猪流行性腹泻(PED)病毒疫苗组合物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及：一种包含由SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的猪流行性腹泻(PED)病毒蛋白；包含该猪流行性腹泻(PED)病毒蛋白的疫苗组合物等。物等。物等。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】猪流行性腹泻(PED)病毒疫苗组合物及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种猪流行性腹泻病毒疫苗组合物，其包含具有SEQ ID NO：5所示氨基酸序列的猪流行性腹泻病毒S1蛋白作为活性成分等。
[0002]本申请要求于2019年4月16日提交的韩国专利申请号10
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2019
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0044008的优先权和权益，其公开内容通过引用整体并入本文。

技术介绍

[0003]猪流行性腹泻(PED)是一种致命的、高传染性的猪肠道疾病，其特征是急性腹泻、呕吐和脱水，造成新生仔猪的高死亡率。这种疾病于1971年在英国首次报道，并迅速传播到整个欧洲，并被认为在20世纪80年代传播到亚洲大陆。最初命名为CV777的冠状病毒类似物于1978年在比利时被确定为病原体。
[0004]为了预防这种PED，需要开发一种亚单位疫苗，作为一种更安全、更经济且在疾病发作时起效更快的策略。亚单位疫苗通过在重组微生物(大肠杆菌或不同的表达系统)中大量生产构成病原微生物的具有已知抗原性的结构或非结构蛋白，用作疫苗的抗原蛋白。
[0005]在韩国，普遍使用PED减毒活疫苗，但这种疫苗最大的问题是，虽然减毒了，但病毒是活的，所以它们恢复毒性且成为致病性的，因此可能存在安全问题。另外，在疫苗研发中，对于减毒而言，在动物细胞中传代100次需要相对较长的时间，因此对突变率高的病毒难以快速反应，由于使用动物细胞培养疫苗研发成本也相对较高。
[0006]同时，由于蛋白质折叠或糖基化，用于预防此类疾病的疫苗通常使用动物细胞生产，而不是使用细菌。然而，由于使用动物细胞生产疫苗的方法需要大量成本用于大规模生产的设施扩建，疫苗生产并不容易，而且大多数疫苗价格昂贵。此外，使用动物细胞生产的灭活病毒疫苗不仅难以储存，而且存在极易被可感染动物的病毒污染的缺点。但是，与动物细胞不同的是，植物细胞被感染动物的病毒污染的可能性极低，只要保证培养面积，就可以随时大量生产，并长期保存在植物体内，预计稳定和廉价的疫苗生产是可能的。

技术实现思路

[0007]技术问题
[0008]本专利技术是为了解决根据传统技术的上述问题而提出的，其目的在于提供一种重组PED病毒蛋白，其不仅能够利用植物体进行高效生产，而且显示高免疫原性和病毒中和能力，一种包含重组PED病毒蛋白的疫苗组合物以及制备该蛋白质的方法。
[0009]然而，本专利技术要解决的技术问题不限于上述问题，本领域普通技术人员通过以下描述将充分理解本文中未描述的其他问题。
[0010]技术方案
[0011]本专利技术提供一种PED病毒疫苗组合物，其包含具有SEQ ID NO：5所示氨基酸序列的PED病毒蛋白作为活性成分。PED病毒蛋白还可以包括本专利技术范围内SEQ ID NO：5所示氨基酸序列的功能等价物，所述功能等价物是指由于氨基酸的添加、取代或缺失，与氨基酸序列
具有至少60％或更多，优选70％或更多、更优选80％或更多、最优选90％或更多的序列同源性，并且表现出与SEQ ID NO：5表示的氨基酸序列基本相同的活性，只要是可以使用植物体稳定生产的PED病毒蛋白的氨基酸序列即可，本专利技术不限于此。
[0012]此外，本专利技术提供一种用于预防或治疗PED的饲料组合物，其包含PED病毒蛋白作为活性成分。
[0013]此外，本专利技术提供一种通过将PED病毒蛋白施用于个体来预防或治疗PED的方法。
[0014]此外，本专利技术提供了PED病毒蛋白用于预防或治疗PED的用途。
[0015]此外，本专利技术提供了PED病毒蛋白在制备PED疫苗或药物中的用途。
[0016]此外，本专利技术提供了一种表达PED病毒蛋白的载体，其包括编码SEQ ID NO：5所示氨基酸序列的多核苷酸。所述多核苷酸优选为SEQ ID NO：1所示多核苷酸序列。
[0017]在本专利技术的一个实施方式中，在载体中，启动子基因和编码SEQ ID NO：5所示氨基酸序列的多核苷酸可以依次可操作地连接。
[0018]在本专利技术的另一个实施方式中，载体可以具有图1所示的结构，但本专利技术不限于此。
[0019]在本专利技术的又一实施方式中，载体还可以包括编码选自由内质网(ER)信号肽、Fc片段和分子伴侣结合蛋白(BiP)组成的组中的一种或多种的基因，但本专利技术不限于此。
[0020]在本专利技术的又一个实施方式中，ER信号肽可以是选自由KDEL、HDEL、SEKDEL、KHEDL、KEEL和SEHEDL表示的肽序列组成的组中的一种，但本专利技术不限于此。
[0021]在本专利技术的又一个实施方式中，启动子可以是花椰菜花叶病毒来源的35S启动子、花椰菜花叶病毒来源的19S RNA启动子、植物肌动蛋白启动子、泛素蛋白启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子、猿病毒40(SV40)启动子、呼吸道合胞病毒(RSV)启动子、延伸因子
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1α(EF
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1α)启动子、pEMU启动子、MAS启动子、组蛋白启动子或Clp启动子，但本专利技术不限于此。
[0022]在本专利技术的又一个实施方式中，重组表达载体还可包括编码伴侣结合蛋白(BiP)的多核苷酸、编码His
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Asp
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Glu
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Leu(HDEL)肽的基因和编码猪免疫球蛋白Fc片段的基因。
[0023]此外，本专利技术提供了用该载体转化的转化体。
[0024]在本专利技术的一个实施方式中，转化体优选为微生物如大肠杆菌、芽孢杆菌、沙门氏菌或酵母，昆虫细胞、动物细胞(包括人细胞)、动物如小鼠、大鼠、狗、猴、猪、马或牛、根癌农杆菌或植物，更优选粮食作物如水稻、小麦、大麦、玉米、豆、马铃薯、红豆、燕麦或高粱；蔬菜作物如拟南芥、大白菜、白萝卜、红辣椒、草莓、番茄、西瓜、黄瓜、卷心菜、甜瓜、南瓜、大葱、洋葱或胡萝卜；特色作物如人参、烟草、棉花、芝麻、甘蔗、甜菜、紫苏、花生或油菜籽；果树如苹果树、梨树、枣树、桃子、葡萄、橘子、柿子、李子、杏子或香蕉；以及花卉如玫瑰、康乃馨、菊花、百合、郁金香，只要转化体是可以用本专利技术的载体转化的生物，本专利技术不限于此。
[0025]此外，本专利技术提供了一种生产PED病毒蛋白的方法，包括：(a)培养转化体；(b)从转化体或培养液中分离纯化PED病毒蛋白。转化体优选为细胞本身、植物体或包含细胞的培养物，培养液优选为在细胞培养后除去细胞的培养液。只要培养液包含本专利技术的重组抗原，本专利技术不限于此。
[0026]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(b)的纯化可以是使用水相部分的纯化，但本专利技术不限于此。
[0027]有益效果
[0028]本专利技术的重组PED病毒S1蛋白不仅在植物体内有效表达，而且水溶性高，易于分离纯化，在体内作为抗原发挥作用，从而表现出较高的免疫原性和病毒中和能力。因此，重组PED病毒S1蛋白预期广泛应用于各个领域。此外，由于在体内具有显著的免疫原性和病毒中和能力，重组PED病毒S1蛋白可作为新型PED疫苗组合物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种猪流行性腹泻病毒疫苗组合物，包含具有由SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的猪流行性腹泻病毒蛋白作为活性成分。2.一种用于预防或治疗猪流行性腹泻的饲料组合物，包含具有由SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的猪流行性腹泻病毒蛋白作为活性成分。3.一种预防或治疗猪流行性腹泻的方法，通过将权利要求1所述的疫苗组合物施用于除人以外的动物。4.一种用于表达猪流行性腹泻病毒蛋白的载体，包含由SEQ ID NO：1所示的多核苷酸序列。5.根据权利要求4所述的载体，其具有图1中所示的结构。6.根据权利要求5所述的载体，还包含编码选自由内质网信号肽，Fc片段和分子伴侣结合蛋白（BiP）组成的组中的一种或多种的基因。7.根据权利要求6所述的载体，其中，所述内质网信号肽是选自由...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙恩珠，李勇直，
申请(专利权)人：巴伊沃爱普有限公司，
类型：发明
国别省市：