抗Siglec-15的抗体或其抗原结合片段及应用制造技术

本发明专利技术提供了抗Siglec

【技术实现步骤摘要】
抗Siglec
‑
15的抗体或其抗原结合片段及应用


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，具体涉及抗体
及免疫领域，更具体的涉及抗Siglec
‑
15的抗体的制 备及其应用，特别是通过调节肿瘤微环境中Siglec
‑
15介导的免疫抑制，尤其是抑制T细胞增殖，来治疗 实体瘤。

技术介绍

[0002]Siglec唾液酸结合性Ig样凝集素家族是Ig超家族的成员，表达于各种白细胞上，能识别细胞表面表 达的糖蛋白唾液酸结构，介导信号转导。Siglec家族是已知最大的一组识别唾液酸化聚糖的脊椎动物凝集 素(Varki andAngata 2006；Crocker et al.2007)。在免疫系统中表达的大多数哺乳动物Siglecs在胞浆结构 域中具有免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)，已证明这些Siglecs对表达它们的细胞具有负调控作用(Otipobyet al.1996；Sato et al.1996；Nitschke et al.1997；Mingari et al.2001；Ulyanova et al.2001；Nutku et al.2003； von Gunten et al.2005)。最近发现的Siglecs与信号衔接分子DNAX活化蛋白DAP12相关，该蛋白具有基 于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)并参与免疫细胞活化(Takamiya等人，糖生物学，23(2):178
‑
87(2013))， 这揭示了Siglecs亚组具有激活信号通路的潜力(Angata et al.2006；Blasius et al.2006)。
[0003]Siglec
‑
15又称CD33L3，是Siglec家族中新发现的成员。Siglec
‑
15是一种I型跨膜蛋白，具有244个 氨基酸的胞外域，包括Ig样V型结构域和Ig样C2型结构域。Siglec
‑
15在免疫系统的细胞上表达，可以 识别唾液酸化配体，并可以通过跨膜结构域中的赖氨酸残基与信号衔接分子DNAX活化蛋白DAP12和 DAP10相互作用。Siglec
‑
15是脊椎动物进化过程中保守的免疫系统Siglec(TakashiAngata等。糖生物学， 2007)。之前的几项研究表明，Siglec
‑
15在破骨细胞分化中发挥重要作用(Yoshiharu Hiruma et al.生物化学 和生物物理研究通信2011；Norihiro Ishida
‑
Kitagawa et al.生物化学杂志，2012)。破骨细胞前体上的Siglec
‑
15 识别相邻破骨细胞前体上的CD44，并通过DAP12
‑
Syk途径转导信号，与RANK
‑
TRAF6途径交叉对话并 增强下游信号(例如ERK和PI3K
‑
AKT)。
[0004]Siglec
‑
15还参与免疫细胞和肿瘤微环境的调节。研究显示Siglec
‑
15优先结合唾液酸
ꢀ‑
Tn(Neu5Acα2
–
6GalNAcα1)结构，在几种肿瘤相关抗原如MUC
‑
1中发现该结构，其高表达与不良预后相 关(TakashiAngata et al.糖生物学，2007；Jennifer Munkley，国际分子科学杂志，2016)。Siglec
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15在各种 人类肿瘤组织的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)上表达，其在巨噬细胞集落刺激因子诱导的M2样巨噬细胞 中表达显著升高，与阴性细胞相比，Siglec
‑
15对sTn阳性细胞产生更多的转化生长因子
‑
β(TGF
‑
β)，这表明 Siglec
‑
15识别肿瘤sTn抗原并转导TAMs中TGF
‑
β分泌增强的信号。陈列平近期的研究(Jun Wang et al. 自然医学，2019)表明，Siglec
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15可能是一个重要的免疫检查点，仅在表达PD
‑
L1的肿瘤细胞上表达，并 与T细胞上表达的未知受体相互作用，负调控T细胞增殖。在小鼠肿瘤模型中，抗Siglec
‑
15的抗体在体 外T细胞增殖挽救实验中显示具有抗肿瘤疗效。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了抗Siglec
‑
15的抗体或其抗原结合片段，特别是Siglec
‑
15人源化单克隆抗体，该抗体 包括重链和轻链并以高亲和力特异性结合于Siglec
‑
15。本专利技术还提供了编码该抗体的核酸序列、克隆或 表达载体、宿主细胞以及在体外实验中抗肿瘤效果。本专利技术进一步提供了Siglec
‑
15抗体治疗各种癌症的 用途。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]在一些实施方案中，本专利技术所提供的抗Siglec
‑
15的抗体或其抗原结合片段，包括：重链可变区VH 序列，所述VH序列与选自包括以下序列的组中的氨基酸序列具有至少95％的一致性：SEQ ID NO：1， SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：12， SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO： 23，SEQ ID NO：25，SEQ ID NO：27，SEQ ID NO：29，SEQ ID NO：31，SEQ ID NO：32，SEQ ID NO：35，SEQ ID NO：36，SEQ ID NO：37，SEQ ID NO：39，SEQ ID NO：40，SEQ ID NO：41，SEQ ID NO： 43，SEQ ID NO：45，SEQ ID NO：47；轻链可变区VL序列，所述VL序列与选自包括以下序列的组中 的氨基酸序列具有至少95％的一致性：SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：6，SEQID NO： 8，SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：19，SEQID NO：20，SEQID NO：21，SEQ ID NO： 22，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：28，SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：33，SEQ ID NO： 34，SEQ ID NO：38，SEQID NO：42，SEQ ID NO：44，SEQ ID NO：46，SEQ ID NO：48。
[0008]在一些实施方案中，本专利技术所提供的抗Siglec
‑
15的抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗Siglec
‑
15的抗体或其抗原结合片段，包括：重链可变区VH序列和轻链可变区VL序列，所述VH序列与选自包括以下序列的组中的氨基酸序列具有至少95％的一致性：SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：25，SEQ ID NO：27，SEQ ID NO：29，SEQ ID NO：31，SEQ ID NO：32，SEQ ID NO：35，SEQ ID NO：36，SEQ ID NO：37，SEQ ID NO：39，SEQ ID NO：40，SEQ ID NO：41，SEQ ID NO：43，SEQ ID NO：45，SEQ ID NO：47；所述VL序列与选自包括以下序列的组中的氨基酸序列具有至少95％的一致性：SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：19，SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：21，SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：28，SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：33，SEQ ID NO：34，SEQ ID NO：38，SEQID NO：42，SEQ ID NO：44，SEQ ID NO：46，SEQ ID NO：48。2.根据权利要求1所述的抗Siglec
‑
15的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包括：VH/VL序列对，所述的VH/VL序列对与选自包括以下序列对的组中的VH和VL氨基酸序列对具有至少95％的一致性：SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：19，SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：19，SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：21，SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：27和SEQ ID NO：28，SEQ ID NO：29和SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：31和SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：32和SEQ ID NO：33，SEQ ID NO：32和SEQ ID NO：34，SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：33，SEQ ID NO：32和SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：36和SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：38，SEQ ID NO：39和SEQ ID NO：38，SEQ ID NO：40和SEQ ID NO：38，SEQ ID NO：41和SEQ ID NO：42，SEQ ID NO：43和SEQ ID NO：44，SEQ ID NO：45和SEQ ID NO：46，SEQ ID NO：47和SEQ ID NO：48。3.根据权利要求1所述的抗Siglec
‑
15的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含选自以下的一个或多个重链互补决定区HCDR的序列:(1)HCDR1，其包含与选自SEQ ID NO:49，SEQ ID NO:55，SEQ ID NO:61，SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:69，SEQ ID NO:74，SEQ ID NO:77，SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列或由以上序列组成；(2)HCDR2，其包含与选自SEQ ID NO:56，SEQ ID NO:62，SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:70，SEQ ID NO:75，SEQ ID NO:78，SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:85，SEQ ID NO:87，SEQ ID NO:91，SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:95，SEQ ID NO:97，SEQ ID NO:98的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列或由以上序列组成；(3)HCDR3，其包含与选自SEQ ID NO:51，SEQ ID NO:57，SEQ ID NO:63，SEQ ID NO:71的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列或由以上序列组成；(4)含有一处或多处不超过5个氨基酸的氨基酸取代、缺失或插入的上述(1)、(2)和(3)的HCDR。
4.根据权利要求1所述的抗Siglec
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15的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含选自以下的一个或多个轻链互补决定区LCDR的序列:(1)LCDR1，其包含与选自SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：58，SEQ ID NO：64，SEQ ID NO：72，SEQ ID NO:81，SEQ ID NO：100，SEQ ID NO：93，SEQ ID NO：99的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列或由以上序列组成；(2)LCDR2，其包含与选自SEQ ID NO:59，SEQ ID NO:65，SEQ ID NO:73，SEQ ID NO:76，SEQ ID NO:79，SEQ ID NO:82，SEQ ID NO:84，SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列或由以上序列组成；(3)LCDR3，其包含与选自SEQ ID NO:60，SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:89，SEQ ID NO:94，SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵永浩，史新震，张崇骞，李虹侠，汤春，宗超，张楠，张媛媛，马赛，闫成海，张晓霞，J，
申请(专利权)人：倍而达药业苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：