疫苗的T细胞增强剂制造技术

本发明专利技术涉及包含任选地与一种或多于一种抗原融合的真骨鱼类恒定链片段或与一种或多于一种抗原或其抗原片段融合的真骨鱼类恒定链的多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多核苷酸的载体、包含此类多核苷酸的载体集合以及此类多肽、多核苷酸、载体用于治疗或预防疾病，特别是肿瘤疾病的用途。真骨鱼类恒定链多肽或其片段用作将非免疫原性抗原序列转化为免疫原性T细胞抗原的“T细胞增强剂”。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】疫苗的T细胞增强剂本专利技术涉及包含任选地与一种或多于一种抗原融合的真骨鱼类恒定链片段或与一种或多于一种抗原或其抗原片段融合的真骨鱼类恒定链的多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多核苷酸的载体、包含此类多核苷酸的载体集合以及此类多肽、多核苷酸、载体用于治疗或预防疾病，特别是肿瘤疾病的用途。真骨鱼类恒定链多肽或其片段用作将非免疫原性抗原序列转化为免疫原性T细胞抗原的“T细胞增强剂”。专利技术背景有时疫苗会引起次优T细胞免疫应答或不引起T细胞免疫应答。在接种靶向完全是自身分子的抗原，例如癌症特异性抗原，或部分自身抗原，例如癌症特异性新抗原的疫苗的情况下，更经常观察到这种T细胞免疫应答的不良诱导现象。癌症特异性新抗原主要来自基因编码区的点突变，其导致非同义的单核苷酸变异，这导致了一个氨基酸的改变。蛋白质序列中的单个氨基酸变化极少产生能够诱导有效免疫应答的新表位。在大多数情况下，这种微小变化根本不会产生新表位，或者可能产生非常弱的新表位。由于预先存在对自身抗原的中枢耐受，因此通过疫苗接种诱导针对癌症特异性抗原的有效免疫应答仍然是一项艰巨的任务。为了克服癌症特异性抗原和新抗原的免疫原性缺乏或不良，已经采用了几种策略来拯救一些基因疫苗的免疫原性缺乏/不良。在基因疫苗接种的情况下，恒定链(INV)显示出增强CD8+T细胞诱导的作用。恒定链是主要组织相容性复合体(MHC)II类分子的分子伴侣蛋白，是其成熟和组装所必需的。INV在呈递抗原肽中也发挥作用，并且已经证明在基因疫苗的背景下，其与抗原融合时，可以增加T细胞的诱导。已经描述了用表达与INV融合的卵清蛋白的慢病毒载体提高了免疫能力(Rowe等人2006MolTher13(2)310-9)。随后，各种报道记录了人腺病毒5和表达INV融合抗原的质粒DNA载体对CD8+T细胞应答的增强诱导作用。在癌症疫苗接种中，重要的是要避免由于疫苗诱导的T细胞无法识别出现的新型癌症特异性抗原而引起的肿瘤逃逸。癌症疫苗治疗癌症的挑战是诱导能够同时识别和消除尽可能多的癌细胞的多种免疫T细胞群，以减少癌细胞“逃避”T细胞应答的机会。因此，期望疫苗编码相当大量的癌症特异性抗原。这与最近描述的基于癌症特异性新抗原的个性化疫苗方法特别相关。为了优化成功的可能性，疫苗应靶向尽可能多的新抗原，但是载体的最大插入片段大小是有限的。全长INV序列或其大片段占据疫苗抗原插入物的相对较大部分。因此，在抗癌疫苗接种的情况下，特别是在疫苗中使用几种癌症特异性抗原时，优选使用短多肽作为T细胞增强剂。基于腺病毒，特别是类人猿衍生的腺病毒(GAd)病毒载体的基因疫苗接种平台已显示出对诱导T细胞应答是非常有效的，并且类人猿衍生的腺病毒适用于以由依次连接的不同蛋白质的多核苷酸编码片段组成的人工基因形式编码大抗原(Borthwick，N.等人，MolTher，2014.22(2)：p.464-75)。出人意料的是，当用于癌症特异性新抗原的情况下，没有诱导出T细胞介导的免疫应答。本专利技术人鉴定了能够恢复免疫原性的特定INV序列，其在本申请中也称为“T细胞增强剂氨基酸序列”。这样的T细胞增强剂氨基酸序列适合克服癌症特异性新抗原的免疫原性缺乏或不良。特别地，鉴定了非人真骨鱼类(Teleostei)INV的两个短片段，两者均不包含用作有效T细胞增强剂的跨膜结构域。在疫苗接种的情况下，使用人INV或系统发育上密切相关的物种的INV可能导致不希望的诱导针对该自身序列的免疫应答。在这种情况下，自身免疫应答将会针对表达INV的正常组织。本专利技术人出人意料地发现真骨鱼类的INV尽管与哺乳动物的INV有很大的不同，但是增加了针对哺乳动物中的抗原的T细胞应答，这种T细胞应答增强作用施加于与真骨鱼类恒定链融合的多种抗原上，并且已经是短片段的真骨鱼类INV便足以引起这种应答。因此，本专利技术尤其提供：(i)改良的针对哺乳动物中的抗原的T细胞应答的增强剂，其降低了引起针对健康组织的有害T细胞应答的可能性，(ii)针对多种抗原的T细胞应答的增强剂，以及(iii)能够引发T细胞应答的短片段，该短片段最大程度增强与大量抗原或其抗原片段融合的能力。
技术实现思路
在第一方面，本专利技术提供了一种多肽，其包含：(a)具有T细胞应答增强剂活性的真骨鱼类恒定链(INV)的片段和任选的一种或多于一种抗原或其抗原片段，该真骨鱼类恒定链的片段包含或组成为真骨鱼类INV的膜近端结构域(MPD)的16个至27个氨基酸，其中优选地，MPD的特征在于以下氨基酸序列：X1QKX2QIHTLQKX3SX4RX5X6X7QX8TRX9SX10AV其中X1是G、D、S或N；X2是E或Q；X3是N或S；X4是D或E；X5是M或L；X6是G、N、S或T；X7是K或R；X8是L或M；X9是S、T或A；和X10是Q或H；其中MPD的16个至27个氨基酸优选与SEQIDNO：7至少70％相同；或(b)具有T细胞应答增强剂活性的全长真骨鱼类INVSEQIDNO：1或其变体以及一种或多于一种抗原或其抗原片段，其中所述变体的MPD的氨基酸序列与SEQIDNO：7至少80％相同。在第二方面，本专利技术涉及编码根据本专利技术第一方面的多肽的多核苷酸。在第三方面，本专利技术涉及包含根据本专利技术第二方面的多核苷酸的载体。在第四方面，本专利技术涉及两种或多于两种不同载体的集合，其中所述不同载体各自包含根据本专利技术第二方面的多核苷酸，该多核苷酸编码根据本专利技术第一方面的不同多肽。在第五方面，本专利技术涉及药物组合物，其包含本专利技术第一方面的多肽、本专利技术第二方面的多核苷酸或本专利技术第三方面的载体、或本专利技术第四方面的载体的集合，和药学上可接受的赋形剂以及任选的一种或多于一种佐剂。在第六方面，本专利技术涉及试剂盒套装，其包含本专利技术第五方面的药物组合物，以及分别包装的至少一种免疫调节剂例如检查点分子的调节剂(MCM)、或至少一种编码免疫调节剂例如MCM的多核苷酸、或包含编码免疫调节剂例如MCM的多核苷酸的载体。在第七方面，本专利技术涉及根据本专利技术第一方面的多肽、根据本专利技术第二方面的多核苷酸、或根据本专利技术第三或第四方面的载体或载体的集合，其用作药物。在第八方面，本专利技术涉及根据本专利技术第一方面的多肽、根据本专利技术第二方面的多核苷酸、或根据本专利技术第三或第四方面的载体或载体的集合、或根据本专利技术的第五方面的药物组合物或根据本专利技术第六方面的包含那些药物组合物的试剂盒，其用于预防或治疗增生性疾病，优选癌症、病毒性疾病或细菌性疾病。附图说明图1：GAd载体在5x107vp或5x108vp剂量下的免疫原性。载体编码连接到CT26pentatope抗原的鳜鱼INV全长(MF_INV_FL)、鳜鱼INV短版本(残基1至81，MF_INV_SH)、鳜鱼INV变体A(残基62至88、MF_INV_A)和鳜鱼INV变体B(残基66至81，MF_INV_B)。Penta表示CT26pentatope抗原没有鳜鱼INV序本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽，其包含：/n(a)真骨鱼类恒定链(INV)的片段和任选的一种或多于一种抗原和/或其一种或多于一种抗原片段，该恒定链的片段包含或组成为真骨鱼类INV的膜近端结构域(MPD)的16个至27个氨基酸，其中MPD的特征在于以下氨基酸序列(SEQ ID NO：31)：/nX

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171103 EP 17200036.6;20171229 EP 17211235.11.一种多肽，其包含：
(a)真骨鱼类恒定链(INV)的片段和任选的一种或多于一种抗原和/或其一种或多于一种抗原片段，该恒定链的片段包含或组成为真骨鱼类INV的膜近端结构域(MPD)的16个至27个氨基酸，其中MPD的特征在于以下氨基酸序列(SEQIDNO：31)：
X1QKX2QIHTLQKX3SX4RX5X6X7QX8TRX9SX10AV
其中
X1是G、D、S或N；
X2是E或Q；
X3是N或S；
X4是D或E；
X5是M或L；
X6是G、N、S或T；
X7是K或R；
X8是L或M；
X9是S、T或A；和
X10是Q或H；
其中MPD的16个至27个氨基酸优选与SEQIDNO：7至少70％相同；
或
(b)具有T细胞应答增强剂活性的全长真骨鱼类INVSEQIDNO：1或其变体以及一种或多于一种抗原和/或其一种或多于一种抗原片段，其中所述变体的MPD的氨基酸序列与SEQIDNO：7至少80％相同。


2.根据权利要求1所述的多肽，其中：
(a)根据权利要求1的替代方案(a)的MPD的氨基酸序列是SEQIDNO：7至12中的任一个；或
(b)根据权利要求1的替代方案(a)的片段的氨基酸序列包含或组成为SEQIDNO：7至18中的任一个；或
(c)根据权利要求1的替代方案(b)的真骨鱼类恒定链的氨基酸序列是SEQIDNO：1至6中的任一个。


3.根据权利要求1(a)或权利要求2替代方案(a)或(b)所述的多肽，其中所述片段组成为MPD的至少16个至27个N末端氨基酸和：
(i)紧接在MPDN末端的真骨鱼类INV的跨膜结构域(TMD)的1个至26个连续氨基酸，其中真骨鱼类INV的TMD的特征优选在于以下氨基酸序列(SEQIDNO：32)：
AY1KY2AY3LTTLY4CLLY5Y6SQVFTAYY7VF
其中
Y1是L或F；
Y2是I或V；
Y3是G或A；
Y4是T或A；
Y5是L或V；
Y6是A或S；和
Y7是M或T；
和/或
(ii)紧接在MPDC末端的真骨鱼类INV的1个至19个连续氨基酸，其特征优选在于以下氨基酸序列(SEQIDNO：33)：
APZ1Z2MZ3Z4PMZ5SLPZ6Z7Z8DZ9Z10
其中
Z1是M、V或A；
Z2是R或K；
Z3是H、A或Q；
Z4是M或L；
Z5是N或S；
Z6是M或L；
Z7是M、L或V；
Z8是M或S；
Z9是F或Y；和
Z10是T或S。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，其中在每种情况下，所述抗原独立地选自癌症特异性抗原、癌症特异性新抗原或病毒蛋白、细菌蛋白，其中优选地：
(i)所述多肽包含至少五种不同的抗原和/或其抗原片段；
和/或
(ii)一种或多于一种抗原和/或其一种或多于一种抗原片段在根据权利要求1的替代方案(a)的INV片段的C末端或在根据权利要求1的替代方案(b)的全长INV的的C末端。


5.一种编码根据权利要求1至4中任一项所述的多肽的多核苷酸，其中所述多核苷酸优选为DNA或RNA，更优选为DNA。


6.一种载体，其包含根据权利要求5所述的多核...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿尔弗雷多·尼科西亚，埃莉萨·斯卡尔塞利，安东内拉·福尔戈里，阿明·拉姆，
申请(专利权)人：NOUSCOM股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH