抗CD19人源化抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种抗CD19人源化抗体及其制备方法与应用，该抗体含有人源化重链可变区VH和人源化轻链可变区VL，所述VH和VL均由决定簇互补区和框架区组成；所述VH和所述VL的决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；VH的CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
抗CD19人源化抗体及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种抗CD19人源化抗体及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]CD19是淋巴细胞表面的糖蛋白，从骨髓祖B淋巴细胞开始表达，直至B细胞成熟期，在浆细胞时消失。与B细胞活化，信号传导和生长调节有密切关系。广泛分布于B淋巴细胞的表面，是一种功能型的受体分子。此外，CD19还表达于恶性B细胞肿瘤，滤泡状树突细胞，急性髓系白血病细胞，非何杰金式淋巴瘤中。临床上常用CD19作为B淋巴细胞白血病及淋巴瘤的免疫分型，为临床诊断提供依据。急性B淋巴细胞性白血病中CD19高表达率达到100％，CD19蛋白作为治疗的靶标，在体外实验，动物模型，以及早期的临床阶段获得了较为理想的结果。随着CD19分子研究的深入，CD19蛋白的抗体研究在抗体药物及嵌合受体研究领域有广阔的应用前景。
[0003]鼠单克隆抗体被誉为神奇的子弹，从1975年问世以来，在诊断和治疗方面有广泛的应用。然而鼠源抗体在人体内会引起人抗鼠反应，产生毒性反应，同时也加快了抗体清除，影响抗体药效。为了解决这一问题，从上世纪80年代开始，先后发展了嵌合抗体，CDR区移植人源化抗体，全人源抗体的制备技术。(1)由于鼠源抗体的免疫反应约有90％是针对恒定，要降低鼠源抗体的抗原性，必须对抗体的恒定区进行人源化。将鼠源抗体的可变区与人源抗体的恒定区融合，获得人鼠的嵌合抗体。这一技术可以解决恒定区的抗原性问题，但仍然保留了鼠源抗体的可变区，仍然会有较强的抗原性。(2)为了进一步降低抗体的抗原性，将鼠源抗体的CDR区移植到同源的人源抗体骨架区，获得人源化程度更高的抗体。(3)随着噬菌体展示技术和转基因小鼠技术的出现，可以通过抗体库技术和杂交瘤技术获得全人源的抗体。将人的抗体基因插入噬菌体的基因组，可以获得展示人抗体基因的噬菌体抗体库，通过对抗体库的筛选，获得与特定靶分子结合的人源抗体。但由于所建立的抗体库为天然库，抗体缺少了体内亲和力成熟的过程，筛选得到的抗体亲和力较低，后期需要进一步亲和力成熟才能作为治疗应用。将人抗体基因转入小鼠，经过免疫后，可以获得全人源的抗体。但前期需要将大片段的人抗体基因组转入小鼠，小鼠改造周期较长。因此，将鼠源抗体通过人源化的方法，降低抗体的抗原性，同时保留抗体结合的特异性是治疗抗体开发的有效方式。
[0004]因此，如何成功开发一种抗CD19人源化抗体，降低抗体的抗原性，同时保留抗体结合的特异性，成为亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0005]为了解决所述技术问题，本专利技术提供了一种抗CD19人源化抗体及其制备方法与应用，可以特异性识别CD19蛋白，抗原性低，抗体结合的特异性高。
[0006]在本专利技术的第一方面，提供了一种抗CD19人源化抗体，所述抗CD19人源化抗体能特异性结合CD19抗原，所述抗CD19人源化抗体含有人源化重链可变区VH和人源化轻链可变
区VL，所述VH和VL均由决定簇互补区和框架区组成；所述VH和所述VL的决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；
[0007]所述VH的CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO.1
‑
SEQ ID NO.4中的一条；
[0008]所述VH的CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO.5
‑
SEQ ID NO.8中的一条；
[0009]所述VH的CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO.9
‑
SEQ ID NO.12中的一条；
[0010]所述VL的CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO.13
‑
SEQ ID NO.16中的一条；
[0011]所述VL的CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO.17
‑
SEQ ID NO.20中的一条；
[0012]所述VL的CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO.21
‑
SEQ ID NO.24中的一条。
[0013]进一步地，所述抗CD19人源化抗体包括以下CD19人源化抗体1
‑
4中的至少一种：
[0014]抗CD19人源化抗体1：所述VH的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.9所示；所述VL的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.21所示；
[0015]抗CD19人源化抗体2：所述VH的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.10所示；所述VL的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.18和SEQ ID NO.22所示；
[0016]抗CD19人源化抗体3：所述VH的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.11所示；所述VL的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.23所示；
[0017]抗CD19人源化抗体4：所述VH的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.12所示；所述VL的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.20和SEQ ID NO.24所示。
[0018]进一步地，所述抗CD19人源化抗体包括如下抗CD19人源化抗体的至少一种：
[0019]B5抗CD19人源化抗体：所述人源化重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：25所示，所述人源化轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：26所示；
[0020]F5抗CD19人源化抗体：所述人源化重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：27所示，所述人源化轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：28所示；
[0021]C1抗CD19人源化抗体：所述人源化重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示，所述人源化轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：30所示；
[0022]D12抗CD19人源化抗体：所述人源化重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示，所述人源化轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示。
[0023]进一步地，所述抗CD19人源化抗体还包括：所述抗CD19人源化抗体的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸得到的具有相同功能的抗体；和/或所述抗CD19人源化抗体的N端和/或C端连接标签得到的抗体。
[0024]在本专利技术的第二方面，提供了一种编码所述抗CD19人源化抗体的核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗CD19人源化抗体，其特征在于，所述抗CD19人源化抗体能特异性结合CD19抗原，所述抗CD19人源化抗体含有人源化重链可变区VH和人源化轻链可变区VL，所述VH和VL均由决定簇互补区和框架区组成；所述VH和所述VL的决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；所述VH的CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO.1
‑
SEQ ID NO.4中的一条；所述VH的CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO.5
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SEQ ID NO.8中的一条；所述VH的CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO.9
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SEQ ID NO.12中的一条；所述VL的CDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO.13
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SEQ ID NO.16中的一条；所述VL的CDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO.17
‑
SEQ ID NO.20中的一条；所述VL的CDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO.21
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SEQ ID NO.24中的一条。2.根据权利要求1所述的一种抗CD19人源化抗体，其特征在于，所述抗CD19人源化抗体包括以下CD19人源化抗体1
‑
4中的至少一种：抗CD19人源化抗体1：所述VH的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.9所示；所述VL的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.21所示；抗CD19人源化抗体2：所述VH的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.10所示；所述VL的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.18和SEQ ID NO.22所示；抗CD19人源化抗体3：所述VH的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.11所示；所述VL的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.23所示；抗CD19人源化抗体4：所述VH的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.12所示；所述VL的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.20和SEQ ID NO.24所示。3.根据权利要求1所述的一种抗CD19人源化抗体，其特征在于，所述抗CD19人源化抗体包括如下抗CD19人源化抗体的至少一种：B5抗CD19人源化抗体：所述人源化重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：25所示，所述人源化轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：26所示；F5抗CD19人源化抗体：所述人源化重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：27所示，...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗绍祥，杨旭，高霞，
申请(专利权)人：武汉华美生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：