本发明专利技术的目的为提供一种用于在诊断现场正确、简便且迅速地对待测试样中的糖化血红蛋白含量进行比色定量的多层试验片以及测量方法。该多层试验片是用于对糖化血红蛋白含量进行比色定量的多层试验片；至少层叠有下述(a)层和(b)层，所述(a)层和(b)层从待测试样点样面按(a)层、(b)层的顺序层叠；在(a)层和(b)层上承载有过氧化物酶和氧化还原类显色试剂，且过氧化物酶和氧化还原类显色试剂分别承载在不同的层上；并且不具有血液分离层，其中，(a)层：至少承载有蛋白酶的高分子基材，(b)层：至少承载有糖化氨基酸氧化酶的高分子基材。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于在诊断现场正确、简便且迅速地对待测试样中的糖化血红蛋白含量进行比色定量的多层试验片以及测量方法。
技术介绍
测量糖化蛋白质在进行糖尿病的诊断、预防以及治疗方面非常重要。糖化蛋白质通过在生物体内葡萄糖与血中蛋白质的氨基(主要是末端氨基酸的α-氨基、赖氨酸残基的Y-氨基)发生非酶促反应而生成。由于蛋白质糖化的程度直接与血中葡萄糖浓度(以下称为血糖值)成比例，因此，例如，糖化血红蛋白的情况下，通过测量糖化蛋白质可以掌握约2 3个月内的血糖控制状态，糖化白蛋白的情况下，通过测量糖化蛋白质可以掌握约 2 3周内的血糖控制状态。尤其是作为糖化血红蛋白的一种的血红蛋白Alc在糖尿病的诊断时被认为是最重要的。作为上述糖化蛋白质的测量方法，已知有高效液相色谱(HPLC)法、免疫法以及酶法等。在现有技术中，高效液相色谱(HPLC)法以及免疫法占据大部分，但是近年来由于酶法可以迅速、大量、正确且廉价地对大量样本进行测量，因此也开始被频繁采用。有关酶法，例如已知有通过以下的工序对糖化蛋白质进行比色定量的技术(例如，参照专利文献I 4)。(I)使待测试样中的红细胞溶血以提取出糖化血红蛋白的工序。 (2)使上述糖化血红蛋白与蛋白酶反应从而从糖化血红蛋白的糖化的β链N末端切出糖化氨基酸和/或糖化肽的工序。(3)使上述糖化氨基酸和/或糖化肽与糖化氨基酸氧化酶反应从而生成过氧化氢的工序。(4)在过氧化物酶的存在下使上述过氧化氢与氧化还原类显色试剂反应而显色的工序。(5)根据上述显色对待测试样中的糖化血红蛋白含量进行比色定量的工序。但是，所涉及的现有技术是稀释待测试样、添加液体状态的试剂、使之在反应容器内发生反应后测量反应液的吸光度的方法，以使用生物化学自动分析装置的方法为主流，但是所述生物化学自动分析装置存在是大型装置且价格昂贵、需要熟练的检测技师来操作、从採血到出报告结果为止的时间较长这些问题，难以适用于P0CT(point of care testing (即，临床现场即时检查))。另一方面，为解决上述问题，专利技术了糖化蛋白质测量用试验片(例如专利文献5)， 该试验片利用了所谓的干化学法，在该方法中，通过以干燥状态将试剂承载在基材上，再向其添加液体状态的待测试样，从而将待测试样中的水分作为溶剂而使反应得以进行。该专利技术改良点如下装置为小型且廉价，操作简便，从採血到出报告结果为止可以短时间完成。 但是，存在得不到能够经得起实际使用的保存稳定性的问题，即糖化氨基酸氧化酶发生失活、分解、氧化还原类显色试剂发生自显色的问题。另外，从POCT的观点出发，待测试样的血液样本必须进行溶血等前处理这一点也存在问题。另外，还公开了利用了干化学法的由多层构成的试剂试验片的专利技术(例如参照专利文献6)。该专利技术也具有如下改良点装置为小型且廉价，操作简便，从採血到出报告结果为止可以短时间完成，但是，存在得不到能够经得起实际使用的保存稳定性的问题，即氧化还原类显色试剂发生自显色的问题。另外，如从将血液分离层配置在第一层也会获知的那样，该专利技术仅仅设想对糖化蛋白质中的作为血浆蛋白质的糖化白蛋白进行测量，而没有公开任何有关测量糖化血红蛋白的具体例子。现有技术文献专利文献专利文献1:国际公开第2002-006519号专利文献2:特开2004-222570号公报专利文献3:特开2007-181466号公报专利文献4:特开2010-148515号公报专利文献5:特开2004-333452号公报专利文献6:特开2004-004071号公报非专利文献非专利文献1:Clinical Chemistry 43:122390-2396(1997)
技术实现思路
专利技术所要解决的技术问题本专利技术是以有关现有技术的技术问题为背景进行的。即，本专利技术的目的为提供一种用于在诊断现场正确、简便且迅速地对待测试样中的糖化血红蛋白含量进行比色定量的多层试验片以及测量方法。更具体而言，本专利技术的目的在于提供一种保存稳定性优异的、用于对糖化血红蛋白含量进行比色定量的多层试验片以及测量方法。解决技术问题的手段本申请专利技术人发现，当将蛋白酶与糖化氨基酸氧化酶承载在相同层时，在保存中发生由蛋白酶引起的糖化氨基酸氧化酶失活和/或分解，从而导致保存稳定性显著降低。另外还发现，当将过氧化物酶与氧化还原类显色试剂承载在相同层时，在保存中发生由过氧化物酶引起的氧化还原类显色试剂的自显色，从而导致保存稳定性显著降低。 由于与葡萄糖浓度等相比，待测试样中的糖化血红蛋白浓度一般为低浓度，因此在测量糖化血红蛋白时优选使用高灵敏度的无色色素，但无色色素特别不稳定，容易发生自显色。因而本申请专利技术人将蛋白酶与糖化氨基酸氧化酶承载在不同层上，并且将蛋白酶承载在比糖化氨基酸氧化酶更靠近待测试样点样面的层上。由此发现，糖化氨基酸氧化酶的保存稳定性显著提高，并且蛋白酶的反应性也提高，测量精度也提高，从而完成了本专利技术。此外，通过将过氧化物酶与氧化还原类显色试剂分别承载在不同层上，使提高氧化还原类显色试剂的保存稳定性同时获得成功，从而完成了本专利技术。S卩，本专利技术具有以下构成要素。1、一种多层试验片，用于对糖化血红蛋白含量进行比色定量，其特征在于该多层试验片至少层叠有下述(a)层和(b)层，所述(a)层和(b)层从待测试样点样面按(a)层、 (b)层的顺序层叠，在(a)层和(b)层中的不同的层上分别承载过氧化物酶和氧化还原类显 色试剂，而且所述多层试验片不具有血液分离层，其中，(a)层至少承载有蛋白酶的高分 子基材，(b)层至少承载有糖化氨基酸氧化酶的高分子基材。2、根据I所述的多层试验片，其特征在于所述多层试验片在(a)层和(b)中的至 少一层上还承载有表面活性剂。3、一种多层试验片，用于对糖化血红蛋白含量进行比色定量，其特征在于所述多 层试验片至少层叠有下述(a)层、(b)层和(C)层，所述(a)层、(b)层和(C)层从待测试样 点样面按(a)层、(b)层及(C)层、(a)层、(C)层及(b)层或(C)层、(a)层及(b)层的顺 序层叠，在(a)层、(b)层和(C)层中的不同层上分别承载过氧化物酶和氧化还原类显色试 剂，而且所述多层试验片不具有血液分离层，其中，(a)层至少承载有蛋白酶的高分子基 材，(b)层至少承载有糖化氨基酸氧化酶的高分子基材，(C)层至少承载有除蛋白酶和糖 化氨基酸氧化酶外的任意试剂的高分子基材。4、根据3所述的多层试验片，其特征在于所述多层试验片在(a)层、(b)层和(C) 层中的至少一层上还承载有表面活性剂。5、根据I至4中任一项所述的多层试验片，其特征在于蛋白酶是选自至少由 来自杆状菌(Bacillus)的蛋白酶、来自曲霉菌(Aspergillus)的蛋白酶、来自链霉菌 (Streptomyces)的蛋白酶以及来自念球菌(Tritirachium)的蛋白酶组成的组中的一种以上。6、根据I至5中任一项所述的多层试验片，其特征在于氧化还原类显色试剂是最 大吸收波长为600nm 800nm的无色色素。7、根据I至6中任一项所述的多层试验片，其特征在于表面活性剂是亲水亲油平 衡值(Hydrophile Lipophile Balance Value HLB Value)为 10 20 的非离子性表面活本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种多层试验片，用于对糖化血红蛋白含量进行比色定量，其特征在于：所述多层试验片至少层叠有下述(a)层和(b)层，所述(a)层和(b)层从待测试样点样面按(a)层、(b)层的顺序层叠，在(a)层和(b)层中的不同的层上分别承载过氧化物酶和氧化还原类显色试剂，而且所述多层试验片不具有血液分离层，其中，(a)层：至少承载有蛋白酶的高分子基材，(b)层：至少承载有糖化氨基酸氧化酶的高分子基材。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：冈本淳，塚本晓，中森雅彦，
申请(专利权)人：东洋纺织株式会社，
类型：发明
国别省市：
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