本发明专利技术公开了一种A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原酶联诊断试剂盒，包括由A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板、标本稀释液、酶标二抗、洗涤液、显色液、终止液构成。本发明专利技术提供试剂盒的检测结果与美国R&D试剂盒脑膜炎奈瑟菌A+C型IgM?ELISA检测试剂盒的一致性高，灵敏度为98%，特异度为99.7%。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及脑膜炎奈瑟菌的检测，具体是ー种A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒及其制备方法。
技术介绍
脑膜炎奈瑟菌是ー种革兰氏阴性双球菌，通过呼吸道传染引起的流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)是ー种对人类危害严重的传染性疾病，此外还可引起菌血症、肺炎、关节炎、結膜炎、心肌炎、泌尿系统等多种炎症，是ー种常见和多发疾病。脑膜炎奈瑟球菌可分为A、B、C、D、H、I、K、L、X、Y、Z、29E和W135共13个血清群，对人类致病的多属A、B、C群，其他类群在带菌者中经常发现，但很少致病。我国的流脑流行菌群仍以A群为主，但近年来也发人群中的绝大多数人对脑膜炎奈瑟球菌易感，该菌可寄生于正常人的鼻咽腔内，处于这种寄 生状态的细菌并不导致任何病理变化，亦不引起任何疾病症状；但这种带菌状态可以持续I周到数月之久，这种处于潜伏感染状态的带菌者在人群中的比例可高达50% 85%。人群中的带菌者是造成流行性脑脊髄膜炎流行的最重要的传染源，由于脑膜炎奈瑟菌的惟一自然宿主是人，因此，在人群较为密集的场所，容易造成细菌的高效率的传播，特别是在儿童、中小学生为最易感人群，极易在短时间内造成儿童发病流行，所以，控制人群中的带菌者传染源成为控制流脑流行的重要环节之一。目前国内市场上脑膜炎奈瑟菌的各种免疫诊断试剂盒质量參差不齐，既无统ー的质量标准，又在无序生产与应用，给脑膜炎奈瑟菌的预防和诊治造成严重障碍。目前虽有国外试剂商提供同类商品化诊断试剂盒用于检测，但是此种试剂盒价格十分昂贵，限制了临床的广泛使用。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题和缺陷，本专利技术的目的是提供ー种A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒及其制备方法，即可用于脑膜炎奈瑟菌全菌的定性和定量的检测。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下ー种A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒，由A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板、标本稀释液、酶标ニ抗、洗漆液、底物液、终止液构成,具体组份为(I)、标本稀释液含10%小牛血清和2%抗人IgG的0. 01M、pH7. 4的磷酸盐缓冲液；(2)、洗涤液含有0. 05%Tween20的磷酸盐缓冲液；(3)、酶标ニ抗辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgM单抗；(4)、底物液TMB-H000尿素溶液；(5)，终止液2mol/LH2S04 溶液；所述A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板通过如下步骤制得(I)、在96孔酶标板的每孔内加入0. IMNaHCO3稀释的5%戊ニ醛200uL，于37°C温箱中放置80-90分钟,然后用去离子水洗漆96孔酶标板3-5次,甩干,备用；(2)、将A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌等体积混合后，用包被液按I :1000 1100的体积比稀释后，包被处理后的96孔酶标板，每孔95-105ul ;然后于37°C温箱中烘干10-18小时；(3)、取过夜烘干的抗原包被96孔酶标板用200uL用PBS稀释的10%小牛血清的填满，然后于35-38°C下封闭1-2小吋，即得抗原包被酶标反应板；其中，所述的A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌的浓度为3X 109cfu/mL。制备上述A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒的方法，包括制备A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板和配置其标本稀释液、酶标ニ抗、洗涤液、底物液、终止液；其中 所述A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板通过如下步骤制得(I)、在96孔酶标板的每孔内加入0. IMNaHCO3稀释的5%戊ニ醛200uL，于37°C温箱中放置80-90分钟,然后用去离子水洗漆96孔酶标板3-5次,甩干,备用；(2)、将A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌等体积混合后，用包被液按I :1000 1100的体积比稀释后，包被处理后的96孔酶标板，每孔95-105ul ;然后于37°C温箱中烘干10-18小时；(3)、取过夜烘干的抗原包被96孔酶标板用200uL用PBS稀释的10%小牛血清的填满，然后于35-38°C下封闭1-2小吋，即得抗原包被酶标反应板；其中，所述的A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌的浓度为3X 109cfu/mL。作为ー种优选方案，所述的标本稀释液中2%抗人IgG的0. 01M、pH7. 4的磷酸盐缓冲液是由 NaC18. 0g、KH2PO4O. 2g、Na2HPO4. 12H202. 9g、KC10. 2g、硫柳汞 0. lg，加双蒸水至lOOOmL，调至 pH7.4 制得；所述的洗涤液是由NaC18. 0g、KH2PO4O. 2g、Na2HPO4. 12H202. 9g、KC10. 2g、Tween-200. 5ml、硫柳萊0. lg、加双蒸水至1000ml,调至pH7. 4制得；所述的底物液是经200mg3、3’、5、5’ 一四甲基联苯胺、IOOml无水こ醇、加双蒸水至1000ml得底物液A ；Na2HPO414. 60g、朽1檬酸9. 33g、0. 75%过氧化氢尿素6. 4ml、加双蒸水至1000ml，调至pH5. (T5. 5得底物液B ;将底物液A和底物液B按I : I I. 5的体积比混合制得；所述的终止液是由IOOml浓硫酸缓慢滴加引入600ml双蒸水中不断搅拌，然后加双蒸水至900ml制得。本专利技术提供试剂盒的检测结果与美国R&D试剂盒脑膜炎奈瑟菌A+C型IgMELISA检测试剂盒的一致性高，灵敏度为98%，特异度为99. 7%。具体实施例方式以下结合具体实施例，进ー步阐明本专利技术。应理解，下述实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。比例和百分比基于重量，除非特别说明。实施例(I)、试剂包被液(0.05mol/L,pH9. 6 的碳酸钠_碳酸氢钠缓冲液)=Na2CO3L 5g、NaHC032. 9g、Na2N3O. 2g,加双蒸水至 1000ml,调至 pH9. 6 ；标本稀释液(含10%小牛血清和2%抗人IgG的0. 01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)pH7. 4)，PBS :由 NaC18. 0g、KH2PO4O. 2g、Na2HPO4. 12H202. 9g、KC10. 2g、硫柳汞 0. lg，加双蒸水至lOOOmL，调至pH7. 4，即得；封闭液(10%小牛血清IPRS溶液)小牛血清100ml XPBS (pH7. 4) 900ml ；洗涤液(PBST,pH7. 4):由 NaC18. 0g、KH2PO4O. 2g、Na2HPO4. 12H202. 9g、KC10. 2g、Tween200. 5ml、硫柳萊 0. lg、加双蒸水至 1000ml,调至 pH7. 4 ；酶标ニ抗(HRP*鼠抗人IGM单抗)辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgM单抗；底物液(TMB-H202尿素溶液) ①底物液A(3、3’、5、5’ -四甲基联苯胺，TMB) :TMB200mg，无水こ醇100ml，加双蒸水至 IOOOrnl ②底物液B缓冲液(0. Imol/L柠檬酸-0. 2mol/L磷酸氢ニ钠缓冲液，pH5. 0 5.4) Na2HP0414. 60g,梓檬酸9. 33g, 0. 75%过氧化氢尿素6. 4ml,加双蒸水至1000ml,调至pH5. 0-5. 5 ；⑧本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒，其特征在于：它由A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板、标本稀释液、酶标二抗、洗涤液、底物液、终止液构成，具体组份为：标本稀释液：含10%小牛血清和2%抗人IgG的0.01M、pH7.4的磷酸盐缓冲液；洗涤液：含有0.05%Tween20的磷酸盐缓冲液；酶标二抗：辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgM单抗；底物液：TMB？H000尿素溶液；终止液：2mol/LH2S04溶液；所述A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板通过如下步骤制得：1)、在96孔酶标板的每孔内加入0.1MNaHC03稀释的5%戊二醛200uL，于37℃温箱中放置80？90分钟，然后用去离子水洗涤96孔酶标板3？5次，甩干，备用；2)、将A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌等体积混合后，用包被液按1：1000～1100的体积比稀释后，包被处理后的96孔酶标板，每孔95？105ul；然后于37℃温箱中烘干10？18小时；3)、取过夜烘干的抗原包被96孔酶标板用200uL用PBS稀释的10%小牛血清的填满，然后于35？38℃下封闭1？2小时，即得抗原包被酶标反应板；其中，所述的A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌的浓度为3×l09cfu/mL。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吴克，
申请(专利权)人：吴克，
类型：发明
国别省市：
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