真骨鱼恒定链癌症疫苗制造技术

本发明专利技术涉及多肽、编码这种多肽的多核苷酸、包含这种多核苷酸的载体、包含这种多核苷酸的载体的集合以及这种多肽、多核苷酸、载体用于治疗或预防疾病，特别是肿瘤疾病的用途，所述多肽包含任选地与一种或多于一种抗原融合的真骨鱼恒定链片段或与一种或多于一种抗原或其抗原片段融合的真骨鱼恒定链。真骨鱼恒定链多肽或其片段用作“T细胞增强子”，其将非免疫原性抗原序列转化为免疫原性T细胞抗原。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】真骨鱼恒定链癌症疫苗本专利技术涉及多肽、编码这种多肽的多核苷酸、包含这种多核苷酸的载体、包含这种多核苷酸的载体的集合以及这种多肽、多核苷酸、载体用于治疗或预防增生性疾病，优选癌症、病毒性疾病、真菌性疾病或细菌性疾病的用途，所述多肽包含任选地与一种或多于一种抗原融合的真骨鱼恒定链片段或与一种或多于一种抗原或其抗原片段融合的真骨鱼恒定链。真骨鱼恒定链多肽或其片段用作“T细胞增强子”，其将非免疫原性抗原序列转化为免疫原性T细胞抗原。专利技术背景有时疫苗引起次优或无T细胞免疫应答。这种T细胞免疫应答诱导不良的现象在针对抗原的疫苗接种的情况下更常见，所述抗原是完全自分子(selfmolecule)(例如癌症特异性抗原)或部分自分子(例如癌症特异性新抗原)。癌症特异性新抗原主要衍生自基因编码区的点突变，这导致了造成一种氨基酸变化的非同义单核苷酸变体。蛋白质序列中的单一氨基酸变化很少产生能够诱导有效免疫应答的新表位。在大部分情况下，这种小的变化完全无法产生新表位或可能产生非常弱的表位。因为预先存在的针对自身抗原的中枢耐受，所以通过疫苗接种来诱导针对癌症特异性抗原的有效免疫应答仍是具有挑战性的任务。为了克服癌症特异性抗原和新抗原的免疫原性缺乏或不良，已经采用了几种策略以挽救一些基因疫苗的免疫原性缺乏或不良。恒定链已经显示在基因疫苗接种的情况下增强CD8+T细胞的诱导。恒定链是主要组织相容性复合体(MHC)II类分子的分子伴侣蛋白质，是其成熟和组装所必需的。INV还在呈递抗原肽方面发挥作用，并且已经表明当在基因疫苗接种的情况下当T细胞与抗原融合时增加了对T细胞的诱导。已经描述了利用表达与INV融合的卵清蛋白的慢病毒载体提高的免疫能力(Rowe等人2006MolTher13(2)310-9)。然后，各种报告记录了表达INV融合抗原的人腺病毒5和质粒DNA载体对CD8+T细胞应答的增强诱导。在癌症疫苗接种中，重要的是避免肿瘤通过出现不能被疫苗诱导的T细胞识别的新的癌症特异性抗原而逃脱。癌症疫苗在治疗癌症方面的挑战是诱导能够立刻识别和消除尽可能多的癌细胞的免疫T细胞的多样性群体，以减少癌细胞“逃脱”T细胞应答的机会。因此，期望疫苗编码相当大量的癌症特异性抗原。这与最近描述的基于癌症特异性新抗原的个性化疫苗方法特别相关。为了优化成功概率，疫苗应该靶向尽可能多的新抗原，然而载体的最大插入物尺寸受到限制。全长INV序列或其大片段占据了疫苗抗原插入物的相对大的部分。因此，在抗癌疫苗接种的情况下，特别是当在疫苗中使用几种癌症特异性抗原时，使用短多肽作为T细胞增强子是优选的。基于腺病毒的基因疫苗接种平台，特别是类人猿衍生的腺病毒(GAd)的病毒载体显示对诱导T细胞应答非常有效，并且类人猿衍生的腺病毒(GAd)适合于以人工基因的格式编码大的抗原，所述人工基因由编码一个接一个相连的不同蛋白质片段的多核苷酸组成(Borthwick，N.等人，MolTher，2014.22(2)：第464-75页)。出人意料地，当用于癌症特异性新抗原时，不能诱导T细胞介导的免疫应答。本专利技术人确定了能够恢复免疫原性的特异性INV序列。这种INV序列适于克服癌症特异性新抗原的免疫原性缺乏或不良。特别是确定了非人真骨鱼(Teleostei)INV的两种短片段都不包含作为有效T细胞增强子的跨膜结构域。在接种疫苗的情况下，使用人INV或动植物种类史密切相关物种的INV可能导致针对该自身序列的免疫应答的不期望的诱导。自身免疫应答在这种情况下将针对表达INV的正常组织。本专利技术人出人意料地发现真骨鱼的INV虽然与哺乳动物的INV完全不同，但增加了哺乳动物中针对抗原的T细胞应答，该T细胞应答增强效果作用在与真骨鱼恒定链融合的多种抗原上并且真骨鱼INV的短片段已经足以引起这种应答。因此，本专利技术特别提供了：(i)哺乳动物中针对抗原的T细胞应答的改善增强子，其中引起针对健康组织的不期望的T细胞应答的可能性降低，(ii)针对多种抗原的T细胞应答的增强子，和(iii)能够引发T细胞的短片段，所述T细胞使融合大量抗原或其抗原片段的能力最大化。
技术实现思路
在本专利技术的第一方面，本专利技术涉及多肽，其包含：(a)真骨鱼的恒定链(INV)的片段，其包含或组成为真骨鱼INV的膜近端结构域(MPD)的16个至27个连续氨基酸，其中该片段具有T细胞应答增强子活性并且MPD的特征在于选自以下的氨基酸序列：(i)NQRX1DIKSLEEQX2SX3LX4X5X6X7TX8GRSX9X10(SEQIDNO：001)其中X1为G或N，X2为H或N，X3为G或N，X4为N或Q，X5为E或A，X6为Q或E，X7为L或M，X8为K或R，X9为A或V和X10为S或A；其中该片段优选与SEQIDNO：3具有至少60％的一致性；或(ii)DQKQQIQZ1LQZ2Z3NQRZ4EKQZ5Z6Z7RZ8RZ9S(SEQIDNO：8)其中Z1为G或D，Z2为T或A，Z3为T或S，Z4为L或M，Z5为M或V，Z6为G或S，Z7为Q或L，Z8为P或S和Z9为E或V；其中该片段优选与SEQIDNO：10具有至少60％的一致性；和任选一种或多于一种抗原和/或其一种或多于一种抗原片段；或(b)全长真骨鱼INV和一种或多于一种抗原和/或其一种或多于一种抗原片段，所述全长真骨鱼INV选自SEQIDNO：2、SEQIDNO：5、SEQIDNO：9或SEQIDNO：12，或其变体，其具有T细胞应答增强子活性，其中变体的MPD的氨基酸序列与SEQIDNO：3或SEQIDNO：10具有至少60％的一致性。在第二方面，本专利技术还涉及编码根据本专利技术的第一方面的多肽的多核苷酸，其中多核苷酸为DNA或RNA，优选DNA。在第三方面，本专利技术涉及包含根据本专利技术的第二方面的多核苷酸的载体。在第四方面，本专利技术涉及两种或多于两种不同载体的集合，其中每种不同的载体包含根据本专利技术的第二方面的多核苷酸，所述多核苷酸编码根据本专利技术的第一方面的多肽。在第五方面，本专利技术涉及药物组合物，其包含本专利技术的第一方面的多肽、本专利技术的第二方面的多核苷酸或本专利技术的第三方面或第四方面的载体/载体的集合、药学上可接受的赋形剂和任选的一种或多于一种佐剂。在第六方面，本专利技术涉及试剂盒，其包含本专利技术的第五方面的药物组合物和分别包装的至少一种免疫调节剂，或编码免疫调节剂的至少一种多核苷酸，或包含编码免疫调节剂的多核苷酸的载体。在第七方面，本专利技术涉及根据第一方面的多肽、根据第二方面的多核苷酸、根据第三方面或第四方面的载体或载体的集合、或根据第五方面或第六方面的药物组合物或包含这种药物组合物的试剂盒用于预防或治疗增殖性疾病，优选癌症、病毒性疾病、真菌性疾病或细菌性疾病的用途。附图说明在下文中，描述了本说明书中包括的附图的内容。在本上下文中，还请参考上文和/或下文的本专利技术的详细描述。图1：编码与penta抗原的N末端相连的BP和PO全长恒定链(BP_INVFL本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽，其包含：/n(a)真骨鱼的恒定链(INV)的片段，所述片段包含或组成为真骨鱼INV的膜近端结构域(MPD)的16个至27个连续氨基酸，其中所述片段具有T细胞应答增强子活性并且MPD的特征在于选自以下的氨基酸序列：/n(i)NQRX

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181019 EP 18201541.21.一种多肽，其包含：
(a)真骨鱼的恒定链(INV)的片段，所述片段包含或组成为真骨鱼INV的膜近端结构域(MPD)的16个至27个连续氨基酸，其中所述片段具有T细胞应答增强子活性并且MPD的特征在于选自以下的氨基酸序列：
(i)NQRX1DIKSLEEQX2SX3LX4X5X6X7TX8GRSX9X10(SEQIDNO：1)
其中
X1为G或N，X2为H或N，X3为G或N，X4为N或Q，X5为E或A，X6为Q或E，X7为L或M，X8为K或R，X9为A或V和X10为S或A；
其中所述片段优选与SEQIDNO：003具有至少60％的一致性；或
(ii)DQKQQIQZ1LQZ2Z3NQRZ4EKQZ5Z6Z7RZ8RZ9S(SEQIDNO：8)
其中
Z1为G或D，Z2为T或A，Z3为T或S，Z4为L或M，Z5为M或V，Z6为G或S，Z7为Q或L，Z8为P或S和Z9为E或V；
其中所述片段优选与SEQIDNO：10具有至少60％的一致性；
和任选的一种或多于一种抗原和/或其一种或多于一种抗原片段；
或
(b)全长真骨鱼INV和一种或多于一种抗原和/或其一种或多于一种抗原片段，所述全长真骨鱼INV选自SEQIDNO：2、SEQIDNO：5、SEQIDNO：9或SEQIDNO：12，或其变体，其具有T细胞应答增强子活性，其中变体的MPD的氨基酸序列与SEQIDNO：3或SEQIDNO：10具有至少60％的一致性。


2.根据权利要求1所述的多肽，其中：
(a)根据权利要求1所述的替代方案(a)(i)的MPD的氨基酸序列为SEQIDNO：3和SEQIDNO：6中的任一种；
(b)根据权利要求1所述的替代方案(a)(ii)的MPD的氨基酸序列为SEQIDNO：10和SEQIDNO：013中的任一种；和/或
(c)根据权利要求1所述的替代方案(b)的真骨鱼恒定链的氨基酸序列为SEQIDNO：2和SEQIDNO：9中的任一种。


3.根据权利要求1(a)或权利要求2(a)或(b)所述的多肽，其中片段由MPD的至少16个至27个N末端氨基酸和紧邻MPD的N-末端的真骨鱼INV的跨膜结构域(TMD)的1个至26个连续氨基酸组成，其中真骨鱼INV的TMD优选特征在于以下的氨基酸序列(SEQIDNO：15)
AB1KB2B3GB4TB5LB6CB7LB8B9B10QB11B12B13B14YB15B16B17
其中
B1为V、L或Y，B2为V或I，B3为V或A，B4为L、I或F，B5为V、T或L，B6为A或V，B7为V或L，B8为V或I，B9为M、S或A，B10为S、A或G，B11为A或V，B12为M或F，B13为I或T，B14为I或A，B15为F或M，B16为L、M或V，B17为V、F或L。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，其中在每种情况下抗原独立地选自癌症特异性抗原、癌症特异性新抗原、病毒蛋白质、细菌蛋白质或真菌蛋白质，其中优选：
(i)多肽包含至少五种不同的抗原和/或其抗原片段；
和/或
(ii)一种或多于一种抗原和/或其一种或多于一种抗原片段是根据权利要求1所述的替代方案(a)的INV或根据权利要求1所述的替代方案(b)所述的全长INV的片段的C末端。


5.一种编码根据权利要求1至4中任一项所述的多肽的多核苷酸，其中所述多核苷酸为DNA或RNA，优选为DNA。


6.一种载体，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿尔弗雷多·尼科西亚，埃莉萨·斯卡尔塞利，阿明·拉姆，
申请(专利权)人：NOUSCOM股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH