抗体－药物偶联物及其制造方法、药物组合物及其在制备治疗肿瘤的药物中的应用技术

本发明专利技术提供一种抗体－药物偶联物及其制造方法、药物组合物及其在制备治疗肿瘤的药物中的应用。一种抗体－药物偶联物，其由下式表示。式中，m1表示整数1～10，Ab表示抗体或该抗体的功能性片段，该抗体为与CLDN6和/或CLDN9结合的抗体，该抗体的糖链可被重构，L表示连接Ab和D的连接子，D表示药物。D表示药物。D表示药物。D表示药物。

【技术实现步骤摘要】
抗体－药物偶联物及其制造方法、药物组合物及其在制备治疗肿瘤的药物中的应用
[0001]本申请是下述申请的分案申请：
[0002]专利技术名称：抗体－吡咯并苯并二氮杂卓衍生物偶联物。
[0003]国际申请日：2018年9月28日。
[0004]国际申请号：PCT/JP2018/036252。
[0005]国家申请号：201880063626.3。


[0006]本专利技术涉及一种作为抗肿瘤药而有用的抗体－药物偶联物，其是经由连接子结构部分将能够以肿瘤细胞为靶点的抗体与吡咯并苯并二氮杂卓衍生物结合而成的。

技术介绍

[0007]抗体－药物偶联物(Antibody－Drug Conjugate；ADC)是使抗体与具有细胞毒活性的药物结合而成的，所述抗体与在癌细胞表面表达的抗原结合，且通过该结合能使抗原在细胞中内化。ADC由于能高效地递送药物至癌细胞，由此可期待使癌细胞内蓄积药物，从而杀死癌细胞。
[0008]作为ADC，例如在抗CD30单克隆抗体上结合单甲基澳瑞他汀E(monomethyl auristatin E)而成的ADCETRIS(商标)(Brentuximab vedotin，本妥昔单抗)已经被作为霍奇金淋巴瘤和未分化大细胞淋巴瘤的治疗药而批准。另外，在抗HER2单克隆抗体上结合美坦新(emtansine)而成的KADCYLA(商标)(曲妥珠单抗美坦新(Trastuzumab emtansine))用于HER2阳性晚期、复发性乳腺癌的治疗中。
[0009]作为与ADC结合的有效药物之一，可举出吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)。PBD通过与DNA小沟的PuGPu序列等结合而显示细胞毒性。作为来自天然的PBD的anthramycin(安曲霉素)在1965年被首次发现，在那之后各种各样的来自天然的PBD或其类似物的PBD被发现(非专利文献1～4)。
[0010]PBD的通式如下式所示。
[0011][0012]已知PBD在A、C环上的取代基的数量、种类、取代部位均不相同，以及在B、C环上的不饱和度分别不同。
[0013]已知PBD通过形成二聚物结构可大幅度提高细胞毒性(非专利文献5、6)，也有将二聚物PBD进行ADC化的ADC体的各种报告(专利文献1～13)。但是，在C2位具有螺环的PBD或其ADC体是未知的。
[0014]人CLDN6(Claudin－6、以下记为hCLDN6)是Claudin(CLDN)家族蛋白质的一种，是
包含220个氨基酸残基的四次跨膜型膜蛋白质。在这之前有下述启示：hCLDN6在部分癌症中过度表达，是具有吸引力的癌治疗靶点(非专利文献7～9)。另外，还报告了CLDN家族蛋白质因胞吞作用(endocytosis)被吞入细胞内，是代谢回转(turnover)时间短的家族蛋白质(非专利文献10)，因此认为适合作为抗体药物复合体(ADC)的靶点。
[0015]基于这些与癌症有关联性的启示信息，目前为止报道过对hCLDN6特异性识别的单克隆抗体(专利文献14、15)，在CLDN6特异性的单克隆抗体上结合微管蛋白聚合抑制药Monomethyl auristatinE(MMAE，单甲基澳瑞他汀E)、Maytansinoid(DM1，美登素)的ADC(非专利文献11)。
[0016]另一方面，认为识别多个CLDN家族的抗体可扩大治疗的适应症范围，因而也公开有使识别CLDN6和CLDN9的抗体(专利文献16)与具有强力的杀细胞效果的吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)结合的ADC(专利文献17)。
[0017]然而，它们的活性强度还不够，以hCLDN6作为治疗靶点的医疗需求还有待满足。
[0018]现有技术文献
[0019]专利文献
[0020]专利文献1：国际公开第2013/173496号
[0021]专利文献2：国际公开第2014/130879号
[0022]专利文献3：国际公开第2017/004330号
[0023]专利文献4：国际公开第2017/004025号
[0024]专利文献5：国际公开第2017/020972号
[0025]专利文献6：国际公开第2016/036804号
[0026]专利文献7：国际公开第2015/095124号
[0027]专利文献8：国际公开第2015/052322号
[0028]专利文献9：国际公开第2015/052534号
[0029]专利文献10：国际公开第2016/115191号
[0030]专利文献11：国际公开第2015/052321号
[0031]专利文献12：国际公开第2015/031693号
[0032]专利文献13：国际公开第2011/130613号
[0033]专利文献14：国际公开第2009/087978号
[0034]专利文献15：国际公开第2011/057788号
[0035]专利文献16：国际公开第2015/069794号
[0036]专利文献17：国际公开第2017/096163号
[0037]非专利文献
[0038]非专利文献1：Julia Mantaj,et al.,Angewandte Chemie Internationl Edition2016,55,2
‑
29
[0039]非专利文献2：Dyeison Antonow.et al.,Chemical Reviews 2010,111,2815
‑
2864
[0040]非专利文献3：In Antibiotics III.Springer Verlag,New York,pp.3
‑
11
[0041]非专利文献4：Accounts of Chemical Research 1986,19,230
[0042]非专利文献5：Journal of the American Chemical Society 1992,114,4939
[0043]非专利文献6：Journal of Organic Chemistry 1996,61,8141
[0044]非专利文献7：BMC Cancer，2006,6,186.
[0045]非专利文献8：Histopatholody,2012,61,1043
‑
1056.
[0046]非专利文献9：Int J Cancer,2014,135,2206
‑
2214.
[0047]非专利文献10：J Membrane Biol,2004,199,29
‑
38.
[0048]非专利文献11：14th Annu Meet Cancer Immunother(CIMT)(May 10
‑
12,Mainz)2016,Abst 185<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体－药物偶联物，其由下式表示：式中，m1表示整数1～10，Ab表示抗体或该抗体的功能性片段，该抗体为与CLDN6和/或CLDN9结合的抗体，该抗体的糖链可被重构，L表示连接Ab和D的连接子，Ab可从其氨基酸残基直接与L结合，也可从Ab的糖链或重构的糖链与L结合，D表示下式所示的药物，式中，星号表示与L结合，n1表示整数2～8，A表示可被1～4个卤素原子取代的螺环键合的3～5元饱和烃环或3～5元饱和杂环，R1以及R2分别独立地表示C1～C6烷氧基、C1～C6烷基、氢原子、羟基、硫醇基、C1～C6烷硫基、卤素原子或－NR'R”，在此，R'及R”分别独立地表示氢原子或C1～C6烷基，R3、R4以及R5选自下述(i)～(iii)：(i)R3以及R4一起与各基团所结合的碳原子一起形成双键，R5表示可具有选自组1中的1个或多个取代基的芳基或杂芳基，或可具有选自组2中的1个或多个取代基的C1～C6烷基；(ii)R3表示氢原子，R4及R5与R4及R5所结合的碳原子一起形成3～5元饱和烃环或者3～5元饱和杂环或CH2＝；(iii)R3、R4及R5与R3所结合的碳原子以及R4及R5所结合的碳原子一起形成可具有选自组3中的1个或多个取代基的苯环或6元杂环，R6以及R7都表示氢原子，或者R6以及R7一起表示亚胺键(C＝N)，R8为羟基或C1～C3烷氧基，X以及Y分别独立地表示氧原子、氮原子或硫原子，组1表示：a)可被1～3个卤素原子取代的C1～C6烷氧基，b)可被1～3个选自卤素原子、羟基、－OCOR'、－NR'R”、－C(＝NR')－NR”R”'以及－NHC(＝NR')－NR”R”'中的任意一个取代的C1～C6烷基，c)卤素原子，d)C3～C5环烷氧基，e)C1～C6烷硫基，f)－NR'R”，g)－C(＝NR')－NR”R”'，
h)－NHC(＝NR')－NR”R”'，i)－NHCOR'，或j)羟基，在此，R'以及R”如前面定义所述，R”'分别独立地表示氢原子或C1～C6烷基，组2表示：卤素原子、羟基、或C1～C6烷氧基，并且，组3表示：卤素原子、或可被1～3个卤素原子取代的C1～C6烷基或者C1～C6烷氧基。2.根据权利要求1所述的抗体－药物偶联物，其中，A表示可被1～2个卤素原子取代的螺环键合的3～5元饱和烃环，R1以及R2分别独立地表示C1～C3烷氧基，R3以及R4一起与各基团所结合的碳原子一起形成双键，R5表示可具有选自组4中的1个或多个取代基的芳基或杂芳基，或者可具有选自组5中的1个或多个取代基的C1～C3烷基，X以及Y为氧原子，组4表示：a)可被1～3个卤素原子取代的C1～C3烷氧基，b)可被1～3个选自卤素原子、羟基、－OCOR”、－C(＝NR
’
)－NR”R
”’
、以及－NHC(＝NR
’
)－NR”R
”’
中的任意一个取代的C1～C3烷基，c)C3～C5环烷氧基，d)－C(＝NR')－NR”R”'，e)－NHC(＝NR')－NR”R”'，或f)羟基，在此，R'、R”及R”'分别独立地表示氢原子或C1～C3烷基，并且，组5表示：卤素原子、羟基、或C1～C3烷氧基。3.根据权利要求1所述的抗体－药物偶联物，其中，A表示可被1～2个卤素原子取代的螺环键合的3～5元饱和烃环，R1以及R2分别独立地表示C1～C3烷氧基，R3表示氢原子，R4以及R5与R4以及R5所结合的碳原子一起形成3～5元饱和烃环或＝CH2，并且，X以及Y为氧原子。4.根据权利要求1所述的抗体－药物偶联物，其中，A表示可被1～2个卤素原子取代的螺环键合的3～5元饱和烃环，R1以及R2分别独立地表示C1～C3烷氧基，R3、R4及R5与R3所结合的碳原子以及R4及R5所结合的碳原子一起，形成可具有选自组6中的1个或多个取代基的苯环，X以及Y为氧原子，并且，组6表示：卤素原子、或可被1～3个卤素原子取代的C1～C3烷基或C1～C3烷氧基。5.根据权利要求1或2所述的抗体－药物偶联物，其中，D由以下的2个化学式中的任意一个表示，
式中，星号表示与L结合。6.根据权利要求1或3所述的抗体－药物偶联物，其中，D由以下的2个化学式中的任意一个表示，式中，星号表示与L结合。7.根据权利要求1～6中任一项所述的抗体－药物偶联物，其中，L以－Lb－La－Lp－NH－B－CH2－O(C＝O)－＊表示，式中，星号表示与D结合，B表示苯基或杂芳基，Lp表示在靶细胞中能够切断的由氨基酸序列形成的连接子，La表示选自以下的组中的任意一个：－C(＝O)－(CH2CH2)n2－C(＝O)－，－C(＝O)－(CH2CH2)n2－C(＝O)－NH－(CH2CH2)n3－C(＝O)－，－C(＝O)－(CH2CH2)n2－C(＝O)－NH－(CH2CH2O)n3－CH2－C(＝O)－，－C(＝O)－(CH2CH2)n2－NH－C(＝O)－(CH2CH2O)n3－CH2CH2－C(＝O)－，以及－(CH2)n4－O－C(＝O)－，n2表示整数1～3，n3表示整数1～5，n4表示整数0～2，Lb表示将La与Ab的糖链或重构的糖链结合的间隔子。8.根据权利要求7所述的抗体－药物偶联物，其中，B为选自1，4－苯基、2，5－吡啶基、3，6－吡啶基、2，5－嘧啶基、2，5－噻吩基中的任意一种。9.根据权利要求8所述的抗体－药物偶联物，其中，B为1，4－苯基。10.根据权利要求7～9中任一项所述的抗体－药物偶联物，其中，Lp为由2～7个氨基酸形成的氨基酸残基。11.根据权利要求7～10中任一项所述的抗体－药物偶联物，其中，Lp为由选自甘氨酸、缬氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、丝氨酸、赖氨酸以及天冬氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基。12.根据权利要求7～11中任一项所述的抗体－药物偶联物，其中，Lp选自以下的组：－GGVA－、－GG－(D－)VA－、－VA－、－GGFG－、－GGPI－、－GGVCit－、－GGVK－、－GG(D－)PI－、以及－GGPL－。13.根据权利要求7～12中任一项所述的抗体－药物偶联物，其中，La选自以下的组：－C(＝O)－CH2CH2－C(＝O)－，－C(＝O)－(CH2CH2)2－C(＝O)－，
－C(＝O)－CH2CH2－C(＝O)－NH－(CH2CH2)2－C(＝O)－，－C(＝O)－CH2CH2－C(＝O)－NH－(CH2CH2O)2－CH2－C(＝O)－，－C(＝O)－CH2CH2－NH－C(＝O)－(CH2CH2O)4－CH2CH2－C(＝O)－，－CH2－OC(＝O)－，以及－OC(＝O)－。14.根据权利要求7～13中任一项所述的抗体－药物偶联物，其中，Lb由下式表示：或者或者或者或者，或者，在上述所示的Lb的结构式中，星号表示与La结合，波浪线表示与Ab的糖链或重构的糖链结合。15.根据权利要求7～14中任一项所述的抗体
‑
药物偶联物，其中，L以
‑
Lb
‑
La
‑
Lp
‑
NH
‑
B
‑
CH2‑
O(C＝O)
‑
＊表示，式中，B为1，4
‑
苯基，Lp表示选自以下的组中的任意一个：
‑
GGVA
‑
、
‑
GG一(D
‑
)VA
‑
、
‑
VA
‑
、
‑
GGFG
‑
、
‑
GGPI
‑
、一GGVCit
‑
、
‑
GGVK
‑
、以及
‑
GGPL
‑
，La表示选自以下的组中的任意一个：
‑
C(＝O)
‑
CH2CH2一C(＝O)
‑
、一C(＝O)
‑
(CH2CH2)2‑
C(＝O)
‑
、
‑
C(＝O)
‑
CH2CH2‑
C(＝O)
‑
NH
‑
(CH2CH2)2‑
C(＝O)
‑
、
‑
C(＝O)
‑
CH2CH2‑
C(＝O)
‑
NH
‑
(CH2CH2O)2‑
CH2‑
C(＝O)
‑
、
‑
C(＝O)
‑
CH2CH2‑
NH
‑
C(＝O)
‑
(CH2CH2O)4‑
CH2CH2‑
C(＝O)
‑
、
‑
CH2‑
OC(＝O)
‑
、以及
‑
OC(＝O)
‑
，并且，Lb由下式表示：或者，
或者，或者，或者，在此，在上述所示的Lb的结构式中，星号表示与La结合，波浪线表示与Ab的糖链或重构的糖链结合。16.根据权利要求7～15中任一项所述的抗体
‑
药物偶联物，其中，L选自以下的组：
‑
Z1‑
C(＝O)
‑
CH2CH2‑
C(＝O)
‑
GGVA
‑
NH
‑
B
‑
CH2‑
OC(＝O)
‑
、
‑
Z1‑
C(＝O)
‑
CH2CH2‑
C(＝O)
‑
GG
‑
(D
‑
)VA
‑
NH
‑
B
‑
CH2‑
OC(＝O)
‑‑
、
‑
Z1‑
C(＝O)
‑
CH2CH2‑
C(＝O)
‑
VA
‑
NH
‑
B
‑
CH2‑
OC(＝O)
‑
、
‑
Z1‑
C(＝O)
‑
(CH2CH2)2‑
C(＝O)
‑
VA
‑
NH
‑
B
‑
CH2‑
OC(＝O)
‑
、
‑
Z1‑
C(＝O)
‑
CH2CH2‑
C(＝O)
‑
GGPI
‑
NH
‑
B
‑
CH2‑
OC(＝O)
‑
、
‑
Z1‑
C(＝O)
‑
CH2CH2‑
C(＝O)
‑
GGFG
‑
NH
‑
B
‑
CH2‑
OC(＝O)
‑
、
‑
Z1‑
C(＝O)
‑
CH2CH2‑
C(＝O)
‑
GGVCit
‑
NH
‑
B
‑
CH2‑
OC(＝O)
‑
、
‑
Z1‑
C(＝O)
‑
CH2CH2‑
C(＝O)
‑
GGVK
‑
NH
‑
B
‑
CH2‑
OC(＝O)
‑
、
‑
Z1‑
C(＝O)
‑
CH2CH2‑
C(＝O)
‑
GGPL
‑
NH
‑
B
‑
CH2‑
OC(＝O)
‑
、
‑
Z1‑
C(＝O)
‑
CH2CH2‑
C(＝O)
‑
NH
‑
(CH2CH2)2‑
C(＝O)
‑
VA
‑
NH
‑
B
‑
CH2‑
OC(＝O)
‑
、
‑
Z1‑
C(＝O)
‑
CH2CH2‑
C(＝O)
‑
NH
‑
(CH2CH2O)2‑
CH2‑
C(＝O)
‑
VA
‑
NH
‑
B
‑
CH2‑
OC(＝O)
‑
、
‑
Z1‑
C(＝O)
‑
CH2CH2‑
NH
‑
C(＝O)
‑
(CH2CH2O)4‑
CH2CH2‑
C(＝O)
‑
VA
‑
NH
‑
B
‑
CH2‑
OC(＝O)
‑
、－Z2－OC(＝O)－GGVA－NH－B－CH2－OC(＝O)－、以及－Z3－CH2－OC(＝O)－GGVA－NH－B－CH2－OC(＝O)－，在此，Z1表示以下的结构式：或者，Z2表示以下的结构式：
或者，Z3表示以下的结构式：或者，在此，在Z1、Z2以及Z3的结构式中，星号表示与La结合，波浪线表示与Ab的糖链或重构的糖链结合，并且，B表示1，4－苯基。17.根据权利要求16所述的抗体－药物偶联物，其中，L选自以下的组：－Z1－C(＝O)－CH2CH2－C(＝O)－GGVA－NH－B－CH2－OC(＝O)－，－Z1－C(＝O)－CH2CH2－C(＝O)－VA－NH－B－CH2－OC(＝O)－，－Z1－C(＝O)－(CH2CH2)2－C(＝O)－VA－NH－B－CH2－OC(＝O)－，－Z1－C(＝O)－CH2CH2－C(＝O)－GGVCit－NH－B－CH2－OC(＝O)－，－Z1－C(＝O)－CH2CH2－C(＝O)－NH－(CH2CH2)2－C(＝O)－VA－NH－B－CH2－OC(＝O)－，－Z1－C(＝O)－CH2CH2－C(＝O)－NH－(CH2CH2O)2－CH2－C(＝O)－VA－NH－B－CH2－OC(＝O)－，以及－Z1－C(＝O)－CH2CH2－NH－C(＝O)－(CH2CH2O)4－CH2CH2－C(＝O)－VA－NH－B－CH2－OC(＝O)－，在此，B为1，4－苯基，Z1表示以下的结构式：或者，在此，在Z1的结构式中，星号表示与Z1所邻接的C(＝O)结合，波浪线表示与Ab的糖链或重构的糖链结合。18.根据权利要求1～6中任一项所述的抗体－药物偶联物，其中，L以－Lb－La－Lp－NH－B－CH2－O(C＝O)－＊表示，
式中，星号表示与D结合，B表示1，4－苯基，Lp表示－GGVA－、或－VA，La表示－(CH2)n9－C(＝O)－、或－(CH2CH2)n
10
－C(＝O)－NH－(CH2CH2O)n
11
－CH2CH2－C(＝O)－，n9表示整数2～7，n
10
表示整数1～3，n
11
表示整数6～10，Lb为－(丁二酰亚胺－3－基－N)－。19.根据权利要求18所述的抗体－药物偶联物，其中，L表示选自以下的组中的任意一个：－(丁二酰亚胺－3－基－N)－(CH2)5－C(＝O)－VA－NH－B－CH2－OC(＝O)－、－(丁二酰亚胺－3－基－N)－(CH2)5－C(＝O)－GGVA－NH－B－CH2－OC(＝O)－、以及－(丁二酰亚胺－3－基－N)－CH2CH2－C(＝O)－NH－(CH2CH2O)8－CH2CH2－C(＝O)－VA－NH－B－CH2－OC(＝O)－，在此，B为1，4－苯基。20.根据权利要求1～19中任一项所述的抗体－药物偶联物，其中，抗体为IgG。21.根据权利要求20所述的抗体－药物偶联物，其中，抗体为IgG1、IgG2或IgG4。22.根据权利要求1～21中任一项所述的抗体－药物偶联物，其特征在于，抗体与肿瘤细胞结合且被吞入肿瘤细胞内而内化。23.根据权利要求22所述的抗体－药物偶联物，其特征在于，抗体还具有抗肿瘤效果。24.根据权利要求1～17、20～23中任一项所述的抗体－药物偶联物，其中，抗体从与抗体的Asn297结合的糖链与L结合，所述糖链为N297糖链。25.根据权利要求24所述的抗体－药物偶联物，其中，N297糖链为重构的糖链。26.根据权利要求24或25所述的抗体－药物偶联物，其中，N297糖链为具有下式所示的结构的N297－(Fuc)...

【专利技术属性】
技术研发人员：户田成洋，太田悠介，土居史尚，目黑正规，早川市郎，芦田真二，益田刚，中田隆，岩本充广，原田直弥，寺内智子，冈岛大祐，中村健介，内田宏昭，滨田洋文，
申请(专利权)人：第一三共株式会社，
类型：发明
国别省市：