本发明专利技术公开了一种用于检测人血清中HER2含量的ELISA试剂盒、使用方法及用途。该试剂盒中包括HER2‑ECD标准抗原、抗HER2的捕获抗体和抗HER2的检测抗体；所述捕获抗体为人源化HuA21抗体(重链的氨基酸序列为序列1轻链的氨基酸序列为序列2)，所述检测抗体为经生物素标记的HerA抗体(重链的氨基酸序列为序列3，轻链的氨基酸序列为序列4)。本发明专利技术所提供的基于双抗夹心法检测人血清中HER2含量的酶联免疫试剂盒可实现对人血清中HER2含量的准确定量检测，该检测方法可以作为一种无创伤性、简便、迅速的诊断和监测HER2阳性肿瘤病程发展的方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术和医学领域，涉及一种用于检测人血清中HER2含量的ELISA试剂盒、使用方法及用途。
技术介绍
肿瘤是严重影响公众健康的主要疾病之一，其有效治疗依赖于对肿瘤的早期筛查与及时诊断。肿瘤标志物检测对肿瘤研究和临床治疗实践有着重大作用，已被广泛应用于肿瘤早期筛查、诊断、治疗、疗效评价及预后监测等。人表皮生长因子受体2(HER2)在乳腺癌、胃癌等多种肿瘤中高表达，目前检测肿瘤组织HER2表达水平已作为一个独立指标用于肿瘤的临床诊断和治疗。传统的HER2检测主要通过创伤性的肿瘤组织活检，使用免疫组化(IHC)和荧光原位杂交(FISH)等方法，但是这些方法不能检测手术治疗后患者或复发及转移性肿瘤患者体内的HER2水平。大量研究表明，HER2片段能从肿瘤细胞表面脱落进入血液，肿瘤病人血清中可溶性的HER2胞外区片段与肿瘤组织的HER2表达水平存在明显相关性。有高达50％以上的转移性乳腺癌患者血清中存在HER2水平升高现象(有研究显示大于某个阈值(如15ng/ml)即可提示肿瘤有进展)，且HER2血清水平及其变化趋势可用作肿瘤治疗效果的评价与预后评估指标。因此HER2血清水平检测在肿瘤诊断和治疗中有着重要的应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于检测人血清中HER2含量的ELISA试剂盒、使用方法及用途。本专利技术所提供的用于检测人血清中HER2含量的酶联免疫试剂盒，是一种基于双抗夹心法检测人血清中HER2含量的酶联免疫试剂盒，包括HER2-ECD标准抗原、抗HER2的捕获抗体(作为包被原)和抗HER2的检测抗体；所述捕获抗体为人源化HuA21抗体，所述检测抗体为经生物素标记的HerA抗体。所述人源化HuA21抗体的重链的氨基酸序列具体如序列表中序列1所示；所述人源化HuA21抗体的轻链的氨基酸序列具体如序列表中序列2所示。所述HerA抗体的重链的氨基酸序列具体如序列表中序列3所示；所述HerA抗体的轻链的氨基酸序列具体如序列表中序列4所示。所述HER2-ECD标准抗原的氨基酸序列具体如序列表中序列5所示。在本专利技术中，所述HER2-ECD标准抗原具体是通过将核苷酸序列如序列表中序列6所示的HER2-ECD基因在哺乳动物细胞中进行表达获得的。进一步，所述HER2-ECD基因是通过重组表达载体导入所述哺乳动物细胞的；所述重组表达载体具体是将pSecTag2A载体(Invitrogen公司)中的SfiI和NotI内切酶识别位点间的小片段替换为所述HER2-ECD基因后得到的重组表达载体(命名为pSecTag2A-HER2-ECD)。其中，所述哺乳动物细胞具体可为CHO细胞。更加具体的，所述HER2-ECD标准抗原是按照包括如下步骤的方法制备获得的：将所述pSecTag2A-HER2-ECD转入CHO细胞后，培养24小时，用选择培养基(含有0.3mg/mL Zeocin)筛选抗性克隆，将抗性克隆扩大培养，离心(8000rpm离心15分钟)，取上清过滤(过0.22μM滤膜)，将所得滤液进行Mabselect Sure亲和纯化，获得所述HER2-ECD标准抗原。其中，将所述滤液进行Mabselect Sure亲和纯化具体如下：将Mabselect Sure胶(GE公司)用PBS平衡后，上样所述滤液，先采用A液(20mM磷酸钠，500mM NaCl，pH5.0)预洗脱5个柱体积，再采用B液(20mM醋酸钠，150mM NaCl，pH3.5)洗脱5个柱体积，收集洗脱峰，然后30KDa浓缩离心管浓缩获得所述HER2-ECD标准抗原。在本专利技术中，所述人源化HuA21抗体具体是通过将等摩尔的核苷酸序列如序列表中序列7所示的人源化HuA21抗体的重链的编码基因和核苷酸序列如序列表中序列8所示的人源化HuA21抗体的轻链的编码基因在哺乳动物细胞中进行表达得到的。进一步，所述人源化HuA21抗体的重链的编码基因和所述人源化HuA21抗体的轻链的编码基因是分别通过重组表达载体1和重组表达载体2导入所述哺乳动物细胞的；所述重组表达载体1具体是将pSecTag2A载体(Invitrogen公司)中的SfiI和NotI内切酶识别位点间的小片段替换为所述人源化HuA21抗体的重链的编码基因(序列7)后得到的重组表达载体(命名为pSecTag2A-HuA21-1)；所述重组表达载体2具体是将pSecTag2A载体(Invitrogen公司)中的SfiI和NotI内切酶识别位点间的小片段替换为所述人源化HuA21抗体的轻链的编码基因(序列8)后得到的重组表达载体(命名为pSecTag2A-HuA21-2)。其中，所述哺乳动物细胞具体可为CHO细胞。更加具体的，所述人源化HuA21抗体是按照包括如下步骤的方法制备获得的：将等摩尔的所述pSecTag2A-HuA21-1和所述pSecTag2A-HuA21-2转入CHO细胞后，培养24小时，用选择培养基(含有0.3mg/mL Zeocin)筛选抗性克隆，将抗性克隆扩大培养，取培养上清先后进行Protein A亲和层析和S200分子筛层析，最后用30KDa超滤离心管浓缩，获得所述人源化HuA21抗体。在本专利技术中，所述HerA抗体具体是通过将等摩尔的核苷酸序列如序列表中序列9所示的HerA抗体的重链的编码基因和核苷酸序列如序列表中序列10所示的HerA抗体的轻链的编码基因在哺乳动物细胞中进行表达得到的。进一步，所述HerA抗体的重链的编码基因和所述HerA抗体的轻链的编码基因是分别通过重组表达载体3和重组表达载体4导入所述哺乳动物细胞的；所述重组表达载体3具体是将pSecTag2A载体(Invitrogen公司)中的SfiI和NotI内切酶识别位点间的小片段替换为所述HerA抗体的重链的编码基因(序列9)后得到的重组表达载体(命名为pSecTag2A-HerA-1)；所述重组表达载体4具体是将pSecTag2A载体(Invitrogen公司)中的SfiI和NotI内切酶识别位点间的小片段替换为所述HerA抗体的轻链的编码基因(序列10)后得到的重组表达载体(命名为pSecTag2A-HerA-2)。其中，所述哺乳动物细胞具体可为CHO细胞。更加具体的，所述HerA抗体是按照包括如下步骤的方法制备获得的：将等摩尔的所述pSecTag2A-HerA-1和所述pSecTag2A-HerA-2转入CHO细胞后，培养24小时，用选择培养基(含有0.3mg/mL Zeocin)筛选抗性克隆，将抗性克隆扩大培养，取培养上清先后进行Protein A亲和层析和S200分子筛层析，最后用30KDa超滤离心管浓缩，获得所述HerA抗体。在本专利技术中，所述检测抗体是按照包括如下步骤的方法制备获得的：将所述HerA抗体与活化的生物素按照摩尔比1：30混合，室温(25℃)放置半小时，随后过分子筛柱去除未结合的生物素，得到经生物素标记的HerA抗体即为所述检测抗体。除了上述物质，所述酶联免疫试剂盒中还可含有如下中的至少一种：96孔酶标板、铺板缓冲液、洗涤液、封闭液、辣根过氧化物酶标记亲和素、显色液和终止液。在本专利技术中，所述铺板缓冲液具体为pH为7.0的磷酸盐缓冲液。所述洗涤液具体为仅含有0.05％体积本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测人血清中HER2含量的酶联免疫试剂盒，包括HER2‑ECD标准抗原、抗HER2的捕获抗体和抗HER2的检测抗体；所述捕获抗体为人源化HuA21抗体，所述检测抗体为经生物素标记的HerA抗体。
【技术特征摘要】
1.一种用于检测人血清中HER2含量的酶联免疫试剂盒，包括HER2-ECD标准抗原、抗HER2的捕获抗体和抗HER2的检测抗体；所述捕获抗体为人源化HuA21抗体，所述检测抗体为经生物素标记的HerA抗体。2.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述人源化HuA21抗体的重链的氨基酸序列如序列表中序列1所示；所述人源化HuA21抗体的轻链的氨基酸序列如序列表中序列2所示；和/或所述HerA抗体的重链的氨基酸序列如序列表中序列3所示；所述HerA抗体的轻链的氨基酸序列如序列表中序列4所示；和/或所述HER2-ECD标准抗原的氨基酸序列如序列表中序列5所示。3.根据权利要求1或2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述HER2-ECD标准抗原是通过将核苷酸序列如序列表中序列6所示的HER2-ECD基因在哺乳动物细胞中进行表达获得的。4.根据权利要求1-3中任一所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述人源化HuA21抗体是通过将等摩尔的核苷酸序列如序列表中序列7所示的人源化HuA21抗体的重链的编码基因和核苷酸序列如序列表中序列8所示的人源化HuA21抗体的轻链的编码基因在哺乳动物细胞中进行表达得到的。5.根据权利要求1-4中任一所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述HerA抗体是通过将等摩尔的核苷酸序列如序列表中序列9所示的HerA抗体的重链的编码基因和核苷酸序列如序列表中序列10所示的HerA抗体的轻链的编码基因在哺乳动物细胞中进行表达得到的。6.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：程联胜，沈国栋，王凤荣，
申请(专利权)人：合肥瀚科迈博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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