本发明专利技术公开了一种高灵敏度孕中期唐氏综合症产前筛查试剂盒及其制备检测方法，所述试剂盒包括盒体，以及AFP和β-HCG包被板条、AFP和β-HCG标准品、AFP和β-HCG质控品、AFP和β-HCG酶结合物、标本稀释液、发光底物液、浓缩洗涤液等，制备方法包括制备AFP、β-HCG单克隆抗体包被板条，配制AFP、β-HCG标准品和质控品，制备AFP、β-HCG酶结合物，配制标本稀释液，配制发光底物液A和发光底物液B和配制浓缩洗涤液等步骤；本发明专利技术的优点在于：实现了孕中期唐氏综合症产前筛查的目的，与临床诊断符合率达99.7%以上，灵敏度高、特异性强，结果更准确可靠。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种产前筛查试剂盒，具体地说是一种高灵敏度孕中期唐氏综合症产前筛查试剂盒及其制备方法，属于产前筛查试剂盒领域。
技术介绍
唐氏综合症又称21-三体综合症或先天愚型(Down’s Syndrome, DS),是造成智力发展障碍的最常见的先天缺陷，它的发生率大约为1/750，其特征主要表现为严重的智力低下，智商多为20 60，只有同龄正常人的1/4 1/2，有小头、枕部扁平、项厚、眼裂小、外侧上斜、内眦深等症状，其发生具有偶然性、随机性，发生率会随孕妇年龄的增大而升高，该病目前没有有效的治疗方法，防止此类疾病发生所采取的办法，就是在怀孕期间进行产前筛查和必要的产前诊断，尽早发现并采取相应措施，目前，临床上产前诊断的方法主要采用绒 毛膜取样或者羊水穿刺来进行产前诊断，这些方法对于产前检出唐氏综合症胎儿，防止这类胎儿的出生起到了一定作用，但由于羊膜腔穿刺有一定的创伤性，可引起流产，且不可能直接的大范围的对所有孕妇用确诊的方法进行检测，另外还需要一定的技术设备条件、花费时间较长、费用较大，不可能在所有的孕妇中广泛开展。现在，还出现了应用单克隆抗体技术、酶标记技术和酶催化化学发光定量检测技术，来检测孕妇血清中的AFP和β -HCG，例如，名称为“孕中期唐氏综合症产前筛查试剂盒”申请号为“CN200610044608. X”的中国专利技术专利，然而，该试剂盒的缺点在于操作繁琐、制备方法复杂，而且灵敏度受到限制。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术设计了一种高灵敏度孕中期唐氏综合症产前筛查试剂盒及其制备方法，将酶催化化学发光定量检测技术应用到孕妇血清中AFP和β -HCG的检测，结合化学发光定量检测技术，实现孕中期唐氏综合症产前筛查的目的，与临床诊断符合率达99. 7%以上，比时间分辨荧光法和ELISA法的灵敏度高、特异性强，结果更准确可靠，实现了对孕妇及胎儿安全无创伤的产前筛查，具有较高的市场推广价值。孕中期唐氏综合症产前筛查由两个项目组成，分别是甲胎蛋白-AFP、人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位-HCG。本专利技术的技术方案为 一种高灵敏度孕中期唐氏综合症产前筛查试剂盒，包括盒体，以及设置在所述盒体内的AFP包被板条、AFP标准品、AFP质控品、AFP酶结合物、β -HCG包被板条、β -HCG标准品、β -HCG质控品、β -HCG酶结合物、标本稀释液、发光底物液Α、发光底物液B、浓缩洗涤液等。所述AFP包被板条和β -HCG包被板条，优选乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光酶标板包被板条；所述酶标板的各孔包被有固相化的AFP单克隆抗体和β-HCG单克隆抗体，上述单克隆抗体浓度优选lug/mL。所述AFP 标准品为浓度分别为0 ng/ml、2.5 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、40ng/ml的AFP标准溶液； 所述 β-HCG 标准品为浓度分别是0 mIU/ml、2.5 mIU/ml、5 mlU/mlUO mIU/ml、20mIU/ml、40 mlU/ml 的 β-HCG 标准溶液； 所述AFP质控品为浓度分别为5 ng/ml、20 ng/ml的AFP溶液； 所述β-HCG质控品为浓度分别为5 mIU/ml、20 mlU/ml的β-HCG溶液； 所述AFP酶结合物，为辣根过氧化物酶标记的AFP与包被板条配对的另一株单克隆抗体，双抗体夹心法需要一对抗体，一株用于包被，另一株用于标记，是针对蛋白不同表位的抗体，工作浓度为I: 1000 ； 所述β-HCG酶结合物，为辣根过氧化物酶标记的β-HCG与包被板条配对的另一株单克隆抗体，工作浓度为I: 1000 ； 所述标本稀释液为ρΗ=7. O的O. OlM的磷酸盐缓冲液(PBS)溶液，还含有体积分数10%小牛血清和O. 1%硫柳汞，硫柳汞用于防腐，小牛血清使所检测样本保持同样的基质； 所述浓缩洗涤液为含有体积分数分别为O. 05%的吐温20、O. 1%的硫柳汞的ρΗ=7. 5浓度O. lmol/L的磷酸盐缓冲液； 所述发光底物液A为每250ml溶液含有N，O-双三甲硅基乙酰胺(BSA)2. 5g、三羟甲基氨基甲烷(Tris) I. 5g、3-氨基邻苯二甲酰肼(鲁米诺)0. 05g、对位碘酚O. 0075g，另外还有极少量盐酸(每IOOOml底物液A加500μ1盐酸)，用作调节溶液的pH值至pH=9。所述发光底物液B为每250ml溶液含有BSA 2. 5g、Trisl. 5g、过氧化氢O. 25ml，另外还有极少量盐酸(每IOOOml底物液B加500μ1盐酸)，用作调节溶液的pH值至pH=9。另外，整个试剂盒内还包括用于固定包被板条的板架、防止潮湿的干燥剂、用于存放一次实验未用完板条的自封袋，以及用于实验时避光的封板膜。上述高灵敏度孕中期唐氏综合症产前筛查试剂的制备方法，包括以下步骤 (1)制备AFP、β-HCG单克隆抗体包被板条； (2)配制AFP、β-HCG标准品和质控品； (3)制备AFP、β-HCG酶结合物； (4)配制标本稀释液； (5)配制发光底物液A和发光底物液B； (6)配制浓缩洗涤液。本专利技术试剂盒中涉及的AFP、β -HCG标准品，酶标AFP、β -HCG抗体溶液(即AFP酶结合物和β -HCG酶结合物)，化学发光溶液(发光底物液A和发光底物液B)，包被液，封闭溶液(封闭板条时使用)，浓缩洗涤液及其配方对本专利技术试剂盒检测的灵敏度影响很大。所述AFP标准品的配制方法为以倍比稀释方法配制浓度分别为O ng/ml、2.5ng/ml >5 ng/ml、10 ng/ml >20 ng/ml >40ng/ml 的 AFP 标准溶液； 所述β-HCG标准品的配制方法为以倍比稀释方法配制浓度分别是0 mIU/ml、2.5mIU/ml、5 mIU/ml、10 mIU/ml、20 mIU/ml、40 mlU/ml 的 β-HCG 标准溶液。所述AFP酶结合物的配制方法为辣根过氧化物酶标记的AFP抗体溶液，使用时用酶稀释液配制成1:1000的工作浓度。所述β -HCG酶结合物配制方法为辣根过氧化物酶标记的β -HCG抗体溶液，使用时用酶稀释液配制成1:1000的工作浓度。上述酶稀释液为质量分数10%小牛血清+1%。Proclin 300+1% BSA,即IOOOml酶稀释液里含小牛血清100ml, Proclin Iml> BSA 10ml。 所述发光底物液A的配制方法为每250ml水溶液含有BSA (N, O-双三甲硅基乙酰胺)2. 5g、Trisl. 5g、鲁米诺O. 05g、对位碘酚O. 0075g,以及极少量盐酸调节溶液的pH值至 pH=9 ； 所述发光底物液B的配制方法为每250ml水溶液含有BSA 2. 5g、Trisl. 5g、过氧化氢O.25ml,以及极少量盐酸调节溶液的pH值至pH=9。所述浓缩洗涤液的配制方法为含有体积分数O. 05%吐温20的pH7. 5的O. I mo I/L磷酸盐缓冲液。所述包被液为板条包被工艺中所用的溶液，配制方法是将O. 34 g碳酸钠和O. 57g碳酸氢钠溶于IOOml水中，调节pH=9. 6。所述封闭溶液为包被板条工本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种高灵敏度孕中期唐氏综合症产前筛查试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括盒体，以及设置在所述盒体内的AFP包被板条、AFP标准品、AFP质控品、AFP酶结合物、β？HCG包被板条、β？HCG标准品、β？HCG质控品、β？HCG酶结合物、标本稀释液、发光底物液A、发光底物液B、浓缩洗涤液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨致亭，杨爱香，邱香廷，宋玉翠，
申请(专利权)人：潍坊市康华生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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