用于动物绝育或阉割的重组蛋白及包含该重组蛋白的疫苗组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种用于动物绝育或阉割的疫苗组合物，其包含其中融合有霍乱毒素B亚基(CTB)和促性腺激素释放激素(GnRH)的重组蛋白。更具体地，提供了：用于动物绝育或阉割并用于诱导针对GnRH的抗体的重组蛋白；用于生产重组蛋白的重组载体；用于动物绝育或阉割的疫苗组合物，该疫苗组合物包含该重组蛋白；以及通过使用该疫苗组合物进行动物绝育或阉割的方法。根据本发明专利技术的疫苗组合物在个体中诱导针对GnRH的抗体，从而使其卵巢或睾丸萎缩。因此，本发明专利技术能够以低成本、高安全性和最小的副作用来替代用于绝育和阉割的外科手术，并有益地用于动物绝育或阉割。动物绝育或阉割。动物绝育或阉割。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于动物绝育或阉割的重组蛋白及包含该重组蛋白的疫苗组合物


[0001]本专利技术涉及用于动物绝育的疫苗组合物，更特别是涉及用于动物绝育以诱导抗促性腺激素释放激素(GnRH)抗体的重组蛋白、用于产生该重组蛋白的重组载体、用于动物绝育的包括该重组蛋白作为活性成分的疫苗组合物，以及使用该疫苗组合物的绝育方法。
[0002]本申请要求2020年3月24日提交的韩国专利申请号10
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2020
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0035898的优先权和权益，该韩国专利申请的公开内容并入说明书中，其附图通过引用以其整体并入本文。

技术介绍

[0003]绝育是切除动物的性腺以消除生殖功能，并且是指通过切除雄性的睾丸或雌性的卵巢来使促性腺激素的分泌被切断，因而发生不孕不育并且第二性征不出现或退化的现象。绝育是为增加医学、生物学和畜牧业的研究和实用价值的目的而进行的。特别是在畜牧业中，主要对雄性进行绝育，不仅是为了治疗动物疾病，而且是为了增加其实用价值，这是因为卵巢切除极其困难且效果较差。已经受绝育的雄性动物性情温和温顺，由于失去繁殖能力能够将雄性和雌性动物一起饲养，肌肉纤维更细更软，从而提高肉质，并增加血肉与骨头的附着率，变得更薄，就像雌性动物一样。此外，绝育可降低公猪异味的产生，从而减少雄性气味。
[0004]绝育方法包括阴囊切开、精索静脉结扎、睾丸扭转、阴囊根部结扎、睾丸挤出、部分去势和无血去势(Burdizzo法)等手术方法，还包括对放射线的性腺施加一定量的放射线以使其失去能力的方法。然而，身体绝育在动物福利方面存在问题，因为它会给动物带来非常严重的疼痛和压力，因此瑞士、挪威、比利时和荷兰等欧洲国家在2009年左右决定禁止对动物进行身体绝育，韩国也在考虑采取与之类似的行动。
[0005]因此，最近，作为解决绝育手术问题的方法，正在积极研究使用疫苗的绝育方法。大多数使用疫苗的绝育方法是使用能够诱导对GnRH免疫反应的蛋白质进行的，这是因为从下丘脑分泌的GnRH刺激促卵泡激素释放激素(FSH)和促黄体激素(LH)从脑垂体的分泌。FSH促进卵泡成熟、雌激素分泌和精子发生，并且LH促进生殖器官的发育、睾酮分泌和排卵。此外，LH和FSH刺激雄性动物睾丸分泌雄烯酮，而雄烯酮在脂肪组织中积累，从而产生公猪异味。
[0006]作为迄今为止开发的绝育疫苗，有Improvac(辉瑞公司)，但它的缺点是不能诱导强烈的免疫反应。因此，本专利技术人在研究开发诱导比常规绝育疫苗更强的免疫反应的疫苗的同时，证实了本专利技术的CTB
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GnRH重组蛋白具有优于常规已知绝育疫苗的抗原性，从而表现出优异的抗GnRH的抗体形成作用和由此产生的对动物性成熟的强抑制作用，从而完成了本专利技术。

技术实现思路

[技术问题][0007]提供本专利技术以解决上述常规技术问题，开发了一种疫苗，其包括与载体蛋白融合以人工提高促性腺激素释放激素(GnRH)的抗原性的用于动物绝育的重组蛋白，从而本专利技术完成。
[0008]因此，本专利技术旨在提供一种用于动物绝育的疫苗组合物，其包含重组蛋白作为活性成分，在该重组蛋白中融合有霍乱毒素B亚基(CTB)和n个拷贝的促性腺激素释放激素(GnRH)，其中n是从1到20的整数。
[0009]本专利技术还涉及提供一种动物绝育的方法，该方法包括将根据本专利技术的疫苗组合物给药到除人之外的动物中。
[0010]本专利技术还旨在提供一种用于动物绝育的重组载体，其包含由SEQ ID NO：3的碱基序列组成的GnRH基因和由SEQ ID NO：5的碱基序列组成的CTB基因。
[0011]本专利技术还涉及提供使用根据本专利技术的重组载体制备的用于动物绝育的重组蛋白。
[0012]本专利技术还涉及提供用根据本专利技术的重组载体转化的转化体。
[0013]然而，本专利技术要解决的技术问题不限于上述问题，本领域普通技术人员将通过以下描述充分理解本文未描述的其他问题。[技术方案][0014]为实现上述本专利技术的目的，本专利技术提供一种用于动物绝育的疫苗组合物，其包含重组蛋白作为活性成分，在该重组蛋白中融合有CTB和n个拷贝的GnRH，其中n为从1到20的整数。
[0015]本专利技术还提供一种绝育方法，其包含将一种包括重组蛋白作为活性成分的疫苗组合物给药至除人之外的对象，在该重组蛋白中融合有CTB和n个拷贝的GnRH，其中n是1至20的整数。
[0016]本专利技术还提供了重组蛋白用于绝育的用途，在该重组蛋白中，融合有CTB和n个拷贝的GnRH并且n为1至20的整数。
[0017]此外，本专利技术提供了重组蛋白在制备用于绝育的疫苗中的用途，在该重组蛋白中融合有CTB和n个拷贝的GnRH并且n是1至20的整数。
[0018]在本专利技术的一个实施方案中，GnRH可以由SEQ ID NO：1的氨基酸序列组成，但本专利技术不限于此。
[0019]在本专利技术的另一个实施方案中，CTB可以由SEQ ID NO：4的氨基酸序列组成，但本专利技术不限于此。
[0020]在本专利技术的又一实施方案中，n可以为6，但本专利技术不限于此。
[0021]在本专利技术的又一个实施方案中，当n为6时，GnRH可以由SEQ ID NO：2的氨基酸序列组成，但本专利技术不限于此。
[0022]在本专利技术的又一个实施方案中，当n为2或更大时，GnRH可以使用丙氨酸
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甘氨酸
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丙氨酸接头相互连接，但本专利技术不限于此。
[0023]在本专利技术的一个实施方案中，在重组蛋白中，可以进一步融合猪Fc片段(pFc2)。
[0024]在本专利技术的另一个实施方案中，pFc2可以由SEQ ID NO：6的氨基酸序列组成，但本专利技术不限于此。
[0025]在本专利技术的又一实施方案中，CTB可以在GnRH的N端方向融合，并且pFc2可以在GnRH的C端方向融合，但本专利技术不限于此。
[0026]在本专利技术的一个实施方案中，在重组蛋白中，可以进一步融合伴侣结合蛋白(BiP)。
[0027]在本专利技术的另一实施方案中，BiP可由SEQ ID NO：8的氨基酸序列组成，但本专利技术不限于此。
[0028]在本专利技术的又一实施方案中，CTB可以在GnRH的N端方向融合，BiP可以在CTB的N端方向融合，但本专利技术不限于此。
[0029]在本专利技术的一个实施方案中，在重组蛋白中，His
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Asp
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Glu
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Leu(HDEL)可以进一步融合。
[0030]在本专利技术的另一实施方案中，HDEL可以由SEQ ID NO：11的碱基序列编码，但本专利技术不限于此。
[0031]在本专利技术的又一实施方案中，CTB可以在GnRH的N端方向融合，并且HDEL可以在GnRH的C端方向融合，但本专利技术不限于此。
[0032]另外，在本专利技术的一个实施方式中，在重组蛋白中，BiP、CTB、GnRH、pFc2和HDEL可以依次融合，但本专利技术不限于此。
[0033]在本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于动物绝育的疫苗组合物，所述疫苗组合物包含：作为活性成分的重组蛋白，其中融合有霍乱毒素B亚基(CTB)和n个拷贝的促性腺激素释放激素(GnRH)，其中n是1到20的整数。2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述GnRH由SEQ ID NO：1的氨基酸序列组成。3.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述CTB由SEQ ID NO：4的氨基酸序列组成。4.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中n为6。5.根据权利要求4所述的疫苗组合物，其中所述GnRH由SEQ ID NO：2的氨基酸序列组成。6.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，当n为2或更大时，所述GnRH通过丙氨酸
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甘氨酸
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丙氨酸接头相互连接。7.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中在所述重组蛋白中，进一步融合了猪Fc片段(pFc2)。8.根据权利要求7所述的疫苗组合物，其中所述pFc2由SEQ ID NO：6的氨基酸序列组成。9.根据权利要求8所述的疫苗组合物，其中所述CTB在GnRH的N端方向融合，并且所述pFc2在GnRH的C端方向融合。10.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中在所述重组蛋白中，进一步融合了伴侣结合蛋白(BiP)。11.根据权利要求10所述的疫苗组合物，其中所述BiP由SEQ ID NO：8的氨基酸序列组成。12.根据权利要求10所述的疫苗组合物，其中所述CTB在GnRH的N端方向融合，并且所述BiP在CTB的N端方向融合。13.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中在所述重组蛋白中，进一步融合了His
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Asp
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Glu
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Leu(HDEL)。14.根据权利要求13所述的疫苗组合物，其中所述HDEL由SEQ ID NO：11的碱基序列编码。15.根据权利要求13所述的疫苗组合物，其中所述CTB在GnRH的N端方向融合，并且所述HDEL在GnRH的C端方向融合。16.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中在所述重组蛋白中，依次融合了BiP、CTB、GnRH、pFc2和HDEL。17.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙恩珠，李勇直，
申请(专利权)人：巴伊沃爱普有限公司，
类型：发明
国别省市：