多价肺炎球菌多糖－蛋白质缀合物组合物制造技术

描述了具有13种不同的多糖－蛋白质缀合物和任选地基于铝的佐剂的免疫原性组合物。每种缀合物含有缀合到载体蛋白的从不同血清型的肺炎链球菌(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F)制备的荚膜多糖。配制为疫苗的免疫原性组合物总体上增加对婴儿和幼儿中肺炎球菌疾病的覆盖，并且提供了对血清型6A和19A的覆盖，其不依赖于血清群交叉保护的限制。

【技术实现步骤摘要】
多价肺炎球菌多糖－蛋白质缀合物组合物本申请是申请日为2006年3月31日、专利技术名称为“多价肺炎球菌多糖－蛋白质缀合物组合物”的中国专利申请201210192553.2的分案申请。专利
本专利技术一般涉及医学领域，更具体地涉及微生物学、免疫学、疫苗和通过免疫预防细菌病原体的感染。专利技术背景肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)是世界上婴儿和幼儿中脑膜炎、肺炎和严重侵入性疾病的主要病因。多年前就批准了多价肺炎球菌多糖疫苗并且已经证明其在老年人和高危病人中预防肺炎球菌疾病是有价值的。然而，婴儿和幼儿对多数肺炎球菌多糖应答很弱。7价肺炎球菌缀合疫苗(7vPnC,)是第一种表明对婴儿和幼儿中侵入性疾病和中耳炎高度免疫原性和有效的疫苗。该疫苗现在在世界上许多国家被批准。Prevnar含有来自血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F的荚膜多糖，每种多糖缀合到称作CRM197的载体蛋白。Prevnar在美国、欧洲和世界的其他地区分别覆盖约80-90％、60-80％和40-80％侵入性肺炎球菌疾病(IPD)[1,2]。Prevnar的引入后数年中收集的监视数据已经清楚地表明如所预期的，在美国婴儿中侵入性肺炎球菌疾病减少(图1)[3,4]。在Prevnar引入前美国婴儿中进行的IPD监视表明由于血清群6和19的疾病的大部分是由于6A(约1/3)和19A(约1/4)血清型[5,6]。在Prevnar批准后，在美国进行的肺炎球菌侵入性疾病监视表明大部分的疾病仍然规因于血清型6A和19A(图1)[3]。此外，这两种血清型造成比血清型1、3、5和7F总和还要多的侵入性疾病病例(100,000个2岁以下儿童中8.2对3.3例)。此外，血清型6A和19A与高比率的抗生素抗性有关(图2)[7,8,9]。尽管随着更多儿童被免疫，可能血清群交叉保护将导致血清型6A和19A疾病的下降，但是有证据表明该下降将有限制，并且由于这些血清型引起的疾病的很大负担将保持(见下文)。考虑到由于血清型1、3、5、6A、7F和19A的侵入性肺炎球菌疾病的相对负担和重要性，向Prevnar制剂中加入这些血清型将在美国和欧洲增加侵入性疾病的覆盖率到>90％，在亚洲和拉丁美洲高达70％-80％。该疫苗将显著扩大Prevnar的覆盖度，并且提供对6A和19A的覆盖，其不依赖于血清群交叉保护的限制。专利技术概述因此，本专利技术一般地提供了包含13种不同的多糖－蛋白质缀合物的多价免疫原性组合物，其中每种缀合物含有缀合到载体蛋白的来自不同血清型的肺炎链球菌的荚膜多糖，以及生理学上可接受的载体。任选地，在该制剂中包含佐剂，如基于铝的佐剂。更特别地，本专利技术提供了13价肺炎球菌缀合物(13vPnC)组合物，其包含7vPnC疫苗(4、6B、9V、14、18C、19F和23F)中的7种血清型加上6种额外的血清型(1、3、5、6A、7F和19A)。本专利技术还提供了多价免疫原性组合物，其中荚膜多糖来自肺炎链球菌的血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F并且载体蛋白是CRM197。本专利技术还提供了多价免疫原性组合物，其中荚膜多糖为肺炎链球菌的血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F，载体蛋白是CRM197，并且佐剂是基于铝的佐剂，如磷酸铝、硫酸铝和氢氧化铝。在本专利技术的具体实施方案中，佐剂是磷酸铝。本专利技术还提供了多价免疫原性组合物，其包含多糖－蛋白质缀合物以及生理学上可接受的载体，其中每种缀合物包含缀合到载体蛋白的来自肺炎链球菌的不同血清型的荚膜多糖，并且所述荚膜多糖从血清型3和至少一种额外的血清型制备。在该多价免疫原性组合物的一个实施方案中，额外的血清型选自血清型1、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、和23F。在另一实施方案中，载体蛋白是CRM197。在再一个实施方案中，组合物包含佐剂，如选自磷酸铝、硫酸铝和氢氧化铝的基于铝的佐剂。在一个具体实施方案中，佐剂是磷酸铝。本专利技术还提供了多价免疫原性组合物，其包含多糖－蛋白质缀合物与生理学上可接受的载体，其中每种缀合物包含缀合到载体蛋白的来自肺炎链球菌的不同血清型的荚膜多糖，并且该荚膜多糖从血清型4、6B、9V、14、18C、19F、23F和至少一种额外的血清型制备。在该多价免疫原性组合物的一个实施方案中，额外的血清型选自血清型1、3、5、6A、7F和19A。在另一实施方案中，载体蛋白是CRM197。在再一个实施方案中，组合物包含佐剂，如选自磷酸铝、硫酸铝和氢氧化铝的基于铝的佐剂。在一个具体实施方案中，佐剂是磷酸铝。本专利技术还提供了诱导对肺炎链球菌荚膜多糖缀合物的免疫应答的方法，其包括对人施用免疫有效量的前述任一种免疫原性组合物。本专利技术还提供了施用的任一种免疫原性组合物是单次的0.5mL剂量，其经配制成含有：除了4μg6B外，2μg每种糖；约29μgCRM197载体蛋白；0.125mg元素铝(0.5mg磷酸铝)佐剂；和作为赋形剂的氯化钠和琥珀酸钠缓冲剂。附图简述图1描绘了在美国年龄<2岁的儿童从基线(1998/1999)到2001年按照血清型的IPD比率的改变。图2描绘了在<5岁(1998)的儿童中具有青霉素(PCN)抗性的链球菌分离菌的分布。图3描绘了来自D118-P16Prevnar试验的第三次剂量后OPA的倒数累积分布曲线(RCDC)。专利技术详述Prevnar血清型4、6B、9V、14、18C、19F、23F的包括来自1995-1998年间IPD监视的数据估计Prevnar中的7种血清型造成<2岁年龄的儿童中约82％的IPD[5]。在加利福尼亚北部功效试验地点，Prevnar血清型占婴儿和幼儿中所有IPD病例的90％[10]。自从在2000年引入Prevnar疫苗，由于该疫苗血清型引起的疾病的下降，总的IPD率显著降低[3,4]。因此，在此时没有理由从下一代肺炎球菌缀合疫苗除去任一种Prevnar血清型，而是加入血清型以得到更宽的覆盖范围。血清型1、3、5和7F的包括在美国，5岁以下儿童中血清型1引起的IPD率<2％，对于血清型3和7F的每一种大概相同[1,6]。血清型1和5占具有侵入性肺炎球菌疾病的高危美国人口中IPD的较高发病率。特别地，血清型1引起阿拉斯加<2岁的本地儿童中3.5％的IPD，和2－4岁儿童中18％的IPD[11]。血清型1和血清型5在世界的其他地方和发达国家的土著人口中显著致病[12,13,14]。与其他肺炎球菌血清型相比，血清型1也与更严重的疾病有关[15]。该观察是基于美国和欧洲之间病例鉴定率的差异，和医疗实践中相关的差异。总体上，IPD的发病率在欧洲低于美国。然而，在欧洲血清型1引起的IPD的百分比不成比例地高于美国(分别为6-7％与1-2％)。在欧洲，血液培养物主要从住院儿童得到。在美本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.制备肺炎链球菌缀合物的方法，包括步骤：/n通过在高碘酸钠存在下进行氧化，化学活化从血清型6A、6B、7F、19A、19F或23F纯化的肺炎球菌荚膜多糖，使所述多糖能够与载体蛋白反应；以及/n通过加入氰基硼氢钠使所述活化的多糖与所述载体蛋白缀合，形成糖缀合物，其中所述缀合在二甲亚砜(DMSO)中进行。/n

【技术特征摘要】
20050408 US 60/669,6051.制备肺炎链球菌缀合物的方法，包括步骤：
通过在高碘酸钠存在下进行氧化，化学活化从血清型6A、6B、7F、19A、19F或23F纯化的肺炎球菌荚膜多糖，使所述多糖能够与载体蛋白反应；以及
通过加入氰基硼氢钠使所述活化的多糖与所述载体蛋白缀合，形成糖缀合物，其中所述缀合在二甲亚砜(DMSO)中进行。


2.权利要求1的方法，其中所述载体蛋白是CRM197。


3.权利要求1或2的方法，其中缀合后纯化多糖-蛋白质缀合物。


4.权利要求3的方法，其中将各种糖缀合物纯化后将它们混合以配制免疫原性组合物。


5.制备多价免疫原性组合物的方法，包括权利要求1的从肺炎链球菌血清型6A、6B、7F、19A、19F和23F制备糖缀合物的步骤。


6.权利要求5的方法，进一步包括根据包含以下步骤的方法从血清型1、3、4、5、9V和14制备糖缀合物的步骤：
通过在高碘酸钠存在下进行氧化，化学活化从血清型1、3、4、5、9V或14纯化的肺炎链球菌荚膜多糖，使所述多糖能够与CRM197反应；以及
通过加入氰基硼氢钠使所述活化的多糖与所述CRM197缀合，形成糖缀合物，其中所述缀合在二甲亚砜(DMSO)中进行。


7.权利要求5或6的方法，其中将各种糖缀合物纯化后将它们混合以配制免疫原性组合物。


8.制备多价免疫原性组合物的方法，所述组合物包含13种不同的多糖-蛋白质缀合物，以及生理学上可接受的载体，其中每种缀合物包含缀合到载体蛋白的来自不同血清型的肺炎链球菌的荚膜多糖，其中所述荚膜多糖从血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F制备，其中所述载体蛋白是CRM197，其中将各种糖缀合物纯化后将它们混合以配制免疫原性组合物，并且其中根据权利要求1-4任一项的方法制备所述血清型6A、6B、7F、19A、19F和/或23F多糖-蛋白质缀合物。


9.权利要求8的方法，其中根据权利要求1-4任一项的方法制备所述血清型6A、6B、7F、19A、19F和23F多糖-蛋白质缀合物。


10.根据权利要求1-4任一项的方法制备的肺炎链球菌缀合物。


11.制备多价免疫原...

【专利技术属性】
技术研发人员：W·P·豪斯多夫，G·R·西贝尔，P·R·帕拉迪索，
申请(专利权)人：惠氏有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US