本发明专利技术涉及一种胶体金检测技术，尤其涉及一种间接标记的用于检测食物中药物残留的试剂盒及其使用方法，属于食品安全快速检测技术领域。一种检测食物中药物残留的试剂盒,包括检测板和金标微孔，检测板包括载体膜和胶体金结合垫，胶体金结合垫附着于载体膜上的一端，所述金标微孔上包被有单克隆抗体与胶体金的结合物；所述载体膜上设有检测区和质控区，检测区上固定有特异性结合抗原，质控区上固定有二抗。本发明专利技术采用间接方法标记不仅避免了特异性抗体的标记损伤，节省特异性抗体的用量，还能提高产品的特异性和灵敏度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种胶体金检测技术，尤其涉及一种间接标记的用于检测食物中药物残留的试剂盒及其使用方法，属于食品安全快速检测
技术介绍
目前，对于食物中药物残留的检测，例如，水产品中的呋喃唑酮的检测的方法，常见的有化学比色法、液相色谱法、酶联免疫法、胶体金法等。其中，前面三种方法存在一些缺陷，不能满足现场快速检测的要求，主要表现在化学比色法的干扰比较多导致特异性变差，检测的灵敏度也不高，达不到市场的要求；液相色谱法的特异性好，灵敏度也比较高，但是需要特殊的仪器设备，专业的操作人员，检测费用很高，检测所需时间也比较长，一般需 要隔天才能出检测结果，单个样本的检测费用基本都在2000左右，不适合广泛的推广；酶联免疫法需要使用酶标仪，需要专业的操作人员，操作时间比胶体金法要长2小时左右，不适合现场操作，费用也比胶体金法稍高，若检测样本较少，费用也将成倍高于胶体金法。胶体金法利用抗原与抗体的高度专一性特异反应来进行检测，具有高灵敏度和高特异性，操作过程简单，不需要使用特殊的仪器设备，所需时间较短，5 8分钟即可判读，事前需要进行样本处理的也能在2个小时内出结果，而且结果可用肉眼判读，适合现场检测，可以较好的实现我国食品安全领域快速、准确的检测要求。因为检测样本的原因，如水产品容易死亡，特别是在流通的环节，必须使用快速方法进行检测，以上数种方法中也只有免疫胶体金法能够满足要求。然而现有技术中，人们在使用胶体金法检测时，都是在单克隆抗体上用胶体金直接标记，不仅抗体用量大，且会导致被标记抗体的活性出现明显的下降，从而导致产品灵敏度降低。例如，申请号为200810224933. 3的中国专利技术专利，公开了一种检测禽流感的试纸条及其制备方法，该试纸条包括以下部分垫板、硝酸纤维素膜、两个结合垫和两片吸水滤纸，所述的硝酸纤维素膜含有金标记的AIV单克隆抗体、AIV血清和羊抗鼠IgG，所述的结合垫是含有脱脂酪蛋白、金标记的AIV单克隆抗体、AIV血清和羊抗鼠IgG的玻璃纤维膜。在使用该种方法时，就容易出现胶体金用量大，抗体活性降低的技术问题，从而导致灵敏度降低。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种间接标记的检测食物中药物残留的试剂盒。它具有检测灵敏度高的优点。本专利技术的上述目的可以通过以下技术方案得以实现的。一种检测食物中药物残留的试剂盒，包括检测板和金标微孔，检测板包括载体膜和胶体金结合垫，胶体金结合垫附着于载体膜上的一端，所述金标微孔上包被有单克隆抗体与胶体金的结合物；所述载体膜上设有检测区和质控区，检测区上固定有特异性结合抗原，质控区上固定有二抗； 所述单克隆抗体与胶体金的结合物具体为，胶体金标记在抗抗体上而所述抗抗体与单克隆抗体特异性结合，的一种结合物。本专利技术的上述目的还通过以下技术方案得以实现的。一种检测食物中药物残留的试剂盒，包括检测板，检测板包括载体膜和胶体金结合垫，胶体金结合垫附着于载体膜上的一端，所述胶体金结合垫上包被有单克隆抗体与胶体金的结合物；所述载体膜上设有检测区和质控区，检测区上固定有特异性结合抗原，质控区上固定有二抗； 所述单克隆抗体与胶体金的结合物具体为，胶体金标记在抗抗体上而所述抗抗体与单克隆抗体特异性结合，的一种结合物。 本专利技术采用的方法是胶体金免疫层析法，胶体金是一种负电荷的疏水胶，靠静电粒子相互排斥作用来维持稳定的胶体体系，直径从几纳米到几十纳米不等。由于不同直径的胶体金的光散射各异，所以其溶胶颜色的深浅相应发生显著的变化，这就是胶体金用于被动凝集试验的基础。同时由于胶体金金颗粒对蛋白质有很强的吸附功能，可与SPA，Igg，毒素、糖蛋白、酶、抗生素和激素等多种物质非共价结合，从而使其成为免疫反应的优良标记物。本专利技术所述单克隆抗体与胶体金的结合物，为胶体金标记在抗抗体上而所述抗抗体与单克隆抗体特异性结合，的一种结合物。而这种结构的结合物是采用间接标记的方法制备的。方法为不对目标抗体进行直接的标记，而采用标记抗抗体，然后把目标抗体加入标记抗抗体的胶体金溶液中。如要标记鼠抗AOZ-BSA抗体，不对该抗体直接进行标记，而采用标记羊抗鼠抗体，标记好以后，将鼠抗AOZ-BSA抗体加入标记好的羊抗鼠胶体金溶液，利用标记好的羊抗鼠溶液会和鼠源性抗体结合的特点，以达到对鼠抗AOZ-BSA抗体进行胶体金标记的目的。这样做的优点在于，标记过程中，抗体的效价会降低，因未对单抗进行标记，效价降低的只是羊抗鼠抗体，如果效价降低出现在单克隆抗体上，那么会降低灵敏度；而且因为效价降低，单抗的使用量必须增加，以保证检测时足够的显色指示，这也会导致产品灵敏度的降低。本专利技术采用间接标记法，标记在二抗上，如羊抗鼠IgG，此时效价降低的是羊抗鼠IgG，而单克隆抗体才是检测的关键，因此羊抗鼠效价的降低，并不会对结果产生影响，从而有效地提高了检测的灵敏度，同时还节省了单克隆抗体的用量。作为上述技术方案的优选，所述检测板还包括样品垫、吸水垫、载体板和背衬，所述载体膜附着在背衬上，背衬附着在载体板上；样品垫设在胶体金结合垫上，所述载体膜上相对于所述胶体金结合垫的另一端设有吸水垫。作为上述技术方案的优选，所述载体板采用塑料板，所述载体膜采用硝酸纤维素薄膜。本专利技术从一个创新角度出发，提供了两种技术方案的试剂盒。一种是具有金标微孔的，一种是没有金标微孔的。具有金标微孔的试剂盒，检测时，待检溶液先加入金标微孔中，反应后转移到检测板的样品垫上，样品溶液因载体膜的毛细管作用向另一端扩散。在移动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应，并通过免疫胶体金的颜色显示出来。如果样品溶液含有相应药物残留，药物将和胶体金颗粒上的抗体先行反应，因此当胶体金颗粒随样品溶液扩散至检测区时，胶体金颗粒上抗体的活性位点因被样品溶液中的药物占据而无法与检测区上特异性抗原结合；所以当样品中的药物含量超过试剂板检出限时，试剂板上的检测区将较质控区显色淡甚至无显色，判定为阳性。反之，当样品中药物含量在试剂板检出限以下或无残留时，试剂板上的检测区显色与质控区相近或偏深，判定为阴性。无金标微孔的试剂盒，其单克隆抗体与胶体金的结合物是包被在胶体金结合垫上的，使用时直接将待检溶液滴在样品垫上。然检测的判定方法以及检测的原理都是一致的。本专利技术的目的之二是提供一种检测食物中药物残留的试剂盒的使用方法。一种检测食物中药物残留的试剂盒的使用方法，它采用了具有金标微孔的试剂盒的技术方案中对待测样品进行检测，检测时将样品溶液滴加在金标微孔中，等待数分钟后，转移到检测板上，等待数分钟后，肉眼观察，若检测区较之质控区显色淡或无显色，判定为阳性，反之，判定为阴性。一种检测食物中药物残留的试剂盒的使用方法，它采用了无金标微孔的试剂盒的技术方案对待测样品进行检测，检测时将样品溶液滴加在检测板上，等待数分钟后，肉眼观 察，若检测区较之质控区显色淡或无显色，判定为阳性，反之，判定为阴性。作为上述技术方案的优选，所述样本处理是将样本组织中的药物萃取出来，然后进行稀释或浓缩的一种技术手段。有些样本可以通过简单的常规处理就能直接用于检测，而有些样本则不行，因此需要通过样本处理，把样本中的待检物质提取出来，从而达到检测目的。通过溶液配方的配比组合，使得不同样本间的差异最小化，同时，保证样本的前处理工艺具有本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测食物中药物残留的试剂盒,包括检测板和金标微孔，检测板包括载体膜和胶体金结合垫，胶体金结合垫附着于载体膜上的一端，其特征在于：所述金标微孔上包被有单克隆抗体与胶体金的结合物；所述载体膜上设有检测区和质控区，检测区上固定有特异性结合抗原，质控区上固定有二抗；所述单克隆抗体与胶体金的结合物具体为，胶体金标记在抗抗体上而所述抗抗体与单克隆抗体特异性结合，的一种结合物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周崇盈，查美兰，
申请(专利权)人：湖州艾维德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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