人源化CD47抗体或其抗原结合片段及应用制造技术

本发明专利技术提供了人源化CD47抗体或其抗原结合片段及应用，低毒、高效，在体外未发生红细胞凝集，不会导致红细胞的清除。此外，本发明专利技术提供的人源化CD47抗体与血小板及红细胞表现出极弱水平的低结合或不结合，展现出于CD47+肿瘤细胞更加特异的靶向特异性。本发明专利技术提供的人源化CD47抗体或其抗原结合片段，在功能上能够有效地阻断CD47与SIRPα结合、激活介导巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬活性。对肿瘤细胞的吞噬活性。对肿瘤细胞的吞噬活性。

【技术实现步骤摘要】
人源化CD47抗体或其抗原结合片段及应用


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，具体涉及包括抗体
及免疫领域，更具体的涉及人源化CD47抗体或其抗原结合片段及应用。

技术介绍

[0002]CD47也被称为整合素相关蛋白(IntegrinAssociated Protein，IAP)，广泛的表达于细胞的表面，可与信号调节蛋白α(Signalregμlatoryproteinα，SIRPα)、血小板反应蛋白(thrombospondin
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1，TSP1)以及整合素(integrins)相互作用，介导细胞凋亡、增殖、免疫等一系列的反应。CD47在20世纪80年代首次被确认为人类卵巢癌的肿瘤抗原，继而CD47被发现在多种类型的人类肿瘤中表达，包括急性髓细胞白血病(AML)、慢性髓细胞白血病(CML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、非霍金性淋巴瘤(NHL)、多发性骨髓瘤(MM)、膀胱癌(BC)和其他实体肿瘤。它的表达和活性已经与许多疾病和失调相关联。它是一种广泛表达的跨膜糖蛋白，并带有一个免疫球蛋白样结构域和五个跨膜区，其作为SIRPα的细胞配体，通过信号调节蛋白α(SIRPα)的NH2末端的V样结构域与SIRPα结合。SIRPα主要表达于骨髓细胞，包括巨噬细胞，粒细胞，树突状细胞(DC)，肥大细胞，和它们的前体细胞，包括造血干细胞。
[0003]CD47是一个“自我”标记，代表“别吃我”信号。人体需要20
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30万亿的红细胞，以此保持氧气有效的运输到全身各处。红细胞的生命周期较短，仅有120天，每小时有100亿的红细胞生成，也有无数衰老的红细胞被巨噬细胞吞噬清除。然而巨噬细胞是如何区分年轻和衰老的红细胞，只进攻衰老红细胞的机理却不为人知。直到2000年，Oldenborg等人证实CD47是细胞表面一个重要的“self”标记，是调节巨噬细胞吞噬作用的一个重要信号。CD47可以与巨噬细胞表面SIRPα结合，磷酸化其ITIM，随后招募SHP
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1蛋白，产生一系列的级联反应抑制巨噬细胞的吞噬作用。年轻的红细胞表达较高的CD47向巨噬细胞释放“自己人，别吃我”的信号，而衰老的红细胞CD47下调，最终被巨噬细胞清除。
[0004]不同的研究表明，几乎所有的肿瘤细胞和组织都高表达CD47。肿瘤细胞表面高表达的CD47通过与巨噬细胞表面SIRPα结合，释放“不要吃我”的信号，导致肿瘤组织浸润区的巨噬细胞不但同肿瘤细胞和谐相处，而且还会通过促进肿瘤内血管增殖，抑制效应T细胞发挥作用，促进肿瘤细胞扩增和生长。多个研究表明在细胞水平上，通过阻断SIRPα
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CD47之间的相关作用可有效激活巨噬细胞对癌细胞的吞噬作用，在体内通过CD47抗体阻断SIRPα
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CD47之间的相关作用可有效的抑制肿瘤在小鼠体内的生长。
[0005]针对阻断SIRPα
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CD47信号通路已有多种抑制剂的研究报道，包括FortySevern公司的抗CD47单抗h5F9
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G1(US9382320B2)、Celgene公司的单抗CC9002(专利US9045541B2)、信达生物的单抗ADI
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26630(专利CN201710759828.9)、天境生物的单抗13H3/1F8(专利CN201780003451)等，此外还有TRILLIUMTHERAPEUTICS，INC.公司的双功能融合蛋白TTI
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621(专利US20150329616A1)、ALX公司的ALX148(专利US20160186150A1)等，目前处于临床PhaseI/II。临床初步结果显示与CD20联合治疗CD20复发或难治性滤泡性淋巴瘤(FL)及大B细胞淋巴瘤(DLBCL)取得了令人惊喜的疗效，ALX148联合Trastuzumab、Pembrolizumab在胃
IDNO：39和SEQ ID NO：40，SEQ ID NO：41和SEQ ID NO：42,SEQ ID NO：43和SEQ ID NO：44，SEQ ID NO：45和SEQ ID NO：46，SEQ ID NO：47和SEQ ID NO：48，SEQ ID NO：49和SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：49和SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：49和SEQ ID NO：54，SEQ ID NO：51和SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：51和SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：51和SEQ ID NO：54，SEQ ID NO：53和SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：53和SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：53和SEQ ID NO：54，SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：54，SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：54，SEQ ID NO：57和SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：57和SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：57和SEQ ID NO：54。序列如下表1所示：
[0012]表1.本专利技术示例人源化CD47抗体的VH和VL序列
[0013][0014][0015][0016][0017][0018][0019][0020][0021]在一些实施方案中，本专利技术所提供的人源化CD47抗体或其抗原结合片段，当按照Kabat编码规则对抗体HCDRs编码时，(1)HCDR1/HCDR2/HCDR3组合包含选自以下的一组或多组重链互补决定区HCDR的序列：HCDR1/HCDR2/HCDR3选自为SEQ ID NO:61/SEQ ID NO:62/SEQ ID NO:63，SEQ ID NO:67/SEQ ID NO:68/SEQ ID NO:69，SEQ ID NO:73/SEQ ID NO:74/SEQ ID NO:69，SEQ ID NO:77/SEQ ID NO:78/SEQ ID NO:79。(2)含有一处或多处不超过5个氨基酸的氨基酸取代、缺失或插入的上述(1)的HCDR。
[0022]在一些实施方案中，本专利技术所提供的人源化CD47抗体或其抗原结合片段，当按照Kabat编码规则对抗体LCDRs编码时，(1)LCDR1/LCDR2/LCDR3组合包含选自以下的一组或多组重链互补决定区LCDR的序列：LCDR1/LCDR2/LCDR3选自为SEQ ID NO:64/SEQ ID NO:65/SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:70/SEQ ID NO:71/SEQ ID NO:72，SEQ ID NO:70/SEQ ID NO:75/SEQ ID NO:76，SEQ ID NO:80/SEQ ID NO:81/SEQ ID NO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.人源化CD47抗体或其抗原结合片段，包括重链可变区VH序列和轻链可变区VL序列，所述VH序列与选自包括以下序列的组中的氨基酸序列具有至少98％的一致性：SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：19，SEQ ID NO：21，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：25，SEQ ID NO：27，SEQ ID NO：29，SEQ ID NO：31，SEQ ID NO：33，SEQ ID NO：35，SEQ ID NO：37，SEQ ID NO：39，SEQ ID NO：41，SEQ ID NO：43，SEQ ID NO：45，SEQ ID NO：47，SEQ ID NO：49，SEQ ID NO：51，SEQ ID NO：53，SEQ ID NO：55，SEQ ID NO：56，SEQ ID NO：57；所述VL序列与选自包括以下序列的组中的氨基酸序列具有至少98％的一致性：SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：28，SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：32，SEQ ID NO：34，SEQ ID NO：36，SEQ ID NO：38，SEQ ID NO：40，SEQ ID NO：42，SEQ ID NO：44，SEQ ID NO：46，SEQ ID NO：48，SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：54。2.根据权利要求1所述的人源化CD47抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包括：VH/VL序列对，所述的VH/VL序列对与选自包括以下序列对的组中的VH和VL氨基酸序列对具有至少98％的一致性：SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：27和SEQ ID NO：28，SEQ ID NO：29和SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：31和SEQ ID NO：32，SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：34，SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：36，SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：38，SEQ ID NO：39和SEQ ID NO：40，SEQ ID NO：41和SEQ ID NO：42,SEQ ID NO：43和SEQ ID NO：44，SEQ ID NO：45和SEQ ID NO：46，SEQ ID NO：47和SEQ ID NO：48，SEQ ID NO：49和SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：49和SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：49和SEQ ID NO：54，SEQ ID NO：51和SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：51和SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：51和SEQ ID NO：54，SEQ ID NO：53和SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：53和SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：53和SEQ ID NO：54，SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：54，SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：54，SEQ ID NO：57和SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：57和SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：57和SEQ ID NO：54。3.根据权利要求1所述的人源化CD47抗体或其抗原结合片段，其特征在于，当按照Kabat编码规则对抗体HCDRs编码时，(1)HCDR1/HCDR2/HCDR3组合包含选自以下的一组或多组重链互补决定区HCDR的序列：HCDR1/HCDR2/HCDR3选自为SEQ ID NO:61/SEQ ID NO:62/SEQ ID NO:63，SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：张崇骞，李虹侠，宗超，张楠，汤春，张晓霞，J，
申请(专利权)人：倍而达药业苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：