本发明专利技术公开了抗4-1BB的单链抗体及其应用。本发明专利技术所提供的单链抗体的重链可变区中HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列依次如SEQ ID No.1自N端起第31-35位、第50-64位、第98-106位所示；轻链可变区中LCDR1、LCDR2和LHCDR3的氨基酸序列依次如SEQ ID No.1自N端起第156-166位、第182-188位、第221-229位所示。本发明专利技术所提供的单链抗体能结合人和猴4-1BB。本发明专利技术抗体在用作诊断工具检测癌症、自身免疫或其他疾病的患者的血液或组织中的4-1BB或作为免疫增强物或者免疫调节剂治疗疾病诸如癌症、自身免疫疾病、炎症疾病、和感染疾病等中将具有重要潜在应用价值。有重要潜在应用价值。
【技术实现步骤摘要】
抗4-1BB的单链抗体及其应用
[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及抗4-1BB的单链抗体及其应用。
技术介绍
[0002]4-1BB属肿瘤坏死因子(TNF)受体家族的成员，由肿瘤坏死因子受体超家族成员9(TNFRSF9)基因编码，由Kwon和Weissman在激活的鼠T细胞克隆分化筛选过程中首先发现。Schwarzh等从人活化T细胞中分离出与鼠4-1BB具同源性的人4-1BB，并将其命名为CD137。4-1BB是Ⅰ型膜糖蛋白，不同于PD-1/PD-L，4-1BB的表达具有激活依赖性，其介导T细胞活化的共刺激信号，广泛存在于免疫细胞包括激活的NK细胞、活化的T细胞、树突状细胞(DC)、单核细胞、肥大细胞、中性粒细胞表面。人的4-1BB具有255个氨基酸，以单体和二聚体形式表达于细胞表面，且易与配体形成三聚体，进而开启信号转导。
[0003]研究表明，4-1BB对维持免疫稳态具有重要作用，且对抗肿瘤免疫记忆至关重要。其介导的共刺激信号可增强T细胞的功能，提高T细胞对肿瘤细胞的监视和病毒感染的免疫防御作用。一些4-1BB激动剂抗体能够增加共刺激分子表达，并且显著增强T细胞免疫应答，引起抗肿瘤功效。利用配体4-1BBL或激活型4-1BB单抗激活4-1BB，可刺激T细胞和抗原提呈细胞增殖并分泌细胞因子，提高机体的抗肿瘤免疫应答水平。进一步的，4-1BB单一治疗和组合治疗肿瘤模型已经确定持久的抗肿瘤保护性T细胞记忆应答。与此同时，4-1BB激动剂在许多本领域认可的自身免疫模型中也已经显示抑制自身免疫反应。4-1BB信号途径可诱导体内CD4
+ T细胞介导的免疫耐受，阻止自身免疫性疾病的发生、发展。4-1BB这种双重活性提供了抗肿瘤活性，同时可减弱自身免疫副作用。
[0004]单链抗体(single chain antibody fragment，scFv)，是由抗体重链可变区和轻链可变区通过15～20个氨基酸的短肽(linker)连接而成的抗体。scFv能较好地保留其对抗原的亲和活性，并具有分子量小、穿透力强和抗原性弱等特点。单链抗体只有完整抗体的一条链，因此得名为单链抗体。单链抗体可去除非特异性反应的竞争性表面蛋白，肿瘤显象背景更加清晰性；易渗透肿瘤组织中增加药物治疗浓度；免疫源性小，可消除排异反应；在体内循环的半衰期短，易清除，利于解毒排出；易于与毒素或酶基因连接，便于直接获得免疫毒素或酶标抗体等。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的是提供一种抗4-1BB的单链抗体及其应用。
[0006]第一方面，本专利技术要求保护一种抗4-1BB的单链抗体。
[0007]本专利技术所要求保护的抗4-1BB的单链抗体，由重链可变区和轻链可变区连接而成；所述重链可变区中HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列依次如SEQ ID No.1自N端起第31-35位、第50-64位、第98-106位所示；所述轻链可变区中LCDR1、LCDR2和LHCDR3的氨基酸序列依次如SEQ ID No.1自N端起第156-166位、第182-188位、第221-229位所示。
[0008]进一步地，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No.1自N端起第1-117位，或者
与SEQ ID No.1自N端起第1-117位具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上、80％以上或者75％以上的一致性(不一致处优选在骨架区(FR))。所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No.1自N端起第133-239位，或者与SEQ ID No.1自N端起第133-239位具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上、80％以上或者75％以上的一致性(不一致处优选在骨架区(FR))。
[0009]更进一步地，所述单链抗体的氨基酸序列为SEQ ID No.1的第1-239位，或者与SEQ ID No.1的第1-239位具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上、80％以上或者75％以上的一致性(不一致处优选在骨架区(FR))。
[0010]第二方面，本专利技术要求保护前文所述单链抗体与载体蛋白形成的融合抗体。
[0011]在本专利技术的具体实施方式中，所述载体蛋白为Fc。
[0012]进一步地，所述融合抗体可以是任何类别，如IgG、IgM、IgE、IgA或IgD。优选4-1BB抗体是IgG类别，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚型，更优选IgG4亚型。
[0013]更进一步地，所述Fc的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第240-472位所示，或者与SEQ ID No.1自N端起第240-472位具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上、80％以上或者75％以上的一致性。
[0014]更加具体地，所述融合抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或者与SEQ ID No.1具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上、80％以上或者75％以上的一致性(不一致处优选在骨架区(FR))。
[0015]第三方面，本专利技术要求保护核酸分子。
[0016]本专利技术所要求保护的核酸分子编码前文所述的单链抗体或前文所述融合抗体。
[0017]本专利技术的核酸分子可以是DNA或RNA，可以包含或不包含内含子序列。优选的，所述核酸分子是cDNA分子。
[0018]进一步地，在所述核酸分子中，编码所述重链可变区中HCDR1、HCDR2和HCDR3的核苷酸序列依次如SEQ ID No.2自5
’
端起第91-105位、第148-192位、第292-318位所示；编码所述轻链可变区中LCDR1、LCDR2和LHCDR3的核苷酸序列依次如SEQ ID No.2自5
’
端起第466-498位、第544-564位、第661-687位所示。
[0019]更进一步地，在所述核酸分子中，编码所述重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID No.2自5
’
端起第1-351位或者与SEQ ID No.2自5
’
端起第1-351位具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上、80％以上或者75％以上的一致性(不一致处优选在骨架区(FR))。编码所述轻链可变区的核苷酸序列为SEQ ID No.2自5
’
端起第397-717位或者与SEQ ID No.2自5
’
端起第397-717位具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上、80％以上或者75％以上的一致性(不一致处优选在骨架区(FR))。
[0020]更加具体地，编码所述单链抗体的核苷酸序列为SEQ ID No.2自5
’
端起第1-717位或者与SEQ ID No2自5
’
端起第1-717位具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上、80％以上或者75％以上的一致性(不一致处优选在骨架区(FR))。
[0021]更加具体地，本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.抗4-1BB的单链抗体，由重链可变区和轻链可变区连接而成；所述重链可变区中HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列依次如SEQ ID No.1自N端起第31-35位、第50-64位、第98-106位所示；和/或所述轻链可变区中LCDR1、LCDR2和LHCDR3的氨基酸序列依次如SEQ ID No.1自N端起第156-166位、第182-188位、第221-229位所示。2.根据权利要求1所述的单链抗体，其特征在于：所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No.1自N端起第1-117位，或者与SEQ ID No.1自N端起第1-117位具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上、80％以上或者75％以上的一致性；和/或所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No.1自N端起第133-239位，或者与SEQ ID No.1自N端起第133-239位具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上、80％以上或者75％以上的一致性。3.根据权利要求1或2所述的单链抗体，其特征在于：所述单链抗体的氨基酸全序列如SEQ ID No.1的第1-239位所示，或者与SEQ ID No.1自N端起第1-239位具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上、80％以上或者75％以上的一致性。4.权利要求1-3中任一所述单链抗体与载体蛋白形成的融合抗体。5.根据权利要求4所述的融合抗体，其特征在于：所述载体蛋白为Fc；进一步地，所述融合抗体为IgG，如IgG4；更进一步地，所述Fc的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第240-472位所示，或者与SEQ ID No.1自N端起第240-472位具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上、80％以上或者75％以上的一致性；更加具体地，所述融合抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或者与SEQ ID No.1具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上、80％以上或者75％以上的一致性。6.核酸分子，其特征在于：所述核酸分子编码权利要求1-3中任一所述的单链抗体或权利要求4或5所述融合抗体。7.根据权利要求6所述的核酸分子，其特征在于：在所述核酸分子中，编码所述重链可变区中HCDR1、HCDR2和HCDR3的核苷酸序列依次如SEQ ID No.2自5
’
端起第91-105位、第148-192位、第292-318位所示；和/或在所述核酸分子中，编码所述轻链可变区中LCDR1、LCDR2和LHCDR3的核苷酸序列依次如SEQ ID No.2自5
’
端起第466-498位、第544-564位、第661-687位所示；进一步地，在所述核酸分子中，编码所述重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID No.2自5
’
端起第1...
【专利技术属性】
技术研发人员：程联胜，刘雯婷，张大艳，赵群，
申请(专利权)人：合肥瀚科迈博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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