抑制剂及其用途制造技术

本发明专利技术涉及IGFBP5和/或至少其受体之一的抑制剂，其中所述抑制剂具有抗纤维化作用，其生产方法、包含所述抑制剂的药物组合物和其用途。特别地，本发明专利技术涉及特异性结合至人IGFBP5和/或至少其受体之一的抗体或其抗原结合片段。段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抑制剂及其用途


[0001]本专利技术涉及IGFBP5和/或至少其受体之一的抑制剂，其中所述抑制剂具有抗纤维化作用，其生产方法、包含所述抑制剂的药物组合物和其用途。特别地，本专利技术涉及特异性结合至人IGFBP5和/或至少其受体之一的抗体或其抗原结合片段。

技术介绍

[0002]IGFBP5
[0003]胰岛素样生长因子结合蛋白构成了由六种结合蛋白组成的家族，调节胰岛素样生长因子(IGF)的生物利用度。其中，胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP5)是IGFBP家族中最保守的成员(Schneider，等Journal of Endocrinology 172，423
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440(2002))；它以高亲和力结合IGF，与IGF
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1或
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2和酸不稳定亚基(ALS)形成三元复合物(Baxter等Am J Physiol Endocrinol Metab.278：E967
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E976(2000))。
[0004]除了能够调节IGF利用度外，IGFBP5也被证明具有IGF
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非依赖性功能(Schneider，等Journal of Endocrinology 172，423
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440(2002))。事实上，它能够通过诱导胞外基质(ECM)基因的表达直接促进纤维变性，并间接地通过增加其他具有促纤维化活性的生长因子(例如结缔组织生长因子(CTGF))的水平，导致ECM产生的进一步增加。除了调节ECM和生长因子基因，IGFBP5还增加了赖氨酰(Lysyl)氧化酶(LOX)的表达，该酶负责交联基质，使ECM对蛋白水解降解更具抗性。此外，IGFBP5可以结合ECM组分并保护它们不被降解，从而促进ECM积累和纤维变性，并改变组织结构和功能。此外，IGFBP5促进其自身的表达，产生正反馈回路(Nguyen等Frontiers in Endocrinology.9：601(2018))。IGFBP5是纤维变性中重要的介导物，是已知促纤维化因子(如转化生长因子β(TGF
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β)信号转导)的上游。所有这些数据强烈表明，IGFBP5通过直接诱导ECM和促纤维化基因的大部分的表达发挥其促纤维化活性。最后，虽然大多数药物只靶向级联下游的一个单个的促纤维化因子，但是通过靶向IGFBP5，我们将能够阻断整个通路，从而下调几种促纤维化因子和ECM基因。
[0005]据我们所知，目前尚无针对IGFBP5的，能够抑制IGFBP5促纤维化活性，和对靶组织/细胞的其他有害作用的市售单克隆抗体。
[0006]IGFBP5在特发性肺纤维化中
[0007]特发性肺纤维化(IPF)是一种非肿瘤性慢性肺部综合征，其特征在于成纤维细胞/肌成纤维细胞的异常积累和肺实质的进行性异常重塑，随后瘢痕形成和其结构与功能的破坏。尽管最近取得了相当大的进展，但是目前的治疗方案基本上没有希望，从诊断日起，中位生存率小于三年(Sureshbabu等Pulmonary Medicine.517687(2011))。
[0008]IPF的核心事件是肺损伤后成纤维细胞的异常增殖和向肺泡腔迁移。虽然在正常的情况下，成纤维细胞对伤口愈合和结缔组织的产生很重要，但在纤维化的肺中，它们功能失控，导致成纤维细胞灶(fibroblastic foci)的形成，所述成纤维细胞灶由高度增殖的成纤维细胞、某些免疫细胞和过度的ECM蛋白沉积组成。这些过程的后果是不成比例水平的疤痕组织、肺泡框架的改变、肺上皮结构的变化、功能性肺组织的硬化、肺的气体交换功能丧
失以及血液的氧饱和度急剧下降(Coward，等Ther.Adv.Respir.Dis.4，367
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388(2010))。
[0009]已经证明，当从IPF的患者的纤维化肺组织中培养原代成纤维细胞时，IGFBP5在胞外环境中增加，且IGFBP5沉积在这些细胞产生的ECM中。
[0010]此外，腺病毒介导的IGFBP5的表达，或加入重组的IGFBP5，导致原代正常成人肺成纤维细胞产生的ECM增加(Pilewski等Am J Pathol 166(2)：399
‑
407(2005))。
[0011]有趣的是，还观察到鼠皮肤纤维变性模型的转基因小鼠利用IGFBP5的过度表达来促进促纤维化环境，导致成纤维细胞激活，肌成纤维细胞转化和ECM的沉积增加(Yasuoka等，Am.J.of Pathology 169(5)：1633
‑
42.(2006))。使用该模型，证明了IGFBP5以IGF
‑
非依赖性方式发挥其促纤维化作用(Yasuoka等Plos One 9(2)2014)。
[0012]IGFBP5在硬皮病中
[0013]全身性硬化症(SSc)是一种罕见的全身自身免疫性结缔组织疾病，特征为血管病变、免疫失调和进行性纤维变性，主要影响皮肤、胃肠道、肺、心脏和肾(Henes等Haematologica.(2020))。它与疾病相关的高死亡率有关，主要死因与心脏、肺部和肾脏受累有关。仍然没有有效的治疗以预防或阻止SSc和其他纤维变性疾病中纤维变性的进展(Tyndall等Ann Rheum Dis.69(10)：1809
‑
1815(2010))。
[0014]皮肤和内脏器官的过度纤维变性是由于成纤维细胞增殖和ECM的过度产生(Henes等Haematologica.(2020))。纤维化改变导致皮肤和其他器官中的正常组织学结构的破坏。
[0015]IGFBP5似乎参与了纤维变性的早期，它可能是ECM产生的起始事件，表明它参与了SSc的纤维变性的发展。事实上，已经证明，与健康双胞胎的皮肤相比，从患有SSc的患者的疾病受累皮肤体外培养的原代成纤维细胞中，IGFBP5的mRNA和蛋白质水平的表达增加。还证明了IGFBP5诱导从成纤维细胞产生胶原蛋白和纤连蛋白(FN1)，并诱导成纤维细胞/肌成纤维细胞在体外和体内转分化(Yasuoka等，American Journal Of Pathology169(5)：1633
‑
42.(2006))。此外，使用复制缺陷型腺病毒体内过表达IGFBP5，诱导小鼠中皮肤纤维变性，其包括真皮厚度增加和胶原束厚度增加(Henes等Haematologica.(2020))。随着IGFBP5的过度表达，真皮成纤维细胞中α平滑肌肌动蛋白(α
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SMA)和波形蛋白的表达也明显增加。
[0016]IGFBP5在SSc和IPF中过表达(Nguyen X
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X，MuhammadL，Nietert PJ和Feghali
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Bostwick C(2018)Front.Endocrinol.9：601.doi：10.3389/fendo.2018.00601表明，抑制IGFBP5功能的策略可能对改善纤维变性有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种IGFBP5和/或至少其受体之一的抑制剂，其中所述抑制剂具有抗纤维化作用和/或抗纤维变性活性。2.一种IGFBP5和/或至少其受体之一的抑制剂用于治疗和/或预防纤维变性和/或纤维化病症。3.如权利要求1或2所述的抑制剂，其中所述抑制剂选自下组：a)多肽；b)多核苷酸或编码所述多肽的多核苷酸；c)包含或表达所述多核苷酸的载体；d)经遗传工程改造表达所述多肽或所述多核苷酸的宿主细胞；e)小分子；f)肽、蛋白质、抗体、反义寡核苷酸、siRNA、反义表达载体或重组病毒。4.如前述权利要求中任一项所述的抑制剂，其中所述抑制剂是结合至人IGFBP5或结合至至少其受体之一的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段具有抗纤维化作用。5.如前述权利要求中任一项所述的抑制剂，其中所述抑制剂抑制、减少或中和由促纤维化介导物诱导的αSMA的形成和/或其抑制、减少或中和由促纤维化介导物诱导的FN1表达的激活。6.如前述权利要求中任一项所述的抑制剂，其中所述抑制剂是结合至人IGFBP5且具有抗纤维化作用的分离的抗体或其抗原结合片段。7.如权利要求6所述的抑制剂，其包括：a.重链可变结构域(VH)，其包括：i.选自下组的氨基酸序列的CDR1序列：SEQ ID NO：1、2、3、4和5；ii.选自下组的氨基酸序列的CDR2序列：SEQ ID NO：6、7、8、9、10和11；和iii.选自下组的氨基酸序列的CDR3序列：SEQ ID NO：12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25和26；和/或b.轻链可变结构域(VL)，其包含：i.选自下组的氨基酸序列的CDR1序列：SEQ ID NO：27、28、29、30、31、32、33、34、35和36；ii.选自下组的氨基酸序列的CDR2序列：SEQ ID NO：37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47；和iii.选自下组的氨基酸序列的CDR3序列：SEQ ID NO：48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60。8.如权利要求6或7中任一项所述的抑制剂，其包括：a.重链可变结构域(VH)，其包括：i.选自下组的氨基酸序列的CDR1序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列，优选示于表4.1的；ii.选自下组的氨基酸序列的CDR2序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列，优选示于表4.1的；和iii.选自下组的氨基酸序列的CDR3序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义
的序列，优选示于表4.1的；和b.轻链可变结构域(VL)，其包含：i.选自下组的氨基酸序列的CDR1序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列，优选示于表4.1的；ii.选自下组的氨基酸序列的CDR2序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列，优选示于表4.1的；和iii.选自下组的氨基酸序列的CDR3序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列，优选示于表4.1的。9.如权利要求6
‑
8中任一项所述的抑制剂，其包括：a.重链可变结构域(VH)，其包括：i.选自下组的氨基酸序列的CDR1序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列，优选示于表5.1的；ii.选自下组的氨基酸序列的CDR2序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列，优选示于表5.1的；和iii.选自下组的氨基酸序列的CDR3序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列，优选示于表5.1的；和b.轻链可变结构域(VL)，其包含：i.选自下组的氨基酸序列的CDR1序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列，优选示于表5.1的；ii.选自下组的氨基酸序列的CDR2序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列，优选示于表5.1的；和iii.选自下组的氨基酸序列的CDR3序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列，优选示于表5.1的。10.如权利要求6
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9中任一项所述的抑制剂，其包括：a.选自下组的氨基酸序列的重链可变结构域序列：SEQ ID NO：61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74和75或b.选自下组的氨基酸序列的轻链可变结构域序列：SEQ ID NO：76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89和90，或c.(a)的重链可变结构域和(b)的轻链可变结构域。11.如权利要求6
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10中任一项所述的抑制剂选自下组：A09、B06、C02、D10、F05、B09、B11、C11、C12、D12、E02、E03、E05、F04、G01，优选所述分离的抗体或其抗原结合片段是抗体B06或B09。12.如权利要求11所述的抑制剂，其包括选自表2的VH CDR1、CDR2和CDR3和选自表3的VL CDR1...

【专利技术属性】
技术研发人员：G，
申请(专利权)人：恩瑟拉有限责任公司，
类型：发明
国别省市：