针对可溶性BCMA的抗体制造技术

本发明专利技术涉及与可溶性BCMA(sBCMA)结合的抗体。此外，本发明专利技术涉及包含此类抗体的检测系统。这些抗体或检测系统可以用于检测或定量sBCMA，用于诊断与sBCMA有关的疾病，用于患者分层、监测疾病进展以及评价治疗反应。监测疾病进展以及评价治疗反应。监测疾病进展以及评价治疗反应。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对可溶性BCMA的抗体


[0001]本专利技术涉及与可溶性BCMA(sBCMA)结合的抗体。此外，本专利技术涉及包含此类抗体的检测系统。这些抗体或检测系统可以用于检测或定量sBCMA，用于诊断与sBCMA有关的疾病，用于患者分层、监测疾病进展以及评价治疗反应。
[0002]通过引用并入以电子方式提交的材料
[0003]通过引用以其全文并入的是与本文同时提交的计算机可读核苷酸/氨基酸序列表，其鉴定如下：名称为“53500A_Seqlisting.txt”的34,276字节ASCII(文本)文件；创建于2019年9月27日。

技术介绍

[0004]多发性骨髓瘤(MM)是一种赘生性浆细胞病，其特征在于骨髓微环境中的恶性浆细胞的克隆增殖、血液或尿中的单克隆蛋白和相关的器官功能障碍。多发性骨髓瘤(MM)几乎占所有癌症的2％，占血液系统恶性肿瘤的20％(SEER)。尽管最近对骨髓瘤发病机制的理解的改进开发了新的治疗方法并提高了生存率，多发性骨髓瘤仍然是无法治愈的癌症。治疗方法包括被设计成对支持肿瘤细胞存活和增殖的信号传导通路进行抑制的分子靶向疗法。一种这样的靶标是B细胞成熟抗原，其在恶性浆细胞上比在正常浆细胞上以相对更高的水平大量表达，并通过其配体APRIL和BAFF的结合诱导增殖信号。
[0005]B细胞成熟抗原(BCMA、TNFRSF17、CD269)是属于TNF受体超家族的跨膜蛋白。BCMA表达在晚期浆细胞分化期间选择性诱导，并且在天然和记忆B细胞中不存在。在BCMA与其配体、B细胞激活因子(BAFF)和增殖诱导配体(APRIL)结合后，促进了骨髓浆细胞和浆母细胞的存活。BCMA不能维持正常的B细胞稳态，但它是长寿命浆细胞的存活所必需的。BCMA的mRNA表达在恶性浆细胞障碍中高度升高。相比之下，正常组织中的BCMA mRNA表达非常低并且限于正常长寿命浆细胞所在的淋巴组织。据报道，BCMA蛋白表达仅局限于浆细胞，并且仅限于浆母细胞和长寿浆细胞，在其他正常人体组织上无法检测到。与MM患者的正常浆细胞相比，BCMA在大多数恶性浆细胞中以相对更高的水平表达。T细胞和骨髓细胞或CD34+造血干细胞均不表达BCMA。BCMA在大多数恶性浆细胞中的选择性表达使其成为对于以抗体为基础和以嵌合抗原受体(CAR)为基础的疗法而言非常有吸引力的靶。有MM患者的BCMA阴性特征的报道表明，靶向疗法可能需要进行患者选择。BCMA的检测可能不限于蛋白质表达。最近的研究表明，血清BCMA的变化可能是MM患者治疗反应或疾病进展的生物标志物。
[0006]BCMA可以从细胞表面脱落，并在多发性骨髓瘤患者以及健康受试者的血清样本中找到。最近的出版物证明可溶性BCMA(sBCMA)水平与骨髓活检中浆细胞的比例、临床状态相关，并且可以通过M
‑
蛋白水平的变化进行追踪。在这项研究中，健康供体的sBCMA血液中值浓度与完全缓解患者中观察到的中值水平相似。冒烟型多发性骨髓瘤患者的浓度较高，而活动性未治疗的多发性骨髓瘤患者的水平最高。与sBCMA水平高于中值的患者相比，sBCMA水平低于中值的患者的无进展生存期更长。sBCMA水平的变化可能是MM患者治疗功效的快速可靠指标。可溶性BCMA可用于预测或监测疾病进展，因为这种生物标志物可以在患有非
分泌性疾病的低肿瘤负荷患者中检测到，并且与肾功能无关。
[0007]因此，迫切需要提供一种可靠的用于生物样本sBCMA的检测系统，所述检测系统具有高灵敏度、可重复性，并且在潜在干扰性治疗性sBCMA结合分子(如抗体或抗体构建体)的存在下理想地提供稳定的结果。
附图说明
[0008]图1A
‑
1C描绘了根据实例1进行的测定的设置。图1A示出了使用BCMA检测/定量ELISA试剂盒测试治疗性抗BCMA ab的潜在干扰的测定设置。图1B示出了在单克隆治疗性抗sBCMA抗体的存在下，针对BCMA结合来筛选抗BCMA杂交瘤中使用捕获和检测抗体的三种不同的Octet形式。图1C示出了针对治疗性抗BCMA ab夹心来筛选兔血清的测定设置。
[0009]图2示出了在Octet测定中针对治疗性抗BCMA Ab(Ther
‑
Ab2)夹心的两种兔单克隆抗sBCMA Ab(sBCMA
‑
mAb1和sBCMA
‑
mAb2)的表征(参见实例2a)。
[0010]图3示出了Octet测定的结果，表明兔单克隆抗sBCMA
‑
mAb3能够进行sBCMA
‑
mAb1和治疗性抗BCMA抗体Ther
‑
Ab2夹心(参见实例2c)。
[0011]图4示出了Octet测定的结果，证实了图3所示的结果(参见实例2c)。
[0012]图5示出了经由Biacore对兔单克隆抗sBCMA夹心mAb(sBCMA
‑
mAb1、
‑
mAb2和
‑
mAb3)进行亲和力确定的结果(参见实例3)。

技术实现思路

[0013]为了产生用于检测sBCMA的抗体对，本专利技术人筛选了约400种针对BCMA产生并且在BCMA结合的ELISA测定中测试为阳性的杂交瘤。但是，即使在测试抗体捕获和检测的使用的不同格式时，在与sBCMA结合的单克隆抗体的存在下对这些杂交瘤的筛选也没有鉴定出任何夹心抗体(参见图1B)。接下来，进行兔免疫活动，并针对与sBCMA结合的单克隆抗体夹心对兔血清进行筛选。在当前情况下，使用兔来产生抗体的优点是：
[0014]‑
不同的抗体组库，不同的表位空间(无竞争)
[0015]‑
强烈的免疫应答
[0016]‑
基于基因转换的免疫系统，比啮齿动物更高的体细胞超突变率，从而具有很高的亲和力
[0017]可以证明存在三种夹心抗体(在针对sBCMA的共226种兔抗体中)。显示了其中两个(sBCMA
‑
mAb1和sBCMA
‑
mAb2)彼此竞争结合sBCMA。它们都能够在治疗性抗BCMA抗体构建体存在下与sBCMA结合。进一步显示，在sBCMA
‑
mAb1和治疗性抗BCMA抗体构建体同时存在的情况下，抗体sBCMA
‑
mAb3与sBCMA结合。
[0018]因此，本专利技术一方面提供了与可溶性BCMA(sBCMA)结合的单克隆抗体(或抗体构建体)，其中该抗体(或抗体构建体)与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第二单克隆抗体(或抗体构建体)的存在下发生。本专利技术还提供了在与sBCMA结合的第二单克隆抗体(或抗体构建体)的存在下与可溶性BCMA(sBCMA)结合的单克隆抗体(或抗体构建体)。
[0019]在下文中，每当使用术语“单克隆抗体”(即与sBCMA结合的单克隆抗体)时，该术语意味着还涵盖“抗体构建体”或“抗体片段”，它们将在下文中定义。此外，以下提供的本专利技术“单克隆抗体(或抗体构本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种与可溶性BCMA(sBCMA)结合的单克隆抗体，其中该抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第二单克隆抗体的存在下发生的。2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其中sBCMA具有如SEQ ID NO:34所描绘的氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第三抗体或抗体构建体的存在下发生的。4.如前述权利要求中任一项所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体包含兔VH区和/或兔VL区。5.如前述权利要求中任一项所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体对sBCMA的亲和力(KD)为约≤10
‑7M、≤10
‑8M、≤10
‑9M或≤10
‑
10
M。6.如权利要求5所述的单克隆抗体，其中该亲和力是在Biacore测定中确定的。7.如前述权利要求中任一项所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体：a)包含含有如SEQ ID NO:1中所描绘的VH
‑
CDR1、如SEQ ID NO:2中所描绘的VH
‑
CDR2和如SEQ ID NO:3中所描绘的VH
‑
CDR3的VH区，以及含有如SEQ ID NO:4中所描绘的VL
‑
CDR1、如SEQ ID NO:5中所描绘的VL
‑
CDR2和如SEQ ID NO:6中所描绘的VL
‑
CDR3的VL区；b)包含含有如SEQ ID NO:11中所描绘的VH
‑
CDR1、如SEQ ID NO:12中所描绘的VH
‑
CDR2和如SEQ ID NO:13中所描绘的VH
‑
CDR3的VH区，以及包含如SEQ ID NO:14中所描绘的VL
‑
CDR1、如SEQ ID NO:15中所描绘的VL
‑
CDR2和如SEQ ID NO:16中所描绘的VL
‑
CDR3的VL区；c)包含含有如SEQ ID NO:21中所描绘的VH
‑
CDR1、如SEQ ID NO:22中所描绘的VH
‑
CDR2和如SEQ ID NO:23中所描绘的VH
‑
CDR3的VH区，以及包含如SEQ ID NO:24中所描绘的VL
‑
CDR1、如SEQ ID NO:25中所描绘的VL
‑
CDR2和如SEQ ID NO:26中所描绘的VL
‑
CDR3的VL区；d)与a)的抗体结合相同的sBCMA表位或与a)的抗体竞争结合sBCMA；e)与b)的抗体结合相同的sBCMA表位或与b)的抗体竞争结合sBCMA；或f)与c)的抗体结合相同的sBCMA表位或与c)的抗体竞争结合sBCMA。8.如权利要求7所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体：a)包含如SEQ ID NO:7、17或27的任一项中所描绘的VH区；b)包含如SEQ ID NO:8、18或28的任一项中所描绘的VL区；c)包含如SEQ ID NO:7所描绘的VH区和如SEQ ID NO:8所描绘的VL区；d)包含如SEQ ID NO:17所描绘的VH区和如SEQ ID NO:18所描绘的VL区；e)包含如SEQ ID NO:27所描绘的VH区和如SEQ ID NO:28所描绘的VL区；f)与c)的抗体结合相同的sBCMA表位或与c)的抗体竞争结合sBCMA；g)与d)的抗体结合相同的sBCMA表位或与d)的抗体竞争结合sBCMA；或h)与e)的抗体结合相同的sBCMA表位或与e)的抗体竞争结合sBCMA。9.如前述权利要求中任一项所述的单克隆抗体，该单克隆抗体是IgG、IgD、IgE、IgM或IgA抗体，优选地是IgG抗体，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。10.如前述权利要求中任一项所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体和/或该第二单克隆抗体与人血清、人血浆或人血液样本中的sBCMA结合。11.一种多核苷酸，该核苷酸编码如前述权利要求中任一项所定义的单克隆抗体。12.一种载体，该载体包含如权利要求11中所定义的多核苷酸。
13.一种宿主细胞，该宿主细胞经如权利要求11中所定义的多核苷酸或如权利要求12中所定义的载体转化或转染。14.一种用于产生如权利要求1至10中任一项所定义的单克隆抗体的方法，所述方法包括：在允许表达所述单克隆抗体的条件下培养如权利要求13中所定义的宿主细胞并且从培养物中回收所产生的单克隆抗体。15.一种组合物，该组合物包含如权利要求1至10中任一项所定义的或如权利要求14所述的方法所产生的单克隆抗体。16.一种检测系统，该检测系统包含a)与sBCMA结合的第一单克隆抗体，和b)与sBCMA结合的第二单克隆抗体第一单克隆，其中该第一单克隆抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的该第二单克隆抗体的存在下发生的，和/或其中该第二单克隆抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的该第一单克隆抗体的存在下发生的。17.如权利要求16所述的检测系统，其中sBCMA具有如SEQ ID NO:34所描绘的氨基酸序列。18.如权利要求16或17所述的检测系统，其中该第一单克隆抗体与sBCMA的结合和该第二单克隆抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第三抗体或抗体构建体的存在下发生的。19.如权利要求16
‑
18中任一项所述的检测系统，其中该第一单克隆抗体和/或该第二单克隆抗体包含兔VH区和/或兔VL区。20.如权利要求16
‑
19中任一项所述的检测系统，其中该第一单克隆抗体和/或该第二单克隆抗体对sBCMA的亲和力(KD)为约≤10
‑7M、≤10
‑8M、≤10
‑9M或≤10
‑
10
M。21.如权利要求16
‑
20中任一项所述的检测系统，其中该第一单克隆抗体：a)包含含有如SEQ ID NO:1中所描绘的VH
‑
CDR1、如SEQ ID NO:2中所描绘的VH
‑
CDR2和如SEQ ID NO:3中所描绘的VH
‑
CDR3的VH区，以及含有如SEQ ID NO:4中所描绘的VL
‑
CDR1、如SEQ ID NO:5中所描绘的VL
‑
CDR2和如SEQ ID NO:6中所描绘的VL
‑
CDR3的VL区；b)包含含有如SEQ ID NO:11中所描绘的VH
‑
CDR1、如SEQ ID NO:12中所描绘的VH
‑
CDR2和如SEQ ID NO:13中所描绘的VH
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：安进公司，
类型：发明
国别省市：