一种或两种；（3）冲洗完成后，用荧光标记的，放入荧光检测仪中读数；用酶标记的，加入底物和终止液，反应终止后放入酶标仪中读数。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：江应玲，肖江群，王保丹，钟乾兴，曹大烨，汪大明，
申请(专利权)人：英科新创厦门科技有限公司，
类型：发明
国别省市：