猪瘟疫苗组合物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及与猪Fc片段融合的猪瘟抗原，并且更具体地，涉及通过使Fc片段与猪瘟抗原结合而具有自身免疫增强作用的疫苗组合物及其制备方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】猪瘟疫苗组合物及其制备方法
本专利技术涉及用于产生与猪Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白的表达载体、用该表达载体转化的转基因生物、从转基因生物分离的与猪Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白及其用途等。
技术介绍
经典猪瘟是由病原体(即经典猪瘟病毒(CSFV))引起的疾病，并且是一种传染病，其可感染猪而不是人或其他动物，但一旦被猪或野猪感染，则具有很高的传染性，没有治疗方法，并且具有很高的致死率，大多数受感染的猪都死了。经典猪瘟被世界动物卫生组织(OIE)列为非常重要的疾病，甚至在韩国，该病也被《预防传染性动物疾病法》列为I类牲畜流行病之一，并且是一种这样的传染病，由于死亡率和发病率很高，因此预防该传染病被认为是在没有消灭经典的猪瘟的情况下，足以保证养猪业的未来的重要问题。在韩国，疫苗接种是使用由作为减毒活病毒的LOM株制备的减毒活疫苗进行的疾病对策，但是专家和养猪户不断提出有关LOM疫苗的致病性和安全性的问题(韩国专利No.10-1642727)。作为引起人们关注LOM疫苗株安全性的代表性案例，2002年宣布消除了经典猪瘟，并实施了非疫苗接种政策，但2002年和2003年在全国范围内再次出现经典猪瘟，因此LOM疫苗接种于2004年对全国范围内的所有猪重新开始，并且在这种情况下，接种怀孕母猪后发生了许多流产和死产的案例，因此有些案例成为问题。此外，在济州岛上，该岛自1999年以来一直是经典的猪瘟非疫苗接种区，2004年分发了用作饲料添加剂的血粉制剂产品，同时又无意中被经典的猪瘟LOM疫苗株污染，并且在济州岛上300个养殖场中的150个养殖场，非常类似经典的猪瘟的症状在感染了该疫苗株的猪中发生了，甚至在对猪进行尸检期间，也出现了特定于实质器官的病变症状。最近，在2014年，证实猪瘟LOM疫苗株错误地分布在济州岛并接种到怀孕的母猪中，结果发生了流产和死产，并且LOM疫苗株垂直传播给胎儿，因此疫苗安全性的问题再次出现，并且需要一种有效的疫苗来代替LOM疫苗株。因此，对能够有效稳定地预防经典猪瘟的新型疫苗的需求不断增长。
技术实现思路
【技术问题】为了解决如上所述的相关技术中的问题而设计了本专利技术，并且本专利技术的目的是提供与猪Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白，包含该经典猪瘟抗原E2蛋白的疫苗组合物、其制备方法等。然而，本专利技术意图解决的技术问题不限于上述的技术问题，并且本专利技术相关的
中的普通技术人员根据以下描述将清楚地理解未提及的其他技术问题。【技术方案】本专利技术提供了一种预防经典猪瘟的疫苗组合物，其包括作为活性成分的与由SEQIDNo.4表示的猪Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白。在本专利技术的一个实施方案中，E2蛋白可以包括由SEQIDNo.18表示的氨基酸序列，但不限于此，只要E2蛋白是一种经典的猪瘟抗原即可。在本专利技术的另一实施方案中，E2蛋白的特征在于与Fc片段融合以具有自身免疫增强(自佐剂)作用和增加的溶解度。融合可以是抗原通过肽键与Fc片段的N端或C端连接的形式，但不受限于此，只要融合是Fc片段与抗原结合的形式即可。此外，本专利技术提供了用于预防经典猪瘟的饲料组合物，其包含作为活性成分的与由SEQIDNo.4表示的猪Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白。另外，本专利技术提供了预防或治疗经典猪瘟的方法，该方法包括向个体施用包含作为活性成分的与由SEQIDNo.4表示的猪Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白的组合物。此外，本专利技术提供了包含作为活性成分的与由SEQIDNo.4表示的猪Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白的组合物用于预防或治疗经典猪瘟的用途。此外，本专利技术提供了包含与由SEQIDNo.4表示的猪Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白的组合物在制备用于预防经典猪瘟的药物中的用途。另外，本专利技术提供了用于产生与Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白的重组表达载体，该重组表达载体包括编码由SEQIDNo.4表示的猪Fc片段的多核苷酸和编码经典猪瘟抗原E2蛋白的多核苷酸。在本专利技术的一个实施方案中，重组表达载体可以顺序连接以便在启动子基因、编码E2抗原的多核苷酸和编码Fc片段的多核苷酸的序列中可操作，或以便在启动子基因、编码Fc片段的多核苷酸和编码E2抗原的多核苷酸的序列中可操作。在本专利技术的另一个实施方案中，所述启动子是花椰菜花叶病毒衍生的35S启动子、花椰菜花叶病毒衍生的19SRNA启动子、植物的肌动蛋白启动子、泛素蛋白启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子、猿猴病毒40(SV40)启动子、呼吸道合胞病毒(RSV)启动子、延伸因子-1α(EF-1α)启动子、pEMU启动子、MAS启动子、组蛋白启动子、Clp启动子等等，但不受限于此。在本专利技术的另一实施方案中，重组表达载体可以进一步包括编码伴侣结合蛋白(BiP)的多核苷酸，编码His-Asp-Glu-Leu(HDEL)肽的基因，M17的5'非翻译区(5'UTR)位点基因等。在本专利技术的另一实施方案中，重组表达载体提高了与Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白的表达水平，并且与Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白具有自身免疫增强(自佐剂)作用和增加的溶解度。此外，本专利技术提供了用所述重组表达载体转化的转基因生物。在本专利技术的一个实施方案中，转基因生物可以是微生物，例如大肠杆菌，芽孢杆菌，沙门氏菌和酵母，昆虫细胞，包括人细胞在内的动物细胞，动物，例如小鼠，大鼠，狗，猴子，猪，马和牛，根癌土壤杆菌，植物等，该植物可以是粮食作物，包括水稻，小麦，大麦，玉米，大豆，马铃薯，红豆，燕麦和高粱；蔬菜作物，包括芥菜，大白菜，白萝卜，辣椒，草莓，西红柿，西瓜，黄瓜，白菜，东方甜瓜，南瓜，葱，洋葱和胡萝卜；特种作物，包括人参，烟草，棉花，芝麻，甘蔗，甜菜，紫苏，花生和油菜籽；水果，包括苹果，梨，枣，桃子，葡萄，橘子，柿子，李子，杏子和香蕉；开花植物，包括玫瑰，康乃馨，菊花，百合和郁金香等，但不受限于此，只要它可以是可以用本专利技术的重组表达载体转化的生物即可。另外，本专利技术提供了生产具有自身免疫增强作用的与Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白的方法，该方法包括：(a)培养转基因生物；(b)从转基因生物或培养液中分离与Fc片段融合的经典猪瘟E2蛋白，并纯化与Fc片段融合的经典猪瘟E2蛋白。转基因生物优选可以是细胞本身，也可以是包括该细胞的培养产物，并且培养液可以优选是在培养细胞后从中去除细胞的培养液，但不受限于此，只要其包括本专利技术的重组抗原即可。【有益效果】由于根据本专利技术的与Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白具有自身免疫增强作用，因此即使少量的疫苗组合物也可以显示出有效预防经典猪瘟的效果，而无需使用额外的免疫抗原佐剂，并且，通过增加抗原的溶解度和稳定性来促进抗原的分离和储存。此外，由于使用根据本专利技术的表达载体可以显著增加E2蛋白的生产量，因此期望能够高效地生产疫苗。附图说明图1是说明根据本专利技术的实施方案的pCAMBIA1300载体图的视图。图2是说明根据本专利技术的示本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于预防经典猪瘟的疫苗组合物，其包含作为活性成分的与由SEQ ID No.4表示的猪Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180919 KR 10-2018-01124451.一种用于预防经典猪瘟的疫苗组合物，其包含作为活性成分的与由SEQIDNo.4表示的猪Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白。


2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述E2蛋白包含由SEQIDNo.18表示的氨基酸序列。


3.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述E2蛋白与所述Fc片段融合以具有自身免疫增强(自佐剂)作用和增大的溶解度。


4.一种用于预防经典猪瘟的饲料组合物，其包含作为活性成分的与由SEQIDNo.4表示的猪Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白。


5.一种用于产生与Fc片段融合的经典猪瘟抗原E2蛋白的重组载体，该重组载体包含编码由SEQIDNo.4表示的猪Fc片段的多核苷酸和编码经典猪瘟抗原E2蛋白的多核苷酸。


6.根据权利要求5所述的重组载体，其中，所述E2蛋白包含由SEQIDNo.18表示的氨基酸序列。


7.根据权利要求5所述的重组载体，其中，所述重组载体包含启动子基因、编码经典猪瘟抗原E2蛋白的多核苷酸和编码猪Fc片段的多核苷酸按顺序连接的基因。


8.根据权利要求7所述的重组载体，其中，所述启动子是选自花椰菜花叶病毒衍生的35S启动子、花椰菜花叶病毒衍生的19SRNA启动子、植物的肌动蛋白启动子、泛素蛋白启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子、猿猴病毒40(SV40)启动子、呼吸...

【专利技术属性】
技术研发人员：李勇直，安东濬，崔世恩，宋载永，赵寅锈，
申请(专利权)人：巴伊沃爱普有限公司，韩国农林畜产食品部农林畜产检疫本部，
类型：发明
国别省市：韩国;KR