糖化血红蛋白质控品的制备方法及其质控品技术

本发明专利技术提供一种糖化血红蛋白质控品的制备方法，包括以下步骤：采集非糖尿病患者的血液样本，进行离心处理、去浆，得到红细胞；向红细胞中加入红细胞保存液，制得红细胞样本；将红细胞样本缓慢加入到分层液，离心得到分层的红细胞，每一密度的细胞分离液中均分散有与其适配的红细胞；将分层的红细胞分装于不同的试管内，向每一试管内加入生理盐水，得到红细胞悬浮液，调节所述红细胞悬浮液的血红蛋白浓度为120g/L，筛选出HbA1c值为3～5％的红细胞悬浮液，获得糖化血红蛋白质控品。本发明专利技术还提供一种质控品。本发明专利技术的制备方法能够批量生产低值糖化血红蛋白质控品。

Preparation method of glycosylated hemoglobin quality control product and its quality control product

The invention provides a preparation method of glycosylated hemoglobin quality control, which comprises the following steps: collection of non diabetic patients blood samples were centrifuged to obtain plasma, red blood cells, red cells; joined Red Cell Storaging Solution, made of red blood cell samples; red blood cell samples slowly into stratified liquid, centrifuging to obtain layered red a cell, which is matched with the red blood cells were scattered every cell separation density; hierarchical erythrocyte packed in different test tubes, to add saline each test tube, get the red cell suspension, regulating the hemoglobin concentration of red blood cell suspension was 120g/L, selected HbA1c value for the red blood cell suspension from 3 to 5%, to obtain HbA1c control. The invention also provides a quality control product. The preparation method of the invention can be used for mass production of low value glycosylated hemoglobin quality control products.

【技术实现步骤摘要】
糖化血红蛋白质控品的制备方法及其质控品
本专利技术涉及医学检验
，尤其涉及一种糖化血红蛋白质控品的制备方法及其质控品。
技术介绍
目前临床上测定糖化血红蛋白(HbA1c)含量的方法按照理化性质不同，可分为两大类：一类是基于糖化与非糖化血红蛋白所带电荷不同，如离子交换色谱法、电泳法；另一类是基于糖化与非糖化血红蛋白的结构不同，如免疫法、亲和层析法及酶法等。采用不同测定方法或者同一测定方法而选用不同厂家生产的试剂，进行检测前，需要用质控品进行质量控制或校准品进行校准。目前，自制新鲜冰冻全血是HbA1c检测的良好质控物或校准品。然而，正常人的HbA1c的浓度在5％～6％之间，不同浓度值的获得具有随机性，且不可控，不利于产业化；其中HbA1c浓度值为3％～5％的临床红细胞样本很稀有，不易获得。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种糖化血红蛋白质控品的制备方法，旨在提供一种批量生产HbA1c值为3～5％的糖化血红蛋白质控品的方法。为实现上述目的，本专利技术提供的糖化血红蛋白质控品的制备方法，其包括以下步骤：采集非糖尿病患者的血液样本，进行离心、去浆处理，得到红细胞；向所述红细胞中加入红细胞保存液，制得红细胞样本；配制密度不同的细胞分离液，根据密度由大到小，将细胞分离液依次加入至一离心管内，得到分层液；将所述红细胞样本缓慢加入到分层液，离心得到分层的红细胞，每一密度的细胞分离液中均分散有与其适配的红细胞；将所述分层的的红细胞分装于不同的试管内，向每一试管内加入生理盐水，得到红细胞悬浮液，调节所述红细胞悬浮液的血红蛋白浓度为120g/L，筛选出HbA1c值为3～5％的红细胞悬浮液，获得糖化血红蛋白质控品。优选地，筛选出HbA1c值为3～5％的红细胞悬浮液后，所述糖化血红蛋白质控品的制备方法还包括：向HbA1c值为3～5％的红细胞悬浮液添加缓冲液，进行溶血处理，获得HbA1c值为3～5％的溶液和分散于所述溶液的红细胞膜；离心，去除红细胞膜；向HbA1c值为3～5％的溶液加入冻干保护剂或稳定剂中的至少一种、并进行冻干或液体冰冻保存处理，获得所述糖化血红蛋白质控品。优选地，所述缓冲液中添加有表面活性剂。优选地，所述细胞分离液的密度范围为1.085～1.127g/mL。优选地，所述血液样本的血红蛋白浓度为120～160g/L，单位体积内红细胞的个数为4×1012～5.5×1012个/L，HbA1c的浓度为4～6％。优选地，得到细胞混合物后，向所述细胞混合物中加入红细胞保存液前，还包括对所述细胞混合物进行洗涤处理的步骤，所述洗涤处理为：向所述细胞混合物中加入2～8℃的磷酸盐缓冲液，离心2～5次，并去除上清液及白膜层。优选地，所述红细胞保存液的红细胞的容积比与所述细胞混合物中的红细胞的容积比相等。优选地，所述将所述红细胞样本缓慢加入到分层液，离心得到分层的红细胞，每一密度的细胞分离液中均分散有与其适配的红细胞的步骤中，离心温度为0～20℃，离心力为1500～4000g。优选地，在将所述分层的红细胞分装于不同的试管内之后，向每一试管内加入生理盐水之前，还包括用磷酸盐缓冲液洗涤所述红细胞，并去除上清液的步骤。本专利技术还提出一种由所述的糖化血红蛋白质控品的制备方法所制得的质控品。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术技术方案采集非糖尿病患者的正常人的血液，最终获得的糖化血红蛋白质控品来自健康红细胞，消除了基质效应问题，提高采用该糖化血红蛋白质控品的分析仪器的测量准确性，同时也扩大了原料的来源；在红细胞中加入红细胞保存液，模拟血液的环境，从而维持红细胞的生理活性。本专利技术采用非连续密度梯度离心法获得不同HbA1c值的糖化血红蛋白质控品，方法简便，便于进行工业化生产。此外，制得的糖化血红蛋白质控品呈液态，能够消除瓶间差，提高采用该质控品的分析仪器的测量精度。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。另外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。本专利技术提供一种糖化血红蛋白质控品的制备方法，其包括以下步骤：采集非糖尿病患者的血液样本，进行离心、去浆处理，得到红细胞；向所述红细胞中加入红细胞保存液，制得红细胞样本；配制密度不同的细胞分离液，根据密度由大到小，将细胞分离液依次加入至一离心管内，得到分层液；将所述红细胞样本缓慢加入到分层液的表层，离心得到分层的红细胞，每一密度的细胞分离液中均分散有与其适配的红细胞；将所述分层的的红细胞分装于不同的试管内，向每一试管内加入生理盐水，得到红细胞悬浮液，调节所述红细胞悬浮液的血红蛋白浓度为120g/L，筛选出HbA1c值为3～5％的红细胞悬浮液，获得糖化血红蛋白质控品。本专利技术采用非连续密度梯度离心法将正常人的健康新鲜全血红细胞样本离心分离为2～6个不同密度层次，从而筛选出不同日龄的红细胞。而糖化血红蛋白(HbA1c)的百分比浓度和红细胞的寿命有关，红细胞的寿命越长，HbA1c的百分比浓度越大，反之浓度越小。据此可以得到不同HbA1c值的糖化血红蛋白质控品。优选地，红细胞保存液为含枸橼酸钠、枸橼酸、葡萄糖、腺嘌呤与磷酸二氢钠混合制成的灭菌水溶液。本专利技术技术方案对采集到的正常人的健康血液样本进行离心处理，将血浆和细胞分离，去除血浆后得到细胞混合物；在细胞混合物中加入红细胞保存液，模拟血液的环境，从而维持红细胞的生理活性；制备具有不同密度梯度的细胞分离液的分层液，将红细胞样本缓慢加入到分层液中，优选地，红细胞样本位于分层液的表层；离心后使得具有不同糖化血红蛋白浓度的红细胞分层，而后将其分装，加入生理盐水，调节血红蛋白浓度为120g/L，即正常人血液中血红蛋白的浓度，而后用日本爱科莱公司HA-8180全自动糖化血红蛋白分析仪进行检测，筛选得到HbA1c值为3～5％的红细胞悬浮液。本专利技术采用非连续密度梯度离心法获得不同HbA1c值的糖化血红蛋白质控品，方法简便，便于进行工业化生产。此外，制得的糖化血红蛋白质控品呈液态，能够消除瓶间差，提高采用该质控品的分析仪器的测量精度。筛选出HbA1c值为3～5％的红细胞悬浮液后，所述糖化血红蛋白质控品的制备方法还包括：向HbA1c值为3～5％的红细胞悬浮液添加缓冲液，进行溶血处理，获得HbA1c值为3～5％的溶液和分散于所述溶液的红细胞膜；离心，去除红细胞膜；向HbA1c值为3～5％的溶液加入冻干保护剂或稳定剂中的至少一种、并进行冻干或液体冰冻保存处理，获得所述糖化血红蛋白质控品。优选地，冻干保护剂或稳定剂为海藻糖、蔗糖、酪蛋白或动物血清白蛋白。本专利技术技术方案对红细胞悬浮液添加缓冲液进行溶血处理、加入冻干保护剂或稳定剂并进行冻干或液体冰冻保存，相较于红细胞悬浮液在2～8℃条件下仅能保存7天，有效延长液态糖化血红蛋白质控物或冻干复溶后的糖化血红蛋白质控物保存时间，方便用户使用。所述缓冲液中添加有表面活性剂。优选本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种糖化血红蛋白质控品的制备方法，其包括以下步骤：采集非糖尿病患者的血液样本，进行离心、去浆处理，得到红细胞；向所述红细胞中加入红细胞保存液，制得红细胞样本；配制密度不同的细胞分离液，根据密度由大到小，将细胞分离液依次加入至一离心管内，得到分层液；将所述红细胞样本缓慢加入到分层液，离心得到分层的红细胞，每一密度的细胞分离液中均分散有与其适配的红细胞；将所述分层的的红细胞分装于不同的试管内，向每一试管内加入生理盐水，得到红细胞悬浮液，调节所述红细胞悬浮液的血红蛋白浓度为120g/L，筛选出HbA1c值为3～5％的红细胞悬浮液，获得糖化血红蛋白质控品。

【技术特征摘要】
1.一种糖化血红蛋白质控品的制备方法，其包括以下步骤：采集非糖尿病患者的血液样本，进行离心、去浆处理，得到红细胞；向所述红细胞中加入红细胞保存液，制得红细胞样本；配制密度不同的细胞分离液，根据密度由大到小，将细胞分离液依次加入至一离心管内，得到分层液；将所述红细胞样本缓慢加入到分层液，离心得到分层的红细胞，每一密度的细胞分离液中均分散有与其适配的红细胞；将所述分层的的红细胞分装于不同的试管内，向每一试管内加入生理盐水，得到红细胞悬浮液，调节所述红细胞悬浮液的血红蛋白浓度为120g/L，筛选出HbA1c值为3～5％的红细胞悬浮液，获得糖化血红蛋白质控品。2.如权利要求1所述的糖化血红蛋白质控品的制备方法，其特征在于，筛选出HbA1c值为3～5％的红细胞悬浮液后，所述糖化血红蛋白质控品的制备方法还包括：向HbA1c值为3～5％的红细胞悬浮液添加缓冲液，进行溶血处理，获得HbA1c值为3～5％的溶液和分散于所述溶液的红细胞膜；离心，去除红细胞膜；向HbA1c值为3～5％的溶液加入冻干保护剂或稳定剂中的至少一种、并进行冻干或液体冰冻保存处理，获得所述糖化血红蛋白质控品。3.如权利要求2所述的糖化血红蛋白质控品的制备方法，其特征在于，所述缓冲液中添加有表面活性剂。4.如权利要求1所述的糖化血红蛋白质控品的制备方法，其特征在于，所述细胞分离液的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王荣光，
申请(专利权)人：深圳市雷诺华科技实业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44