抗SIRPα抗体制造技术

本发明专利技术的目的在于提供一种可以用作肿瘤剂的抗SIRPα抗体，以及含有该抗体作为有效成分的抗肿瘤剂。本发明专利技术的抗体与人SIRPα特异性结合、阻断人SIRPα与CD47结合，所述抗体包含：(a)轻链CDRL1，其由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成；(b)轻链CDRL2，其由SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成；(c)轻链CDRL3，其由SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成；(d)重链CDRH1，其由SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成；(e)重链CDRH2，其由SEQ ID NO:5表示的氨基酸序列组成，以及(f)重链CDRH3，其由SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成；且重链恒定区是人IgG4的重链恒定区，根据Kabat等人的EU索引所示的234位的苯丙氨酸被替换为丙氨酸，235位的亮氨酸被替换为丙氨酸，进一步228位的丝氨酸被替换为脯氨酸。氨酸。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗SIRP
α
抗体


[0001]本专利技术涉及一种对肿瘤治疗有用的抗SIRPα抗体，以及含该抗体的抗肿瘤剂。

技术介绍

[0002]SIRPα(SHPS
‑
1)是Ig超家族的单次跨膜分子，其存在于巨噬细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞等髓细胞，以及神经胶质细胞中(非专利文献1)。细胞外区域由1个IgV结构域和2个IgC结构域构成，关于与CD47结合位点的IgV结构域，据报告在人中有10种变体(非专利文献2)。另一方面，细胞内区域包含免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine
‑
based inhibition motifs)(ITIM)，通过与CD47结合，诱导结合酪氨酸磷酸酶的SHP
‑
1和SHP
‑
2而传递抑制性的信号。
[0003]作为SIRPα
‑
CD47相互作用产生的生理现象，示出了红细胞上的CD47与巨噬细胞上的SIRPα结合并传递“别吃我”信号，以避免红细胞不必要的吞噬(非专利文献3)。另一方面，表明即使在肿瘤微环境下，在肿瘤细胞中高表达的CD47与巨噬细胞和树突细胞上的SIRPα结合，从而抑制对肿瘤细胞的吞噬作用。吞噬作用的抑制预计导致抑制随后肿瘤抗原呈递给T细胞，进一步抑制肿瘤免疫应答。因此，吞噬肿瘤细胞这样的免疫现象被认为相当于对肿瘤抗原摄取(进入)的检查点。
[0004]至今，报告了通过用针对作为SIRPα配体的CD47的抗体来阻断SIRPα
‑
CD47相互作用，从而增强了对肿瘤细胞的吞噬作用(非专利文献4)，抗SIRPα抗体在与具有吸引肿瘤细胞至免疫细胞的效应子活性的抗癌抗体联合使用的条件下也显示出相同的现象(非专利文献5和6)。此外，在使用抗CD47抗体的同种小鼠荷瘤模型中，表明不仅诱导抗肿瘤效果，还诱导肿瘤免疫(非专利文献7)，关于抗SIRPα抗体，也可以在抗癌抗体联合使用条件下期待相同的效果。
[0005]另一方面，作为免疫检查点阻断剂，开发出多种针对PD
‑
1/PD
‑
L1等T细胞上的免疫抑制性分子的抗体，在临床上其效果也得到验证(非专利文献8和9)。SIRPα
‑
CD47是现在被验证的唯一吞噬抑制分子，针对该分子的阻断抗体预计可以作为针对靶向T细胞以外的新检查点的阻断剂，对于对现有免疫检查点阻断剂有抵抗性的患者，也具有显示出有广泛效果的可能性。
[0006]至今，通过在使用抗小鼠SIRPα抗体(MY
‑
1)的人伯基特(Burkitt)淋巴瘤皮下移植模型中的研究，与利妥昔单抗(Rituximab)联合使用显示出抗肿瘤效果。此外，在小鼠结肠癌模型中，与PD
‑
1抗体联合使用确认到显示出抗肿瘤效果(非专利文献5)。除此之外，在使用克隆不同的抗mSIRPα抗体(P84)的研究中，在小鼠肝癌模型中，与抗PD
‑
L1抗体或抗4
‑
1BB抗体联合使用也确认到抗肿瘤效果和延长寿命效果。即使在显示出延长寿命效果的小鼠中再移植相同肿瘤细胞时，也可获得进一步的抗肿瘤效果、延长寿命效果，因此显示出通过阻断不同的免疫检查点，具有能够诱导强肿瘤免疫应答的可能性(专利文献1)。这些结果是不仅在与以往预想的具有效应子活性的抗癌抗体联合使用中，而且在与作为靶向T细胞的免疫检查点阻断剂联合使用中显示出联合使用效果的示例，即使在抗人SIRPα抗体中也能够
期待相同的效果。
[0007]近年来，各公司相继报告了抗SIRPα抗体相关的专利(专利文献1、2和3)。例如，OSE
‑
172是IgG4Pro型的抗体，显示出与SIRPα的V1型和SIRPβ1有结合性，但与SIRPα的V2型和SIRPγ没显示有结合性。KWAR23是IgG1N279A型的抗体，显示出与10种SIRPα变体及SIRPβ1和SIRPγ有结合性。ADU
‑
1805是IgG2型的抗体，显示出与10种SIRPα变体和SIRPγ有结合性。尚不清楚哪种抗体最适合作为药物，并且正在努力获得优异的抗体。
[0008]而且，在使用抗CD47抗体的研究中，报告了作为在除前述的抗体药物以外，与一直以来作为SOC(标准化治疗：Standard of Care)而广泛利用的化学治疗剂、放射线治疗联合使用，也显示出充分的抗肿瘤效果、延长寿命效果。尤其在与化学治疗剂的联合使用案例中，通过化学治疗剂的预给药，然后再进行抗CD47抗体给药，由此显示出比化学治疗剂和抗CD47抗体同时给药更强的抗肿瘤效果、延长寿命效果(非专利文献7)，显示出通过化学治疗剂的预给药而准备了容易摄取肿瘤抗原的环境，由此具有能够增强阻断SIRPα
‑
CD47相互作用引起的抗原摄取能力(免疫活化能力)效果的可能性。
[0009]根据以上所述，可以推测抗SIRPα抗体通过各种抗肿瘤剂联合使用，是可以诱导更强的肿瘤免疫应答的药剂。
[0010]现有技术文献
[0011]专利文献
[0012]专利文献1：国际公布第WO2017/178653号
[0013]专利文献2：国际公布第WO2018/026600号
[0014]专利文献3：国际公布第WO2018/190719号
[0015]非专利文献
[0016]非专利文献1：Matozaki et al.Trends in cell biol.2009(19)2,72
‑
80
[0017]非专利文献2：Takenaka et al.Nat Immunol.2007(8)12,1313
‑
1323
[0018]非专利文献3：Matozaki et al.Trends in cell biol.2009(19)2,72
‑
80
[0019]非专利文献4：Liu et al.Plos One,2015(10)9
[0020]非专利文献5：Yanagita et al.JCI Insight,2017(2)1,1
‑
15
[0021]非专利文献6：Ring et al.PNAS,2017(114)49,E10578
‑
E10585
[0022]非专利文献7：Liu et al,Nat Med.2015(21)10,1209
‑
1215
[0023]非专利文献8：Lee et al.The Oncologist,2017(22)11,1392
‑
1399
[0024]非专利文献9：Weinstock et al.Clin Can Res.2017(23)16,4534
‑
4539

技术实现思路

[0025]专利技术所要解决的问题
[0026]本专利技术的目的在于提供本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种与人SIRPα特异性结合、阻断人SIRPα与CD47结合的抗体，其包含：(a)轻链CDRL1，其由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成；(b)轻链CDRL2，其由SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成；(c)轻链CDRL3，其由SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成；(d)重链CDRH1，其由SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成；(e)重链CDRH2，其由SEQ ID NO:5表示的氨基酸序列组成，以及(f)重链CDRH3，其由SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成。2.根据权利要求1所述的抗体，其中，重链恒定区是人IgG4的重链恒定区，包含使ADCC和/或ADCP活性降低的突变。3.根据权利要求1或2所述的抗体，其中，重链恒定区是人IgG4的重链恒定区，根据Kabat等人的EU索引所示的234位的苯丙氨酸被替换为丙氨酸，235位的亮氨酸被替换为丙氨酸，进一步228位的丝氨酸被替换为脯氨酸。4.根据权利要求3所述的抗体，其中，重链恒定区的氨基酸序列是由SEQ ID NO:25的第140～466位氨基酸残基组成的氨基酸序列。5.一种与人SIRPα特异性结合、阻断人SIRPα与CD47结合的抗体，其包含：(ai)由如下氨基酸序列组成的轻链可变区，所述氨基酸序列由SEQ ID NO:23的第21～126位氨基酸残基组成，或者(aii)由如下氨基酸序列组成、具有与人SIRPα的结合活性的轻链可变区，所述氨基酸序列与由SEQ ID NO:23的第21～126位氨基酸残基组成的氨基酸序列具有95％以上的序列同一性，以及(bi)由如下氨基酸序列组成的重链可变区，所述氨基酸序列由SEQ ID NO:25的第20～139位氨基酸残基组成，或者(bii)由如下氨基酸序列组成、具有与人SIRPα的结合活性的重链可变区，所述氨基酸序列与由SEQ ID NO:25的第20～139位氨基酸残基组成的氨基酸序列具有95％以上的序列同一性，所述抗体中，重链恒定区是人IgG4的重链恒定区，包含使ADCC和/或ADCP活性降低的突变。6.根据权利要求5所述的抗体，其中，重链恒定区是人IgG4的重链恒定区，根据Kabat等人的EU索引所示的234位的苯丙氨酸被替换为丙氨酸，235位的亮氨酸被替换为丙氨酸，进一步228位的丝氨酸被替换为脯氨酸。7.根据权利要求6所述的抗体，其中，重链恒定区的氨基酸序列是由SEQ ID NO:25的第140～466位氨基酸残基组成的氨基酸序列。8.一种与人SIRPα特异性结合、阻断人SIRPα与CD47结合的抗体，其包含：(a)轻链CDRL1，其由SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成；(b)轻链CDRL2，其由SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成；(c)轻链CDRL3，其由SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成；(d)重链CDRH1，其由SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成；(e)重链CDRH2，其由SEQ ID NO:11表示的氨基酸序列组成，以及(f)重链CDRH3，其由SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成。
9.根据权利要求8所述的抗体，其中，重链恒定区是人IgG4的重链恒定区，包含使ADCC和/或ADCP活性降低的突变。10.根据权利要求8或9所述的抗体，其中，重链恒定区是人IgG4的重链恒定区，根据Kabat等人的EU索引所示的234位的苯丙氨酸被替换为丙氨酸，235位的亮氨酸被替换为丙氨酸，进一步228位的丝氨酸被替换为脯氨酸。11.根据权利要求10所述的抗体，其中，重链恒定区的氨基酸序列是由SEQ ID NO:29的第139～465位氨基酸残基组成的氨基酸序列。12.一种与人SIRPα特异性结合、阻断人SIRPα与CD47结合的抗体，其包含：(ai)由如下氨基酸序列组成的轻链可变区，所述氨基酸序列由SEQ ID NO:27的第21～127位氨基酸残基组成，或者(aii)由如下氨基酸序列组成、具有与人SIRPα的结合活性的轻链可变区，所述氨基酸序列与由SEQ ID NO:27的第21～127位氨基酸残基组成的氨基酸序列具有95％以上的序列同一性，以及(bi)由如下氨基酸序列组成的重链可变区，所述氨基酸序列由SEQ ID NO:29的第20～138位氨基酸残基组成，或者(bii)由如下氨基酸序列组成、具有与人SIRPα的结合活性的重链可变区，所述氨基酸序列与由SEQ ID NO:29的第20～138位氨基酸残基组成的氨基酸序列具有95％以上的序列同一性，所述抗体中，重链恒定区是人IgG4的重链恒定区，包含使ADCC和/或ADCP活性降低的突变。13.根据权利要求12所述的与人SIRPα特异性结合、阻断人SIRPα与CD47结合的抗体，其中，重链恒定区是人IgG4的重链恒定区，根据Kabat等人的EU索引所示的234位的苯丙氨酸被替换为丙氨酸，235位的亮氨酸被替换为丙氨酸，进一步228位的丝氨酸被替换为脯氨酸。14.根据权利要求13所述的抗体，其中，重链恒定区的氨基酸序列是由SEQ ID NO:29的第139～465位氨基酸残基组成的氨基酸序列。15.一种与人SIRPα特异性结合、阻断人SIRPα与CD47结合的抗体，其包含：(a)轻链CDRL1，其由SEQ ID NO:13表示的氨基酸序列组成；(b)轻链CDRL2，其由SEQ ID NO:14表示的氨基酸序列组成；(c)轻链CDRL3，其由SEQ ID NO:15表示的氨基酸序列组成；(d)重链CDRH1，其由SEQ ID NO:16表示的氨基酸序列组成；(e)重链CDRH2，其由SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列组成，以及(f)重链CDRH3，其由SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列组成。16.根据权利要求15所述的抗体，其中，重链恒定区是人IgG4的重链恒定区，包含使ADCC和/或ADCP活性降低的突变。17.根据权利要求15或16所述的抗体，其中，重链恒定区是人IgG4的重链恒定区，根据Kabat等人的EU索引所示的234位的苯丙氨酸被替换为丙氨酸，235位的亮氨酸被替换为丙氨酸，进一步228位的丝氨酸被替换为脯氨酸。18.根据权利要求17所述的抗体，其中，重链恒定区的氨基酸序列是由SEQ ID NO:33的第144～470位氨基酸残基组成的氨基酸序列。
19.一种与人SIRPα特异性结合、阻断人SIRPα与CD47结合的抗体，其包含：(ai)由如下氨基酸序列组成的轻链可变区，所述氨基酸序列由SEQ ID NO:31的第21～130位氨基酸残基组成，或者(aii)由如下氨基酸序列组成、具有与人SIRPα的结合活性的轻链可变区，所述氨基酸序列与由SEQ ID NO:31的第21～130位氨基酸残基组成的氨基酸序列具有95％以上的序列同一性，以及(bi)由如下氨基酸序列组成的重链可变区，所述氨基酸序列由SEQ ID NO:33的第20～143位氨基酸残基组成，或者(bii)由如下氨基酸序列组成、具有与人SIRPα的结合活性的重链可变区，所述氨基酸序列与由SEQ ID NO:33的第20～143位氨基酸残基组成的氨基酸序列具有95％以上的序列同一性，所述抗体中，重链恒定区是人IgG4的重链恒定区，包含使ADCC和/或ADCP活性降低的突变。20.根据权利要求19所述的与人SIRPα特异性结合、阻断人SIRPα与CD47结合的抗体，其中，重链恒定区是人IgG4的重链恒定区，根据Kabat等人的EU索引所示的234位的苯丙氨酸被替换为丙氨酸，235位的亮氨酸被替换为丙氨酸，进一步228位的丝氨酸被替换为脯氨酸。21.根据权利要求20所述的抗体，其中，重链恒定区的氨基酸序列是由SEQ ID NO:33的第1...

【专利技术属性】
技术研发人员：的崎尚，须江真由美，中村健介，吉村千草，
申请(专利权)人：第一三共株式会社，
类型：发明
国别省市：