脑膜炎奈瑟球菌ORF2086抗原的非脂质化变体制造技术

本发明专利技术涉及包括分离的非丙酮酰化非脂质化ORF2086多肽的组合物及其方法。在一例示性实施方案中，本文所述的组合物为免疫原性组合物。本发明专利技术另外关于在哺乳动物中引发针对血清群B脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria?meningitidis)的ORF2086亚家族B多肽的杀细菌免疫应答的组合物及与其相关的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及如本文所述的免疫原性组合物中的脑膜炎奈瑟球菌(Neisseriameningitidis) 0RF2086抗原的非脂质化变体。本专利技术亦涉及保持脑膜炎奈瑟球菌0RF2086抗原的非脂质化变体的构象的方法。本专利技术另外包括相比于相应野生型抗原，非脂质化脑膜炎奈瑟球菌0RF2086抗原的表达改良相关的组合物及方法。
技术介绍
rLP2086为一种重组28_kDa脂蛋白，其诱导针对许多脑膜炎奈瑟球菌菌株，包括脑膜炎奈瑟球菌血清型B(MnB)菌株或更准确地血清群B(MnB)菌株的交叉反应性细菌抗体。基于推断的氨基酸序列同源性，鉴别出2个不同rLP2086亚家族A及B。此2个亚家族用于配制于IOmM组氨酸(pH6.0)、150mM NaCl及0.5mg/mL招及不同含量的聚山梨醇酯80 (PS-80)中各含 20、60、120 及 200 μ g/mL 的 MnB_rLP2086 疫苗样品。天然 LP2086 为脂蛋白。Fletcher 等人 Infection & Immunity,第 72 卷(4):2088-2100(2004)证明在小鼠中，具有氨基端脂质的rLP2086比相同蛋白的非脂质化形式更具免疫原性。其它临床前及临床研究已证明此两种脂质化蛋白的组 合可提供跨越fHBP家族的广泛作用范围(coverage)。脑膜炎奈瑟球菌性脑膜炎(Meningococcal meningitis)为一种不论抗生素的可用性如何，可在数小时内杀死儿童及青少年的毁灭性疾病。仍然需要适合的血清群B脑膜炎奈瑟球菌免疫原性组合物。专利技术概述为了满足对脑膜炎奈瑟球菌疫苗的这些及其它需要，已对其他组合物进行评估以提供使用脑膜炎奈瑟球菌0RF2086多肽的非脂质化变体的作用范围。本专利技术的第一方面提供一种包含非脂质化0RF2086蛋白的免疫原性组合物，其中该0RF2086蛋白为B44、B02、B03、B22、B24、B09、A05、A04、A12 或 A22 变体。在一些实施方案中，0RF2086 蛋白为 B44、B22、B09、A05、A12 或 A22 变体。本专利技术的另一方面提供一种包含非脂质化0RF2086蛋白亚家族B变体(P2086亚家族B多肽)的免疫原性组合物。在一些实施方案中，P2086亚家族B多肽为B44、B02、B03、B22、B24或B09变体。在一些实施方案中，免疫原性组合物另外包含非脂质化0RF2086蛋白亚家族A变体(P2086亚家族A多肽)。在一些实施方案中，P2086亚家族A多肽为A05、A04、A12 或 A22 变体。在一些实施方案中，免疫原性组合物另外包含佐剂。在一些实施方案中，佐剂为铝佐剂、皂苷(saponin)、CpG核苷酸序列或其任何组合。在一些实施方案中，铝佐剂为A1P04、Al (OH) 3、A12 (SO4)3或明矾。在一些实施方案中，免疫原性组合物中的铝浓度介于0.125 yg/ml与0.Syg/ml之间。在一些实施方案中，免疫原性组合物中的铝浓度为0.25 μ g/ml。在优选实施方案中，免疫原性组合物中的铝浓度介于0.125mg/ml与0.5mg/ml之间。在一些优选实施方案中，免疫原性组合物中的铝浓度为0.25mg/ml。在一些实施方案中，免疫原性组合物中的皂苷浓度介于I μ g/ml与250 μ g/ml之间。在一些实施方案中，免疫原性组合物中的皂苷浓度介于10 μ g/ml与100 μ g/ml之间。在一些实施方案中，免疫原性组合物中的皂苷浓度为10 μ g/ml。在一些实施方案中，免疫原性组合物中的皂苷浓度为 οομ g/ml。在一些实施方案中，皂苷为QS-21 Stimulon (Agenus, Lexington, MA)或 ISCOMATRIX(丨 ) (CSL Limited, Parkville, Australia)。在一些实施方案中，在向对象施用多剂量的免疫原性组合物之后，免疫原性组合物会赋予引起对脑膜炎奈瑟球菌的免疫原性反应的能力。在一些实施方案中，在向对象施用2个剂量之后赋予免疫原性反应。在一些实施方案中，在向对象施用3个剂量之后赋予免疫原性反应。本专利技术的另一方面提供一种赋予非脂质化P2086抗原的增加的免疫原性的组合物，其中该组合物包含皂苷及至少一种非脂质化P2086抗原。在一些实施方案中，免疫原性组合物中的皂苷浓度介于I μ g/ml与250 μ g/ml之间。在一些实施方案中，免疫原性组合物中的皂苷浓度介于10 μ g /ml与100 μ g/ml之间。在一些实施方案中，免疫原性组合物中的皂苷浓度为10 μ g/ml。在一些实施方案中，免疫原性组合物中的皂苷浓度为100 μ g/ml。在一些实施方案中，皂苷为QS-21或ISCOMATRIX。在一些实施方案中，组合物另外包含铝。在一些实施方案中，铝是以aipo4、Al (OH) 3、A12 (SO4) 3或明矾形式存在。在一些实施方案中，组合物中的铝浓度介于0.125 μ g/ml与0.5 μ g/ml之间。在一些实施方案中，组合物中的铝浓度为0.25 μ g/ml。在优选实施方案中，免疫原性组合物中的铝浓度介于0.125mg/ml与0.5mg/ml之间。在一些优选实施方案中，免疫原性组合物中的铝浓度为0.25mg/ml。在一些实施方案中，在向对象施用多剂量的免疫原性组合物之后，免疫原性组合物会赋予引起对脑膜炎奈瑟球菌的免疫原性反应的能力。在一些实施方案中，在向对象施用2个剂量之后赋予免疫原性反应。在一些实施方案中，在向对象施用3个剂量之后赋予免疫原性反应。在一些实施方案中，非脂质化P2086抗原为P2086亚家族B多肽。在一些实施方案中，P2086亚家族B多肽为B44、B02、B03、B22、B24或B09变体。在一些实施方案中，非月旨质化P2086抗原为P2086亚家族A多肽。在一些实施方案中，P2086亚家族A多肽为A05、A04、A12 或 A22 变体。在一些实施方案中，组合物包含至少两种非脂质化P2086抗原，其中该两种非脂质化P2086抗原为至少一种非脂质化P2086亚家族A多肽及至少一种非脂质化P2086亚家族B多肽。在一些实施方案中，非脂质化P2086亚家族A多肽为A05变体且非脂质化P2086亚家族B多肽为B44变体。在一些实施方案中，非脂质化P2086亚家族A多肽为A05变体且非脂质化P2086亚家族B多肽为B22变体。在一些实施方案中，非脂质化P2086亚家族A多肽为A05变体且非脂质化P2086亚家族B多肽为B09变体。本专利技术的另一方面提供一种赋予对象针对脑膜炎奈瑟球菌细菌的免疫性的方法，其中该方法包含向该对象施用包含非脂质化P2086亚家族B多肽的免疫原性组合物的步骤。在一些实施方案中，？2086亚家族8多肽为财4、802、803、822、824或洲9变体。在一些实施方案中，免疫原性组合物另外包含P2086亚家族A多肽。在一些实施方案中，P2086亚家族A多肽为A05、A04、A12或A22变体。在一些实施方案中，免疫原性组合物另外包含佐剂。在一些实施方案中，佐剂为铝佐剂、皂苷、CpG核苷酸序列或其任何组合。在一些实施方案中，铝佐剂为A1P04本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.09.10 US 61/381,8371.一种组合物，其包含分离的非丙酮酰化非脂质化0RF2086多肽。2.权利要求1的组合物，其中所述组合物为免疫原性组合物。3.权利要求1的组合物，其中相比于相应野生型非脂质化0RF2086多肽，所述多肽包含N端Cys缺失。4.权利要求1的组合物，其中所述多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列:SEQID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID N0:20 及 SEQ ID NO:21，其中在位置 I 处的半胱氨酸缺失。5.权利要求4的组合物，其中所述多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列:SEQID NO:44、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO: 50 及 SEQ ID NO: 55。6.权利要求1的组合物，其中所述多肽由可操作地连接于表达系统的核苷酸序列编码，其中所述表达系统能够在细菌细胞中表达。7.权利要求6的组合物，其中所述表达系统为质粒表达系统。8.权利要求6的组合物，其中所述细菌细胞为大肠杆菌细胞。9.权利要求6的组合物，其中所述核苷酸序列与控制所述核苷酸序列表达的调控序列连接。10.权利要求1的组合物，其 中相比于相应野生型非脂质化0RF2086多肽，所述多肽包含N端Cys取代。11.一种组合物，其包含可通过如下方法获得的非丙酮酰化非脂质化ORF2086多肽，所述方法包括表达核苷酸序列，所述核苷酸序列编码具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的多肽:SEQ ID NO: 12,SEQ ID NO: 13,SEQ ID NO: 14,SEQ ID NO: 15,SEQ ID NO: 16,SEQ IDNO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO:20 及 SEQ ID NO:21，其中在位置 I 处的半胱氨酸缺失，其中所述核苷酸序列可操作地连接于能够在细菌细胞中表达的表达系统。12.权利要求O的组合物，其中所述细菌细胞为大肠杆菌(E.coli)。13.一种组合物，其包含包括SEQ ID N0:49所示的氨基酸序列的分离的多肽，及包括SEQ ID N0:44所示的氨基酸序列的分离的多肽。14.权利要求1至13中任一项的组合物，其中所述组合物为免疫原性组合物。15.权利要求13的组合物，其还包含血清群B脑膜炎奈瑟球菌(Neisseriameningitidis)的 0RF2086 亚家族 A 多肽。16.权利要求1至13中任一项的组合物，其中所述组合物在哺乳动物中引发针对血清群B脑膜炎奈瑟球菌的0RF2086亚家族B多肽的杀细菌免疫应答。17.一种分离的多肽，其包含SEQ ID NO:...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·S·安德森，S·K·霍伊塞思，K·U·扬森，J·K·莫兰，M·E·鲁彭，
申请(专利权)人：惠氏有限责任公司，
类型：
国别省市：